Method Article

האף הפרש הפוטנציאלים לכמת תחבורה טרנס-אפיתל יון בעכברים

DOI:

10.3791/57934

⸱

July 4th, 2018

 , 
1Louvain Center for Toxicology and Applied Pharmacology (LTAP), Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Université Catholique de Louvain

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי למדוד את הפרש הפוטנציאלים האף בעכברים. הבדיקה מכמת את הפונקציה של יון transmembrane מובילים כגון המתקן מוליכות transmembrane סיסטיק פיברוזיס, תעלת נתרן אפיתל. זה חשוב כדי להעריך את היעילות של טיפולים חדשניים סיסטיק פיברוזיס.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הבדיקה הפרש פוטנציאל האף שימש כמעט שלושה עשורים כדי לסייע באבחון של סיסטיק פיברוזיס (CF). זה הוכיח להיות מועיל במקרים של הקלוש, oligo - או מונו-צורות סימפטומטי של CF מאובחן בדרך כלל בשלב מאוחר בחיים ועל הפרעות הקשורות CF כגון היעדרות הדו-צדדיים מולדות של צינור הזרע, אידיופטית דלקת לבלב כרונית, אלרגיות bronchopulmonary aspergillosis, ברונכיאקטזיס. הגדרות קלינית והן פרה, המבחן שימש סמן כדי לכמת את התגובות יישוב אסטרטגיות טיפוליות עבור עדכון טווח CF. הבדיקה כדי עכבר הוא מאתגר, יכולה להצריך של התמותה המשויך. מאמר זה מתאר את העומק נאותה של הרדמה נדרש לשמור עם קטטר האף בחיי עיר עבור זלוף רציפה. זה פירוט צעדים כדי למנוע broncho-השאיפה של פתרונות perfused באף. הוא גם מתאר את הטיפול בבעלי חיים בסוף הבדיקה, כולל ניהול של שילוב של נוגדנים תרופות הרדמה, מובילים במהירות להחזרתם ההרדמה עם שחזור מלא של בעלי החיים. נציג נתונים שהושגו CF, עכבר פראי-סוג מראים כי המבחן מפלה בין CF ו- CF. בסך הכל, הפרוטוקול המתואר כאן מאפשר מדידות אמין למעמד הפונקציונאלי של מובילי הנתרן הכלוריד הטרנס-אפיתל בעכברים נושם באופן ספונטני, כמו גם בדיקות מרובות של אותה חיה תוך צמצום הקשורות מבחן התמותה.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמעט שלושה עשורים, מדידות הפרש (PD) פוטנציאל חשמלי שימשו כדי להעריך את המצב פונקציונלי של מובילי יון transmembrane באים לביטוי עם רירית האף, כנציג של דרכי הנשימה דיסטלי1. מאחר דינמי רב-שלבי בוחן2,3, אפי PD מאפשר ניתוח תפקודי של סיסטיק פיברוזיס Transmembrane מוליכות הרגולטור (CFTR) ופעילות ערוץ (ENaC) נתרן אפיתל, שניהם מקומי על הממברנות הפסגה של תאים אפיתל, מתאמצת לקבל תפקידים חיוניים בהידרציה פני דרכי הנשימה. היישום הקליני העיקריים של הבדיקה PD האף היא לסייע באבחון של CF, הפרעה גנטית קטלנית הנפוץ ביותר באוכלוסיות לבנה עם שכיחות ממוצע של 1 מתוך 2500 לידות חי בארצות אירופה. המבחן הוכיח זמ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לימודיו ואת הנהלים אושרו על ידי ועדת האתיקה לחקר בעלי חיים של הכיול (2017/UCL MD 015), מסכים עם תקנות הקהילה האירופית לשימוש בבעלי חיים במחקר (CEE n ° 86/609). החוקרים כשירים אליה בבע ח בעקבות הוראה 2010/63/האיחוד האירופי של הפרלמנט האירופי ושל המועצה של 22 ספטמבר 2010 בנושא ההגנה על בעלי חיים משמשים למטרות מדעיות.

1. מראש מבחן הערכת וניהול

  1. הכינו את הצנתר האף לומן כפול.
    הערה: קטטר האף עשוי כמו צינור קפילרי לומן כפול, לומן אחד שמשמש את זלוף רציפה של פתרונות, והשני אחד כמו המדידה ערוץ.
    1. מחממים את החלק המרכזי של חתיכה, בערך 20 ס מ באורך, צינור פוליאתילן (2.0 מ מ קוטר פנימי; הקוטר החיצוני 3.0 מ מ; איור 1....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי להמחיש את העיוותים תחבורה יון אופיינית ב- CF, בוצעו מדידות PD באף בעקבות הפרוטוקול המתואר לעיל על העכבר F508del-CF, פקד פראי-סוג של FVB/129 רקע גנטי מהמושבה בריסל של Cftrtm1Eur עכברים30. מודל זה הרלוונטית קלינית, מחסה השכיחה ביותר ואחד חמור ביותר F508del-CFTR מוטציה23,24,25, הוא הטוב ביותר זמין כעת CF העכבר דגם30,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מטרת המאמר היא לתאר את פרוטוקול נאותה למדידת PD באף תחת זלוף רציפה של פתרונות בעכברים באופן ספונטני נשימה עבור משך הזמן הדרוש לבדיקת השלמות של יון מובילים, בעיקר CFTR, ENaC. כל השלבים של הפרוטוקול מוטבו בקפידה כדי להבטיח התאוששות מלאה בבעלי חיים, איכות טובה, לשחזור נתונים. בשלבים מסוים, קריטיים הרדמה הערכת ניהול ואת עמדת בעלי חיים נאותה, אכפת לי במהלך ואחרי הבדיקה.

