نموذج إصابة المورفولوجية في فيفو لدراسة نيوروريجينيريشن في الطرفية والجهاز العصبي المركزي

ملخص

نقدم هنا، بروتوكول باستخدام المورفولوجية الحسية العصبية-نموذج الإصابة العصبية الجذعية أربوريزاتيون (دا)، الذي يجمع في فيفو يعيش التصوير واثنين-فوتون الليزر أكسوتومي/ديندريوتومي والأدوات الوراثية يطير قوية، منصة لفحص المروجين ومثبطات نيوروريجينيريشن المحتملة.

الملخص

ويحكم قدرة نمو الخلايا العصبية التالفة نيوروريجينيريشن واسترداد الفنية بعد الصدمة العصبي. على مدى العقود القليلة الماضية، تم تحديد الذاتية والخارجية المثبطة العوامل المختلفة المشاركة في تقييد التجدد إكسون. ومع ذلك، ببساطة إزالة هذه الإشارات المثبطة لا تكفي للتجديد الناجح، مما يشير إلى وجود إليه تنظيمية إضافية. وتشاطر melanogaster المورفولوجية، ذبابة الفاكهة، الجينات تقحم المصانة ومسارات الإشارات مع الفقاريات، بما في ذلك البشر. الجمع بين الأدوات الوراثية قوية من الذباب بالليزر اثنين-فوتون أكسوتومي/ديندريوتومي، ونحن تصف هنا العصبية الحسية المورفولوجية – نموذج الإصابة العصبية الجذعية أربوريزيشن (دا) كمنصة للفحص بشكل منتظم للرواية تجديد المنظمين. بإيجاز، يتضمن هذا النموذج أ) إعداد اليرقات، وتحريض ب) الآفة إلى dendrite(s) أو axon(s) استخدام الليزر اثنين-فوتون، ج) يعيش [كنفوكل] التصوير بعد الإصابة ود) تحليل البيانات. لدينا نموذج يمكن استنساخه بشدة إصابة واحدة من الخلايا العصبية المسماة ومحاور عصبية و dendrites من الأنواع الفرعية العصبية محددة تحديداً جيدا، في كل من الأجهزة الطرفية والجهاز العصبي المركزي.

المقدمة

عجز محاور عصبية لتجديد بعد إصابة الجهاز العصبي المركزي (CNS)، قد تؤدي إلى الإعاقة الدائمة في المرضى، وتلعب أيضا دوراً في العجز العصبية لا رجعة فيها في أمراض الأعصاب^{1،2 3، ،،}من⁴⁵. البيئة الجهاز العصبي المركزي، فضلا عن القدرة الجوهرية نمو الخلايا العصبية، تحديد ما إذا كانت محاور عصبية قادرة على تجديد بعد الصدمة. عوامل خارج الخلية من أوليجوديندروسيتي، أستروجليال، ومصادر الليفية قد ثبت أن تعوق نمو الخلايا العصبية^4،6،،من

البروتوكول

1-إعداد لوحات الثقافة وزجاجات

1. إعداد لوحات أجار عصير العنب
   1. إضافة 10 غم من مسحوق أجار وعصير العنب 200 مل مل 192 ddH₂س في الكأس والموجات الدقيقة لحوالي 4-5 دقيقة، مع التحريك بشكل متقطع حتى يذوب في أجار تماما.
   2. في غطاء دخان، يبرد حل حوالي 60 درجة مئوية. إضافة الإيثانول 95% مل 4.2 و 4.0 مل حمض الخليك الجليدية. ضبط الحجم الكلي للحل إلى 400 مل مع مزيج O. ddH₂أيضا.
   3. لكل لوحة 35 ملم، إضافة حوالي 2-3 مل الحل. جعل حوالي 120-150 لوحات لما مجموعة 400 مل عصير العنب أجار الحل.
   4. انتظر 10 دقائق يبرد اللوحات وترسيخ الحل أجار. حزمة عصير العنب لوحات أجار في أكياس ziplock الذاتية مختومة وتخزينها عند 4 درجة مئوية لاستخدا....

النتائج

الخلايا العصبية دا إظهار التجدد التفاضلية المحتملة بين الأجهزة الطرفية والجهاز العصبي المركزي، فضلا عن خصوصية الفئة. وهذا يوفر فرصاً فريدة للشاشة لرواية العوامل المطلوبة لتجديد إكسون (باستخدام فئة الإصابة الرابعة السندات الإذنية)، فضلا عن تلك التي المثبطة للتجدد (مع إصابة "الجهاز العصبي المركزي الرابع" فئة وفئة إصابة الثالث السندات الإذنية).

إكسون التجدد في السندات الإذنية

المناقشة

عند تقاطع إعداد الطيران، يمكن أن تختلف عدد الإناث والذكور المستخدمة تبعاً الأنماط الجينية وعدد اليرقات بحاجة لإجراء تجارب محددة. لوزن الذباب، يستخدم الصليب النموذجية 10 من الإناث والذكور 5. وقد ضاقت الإطار مجموعة، تبعاً لدقة سن اليرقات المطلوبة. على سبيل المثال، سوف تسفر عن فترة جمع 2-ح يرقات سكان أكثر تجانساً. في هذه الحالة، سوف يساعد استخدام الإناث 20 أو أكثر العذراء لإعداد الصلبان تسفر عن البيض كافية. العائد من اليوم الأول عادة الشحيحة، وجمع حتى اللوحة مع البيض اثنين أو أكثر من أيام بعد إعداد الدائرة. عند زيادة استزرا.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
ثنائي إيثيل الأثير ، كاشف ACS ، اللامائي	Acros Organics	AC615080010
Halocarbon 27 Oil	Genesee Scientific	59-133
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، تركيز 20x ، درجة الحموضة 7.5 ، المورد # E703-1L	VWR	97062-948   ؛
مسحوق أجار ، ألفا إيزار ، 500 جرام	VWR	AAA10752-36
عصير عنب	ويلش s
الإيثانول 95٪ (كاشف الكحول 95٪)	VWR	64-17-5
حمض الخليك	Sigma-Aldrich	A6283
حمض البروبيونيك	JTBaker	U33007
نظارات الغطاء: مستطيلات	فيشر Scientific	12-544-D	50 مم × 22 مم
Zeiss LSM 880 مجهر المسح الضوئي بالليزر	Zeiss
برنامج Zen	Zeiss
Chameleon Ultra II	متماسك