מחקרים קודמים הראו כי המטוס 2 בשלב השלישי של חשיפה הרדמה, אשר יכולה להיות מושגת על-ידי החלת את התערובת קוקטייל להשתמש כאן

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים תודה פרופסור ג'יי Lebacq לעריכה באופן ביקורתי את כתב היד. Cftrtm1Eur (homozygous F508del-CFTR (FVB/129) עכברים פותחו על-ידי MC ארסמוס, רוטרדם, הולנד, עם התמיכה של הקהילה הכלכלית האירופית פעולה תיאום האירופית לחקר FP6 האיחוד האירופי סיסטיק פיברוזיס LHHM-CT-2005-018932.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
צינור פוליאתילן פורטקס סמיתס מדיקל, היית', קנט, אנגליה CT21 6JLפורטקס 800/100/500; 2.0 מ"מ ID, 3.0 מ"מ ODלהכנת צינורות נימיים לבדיקת
קרם אלקטרודותפרקר, פיירפילד, ניו ג'רזי, ארה"בקרם Reduxלבניית גשרי אלקטרודות
Ag / AgCl אלקטרודותביומדיק, קלינטון טאונשיפ, מישיגן, ארה"בJNS BNT131-1,0אלקטרודות מדידה וייחוס
אמילוריד הידרוכלורידסיגמה, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בA7410להכנת תמיסות
פורסקוליןסיגמה, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בF6886להכנת פתרונות זלוף
מד מתח Knick PortamessElektronisch Meβ gerä te, ברלין, גרמניהPortavo 904 pHלמדידת הפרש פוטנציאל
Paraly SW 112 תוכנה Elektronisch Meβ gerä te, ברלין, גרמניהתוכנת Paraly SW112ללכידת נתוני הפרש פוטנציאליים
midazolam מיילן, הוילארט, בלגיהדורמיקום 15 מ"ג/3 מ"ללשמש כתרופה מרדימה
פנטנילJanssen Cilag, Berchem, בלגיהפנטניל-יאנסן 0.05 מ"ג/מ"ללשמש כתרופת הרדמה
medetomidineOrion Pharma, אספו, פינלנדדומיטור 1 מ"ג/מ"ללשמש כתרופת הרדמה
דרופרידול יאנסן  סילאג, ברכם, בלגיהדהידרובנזפרידול 2.5 מ"ג/מ"ללשמש כתרופת הרדמה
קלונידין Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim am Rhein, גרמניהCatapressan 0.15 מ"ג/מ"ל,לשמש כמפנה לתרופות הרדמה
צנתר IVBecton Dickinson, Sandy, UT, ארה"ב24 GA x 0.75 IN, BD Insyte-Wלבניית גשרי אלקטרודות
מלקחיים כלים מדעיים יפים, היידלברג, גרמניהDumont #5, כלים מדעיים עדיניםלהצבת קטטר האף
נלוקסון Braun Medical, בריסל, בלגיהנרקן, 0.4 מ"ג/מ"ללשמש כנוגד הרדמה
אטיפמזול Zoetis, בלומברג, אנטיסדאן בלגי, 5 מ"ג/מ"ללשמש כתרופה ספציפית לרפואה
כריות חימום Harvard Apparatus, Holliston, MA, ארה"18,8x37,5 ס"מ; 15,5x15,5 ס"מלמניעת היפותרמיה במהלך ואחרי הבדיקה
משאבה פריסטלטית P1GE Life Sciences, אופסלה, שוודיה18111091להחדרת תמיסות באף העכבר
דבק ציאנואקרילטLoctite, Henkel, Dü סלדורף, גרמניה דבק סופר 3להדבקת שני צינורות נימיים  לבדיקת אף
NaClSigma, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בRES0926S-A7Pharma-Grade, USP
CaCl2.2H2OSigma, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בM7304Pharma-Grade, USP
MgCl2.6H2OSigma, סנט לואיס, מישיגן, ארה"ב1551128Pharma-Grade, USP
K2HPO4Sigma, סנט לואיס, מישיגן, ארה"ב1551139בדרגת פארמה, USP
Na גלוקונאטסיגמא, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בS2054בדרגת פארמה, USP
Ca גלוקונאטסיגמא, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בC8231בדרגת פארמה, USP
MgSO4.7H2Oסיגמא, סנט לואיס, מישיגן, ארה"בRES0089M-A7בדרגת פארמה, מחט BD USP
 בקטון דיקינסון, פרנקלין לייקס, ארה"בBD 26G (0.45x10 מ"מ)הזרקה תוך צפקית
אף זלוףב

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Knowles, M., Gatzy, J., Boucher, R. Increased bioelectric potential difference across respiratory epithelia in cystic fibrosis. New England Journal of Medicine. 305 (25), 1489-1495 (1981).
  2. Middleton, P. G., Geddes, D. M., Alton, E. F. W.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Nasal Potential DifferenceTrans epithelial Ion TransportCystic Fibrosis Mouse ModelDouble Lumen Nasal CatheterPeristaltic Pump PerfusionAmiloride Response MeasurementChloride Free ResponseForskolin Response AnalysisAnesthesia Administration ProtocolAnimal Recovery Procedure

Related Articles