Méthodes pour mesurer les réponses sympathiques et cardiovasculaires aux manipulations du système nerveux central (SNC) sont importants pour faire progresser la neuroscience. Ce protocole a été développé pour aider les scientifiques à mesurer et quantifier les changements aigus dans l’activité nerveuse sympathique rénale (RSNA) chez des rats anesthésiés (sans survie).
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Article de méthode
Quantifier les changements aigus dans l’activité nerveuse sympathique rénale en réponse à des Manipulations du système nerveux Central chez le rat anesthésié
Dans cet article
Résumé
Résumé
L’activité nerveuse sympathique rénale (RSNA) et la pression artérielle moyenne sont des paramètres importants dans la recherche cardiovasculaire et le système nerveux autonome ; Cependant, il sont a des ressources limitées, diriger des scientifiques dans les techniques de mesure et d’analyse de ces variables. Ce protocole décrit les méthodes pour mesurer la RSNA et la pression artérielle moyenne chez le rat anesthésié. Le protocole inclut également les approches permettant d’accéder à du cerveau pendant les enregistrements de la RSNA pour des manipulations du système nerveux central (SNC). La technique d’enregistrement de la RSNA est compatible avec pharmacologique, optogenetic, ou la stimulation électrique du SNC. L’approche est utile lorsque l’enquêteur mesurera à court terme (min h) réponses autonomes dans les expériences sans survie en corrélation anatomique avec des noyaux de CNS. L’approche n’est pas prévue pour être utilisé pour obtenir des enregistrements de chronique (survie) de RSNA chez les rats. Rejets au RSNA, en moyenne corrigée RSNA, et la pression artérielle moyenne peut être quantifié et analysés en utilisant des tests statistiques paramétriques. Méthodes pour obtenir des accès veineux, l’enregistrement de la pression artérielle moyenne telemetrically et fixation du cerveau pour des analyses histologiques sont également décrits dans l’article.
Introduction
Des découvertes précliniques sur contrôle autonome du système cardio-vasculaire informent des stratégies de gestion des troubles tels que l’hypertension artérielle, insuffisance cardiaque et l’insuffisance rénale chronique. Une activité excessive du système nerveux sympathique et tonus cardiaque vagal réduit contribuent à la tension artérielle élevée (BP)1. Chroniquement élevé débit sympathique rénale augmente la sécrétion de catécholamines et diminue le débit sanguin rénal, avec des conséquences délétères pour les systèmes cardiovasculaires/rénale2,3. Pour définir les voies neurobiolog....
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Protocole
Toutes les méthodes décrites ont été approuvées par le Comité institutionnel de protection des Animal à l’Université de l’Illinois à Chicago.
1. créer des électrodes bipolaires RSNA
- Pour créer l’électrode, coupez deux morceaux de fil d’acier inoxydable chaque mesure environ 18 mm de long. Couper un morceau de polyéthylène (PE-50) tube environ 15 mm de long. Les deux morceaux de fil dans le tube, en laissant le fil par rapport aux deux extrémités de l’alimentation.
- Enlever l’isolant des extrémités des fils ; Coupez les fils en laissant dépasser 2-3 mm de fil dénudé. À une extrémité, sertir broches mâles sur le fil dénudé.....
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Résultats
La figure 1 illustre un enregistrement de RSNA et BP d’échantillon d’un rat anesthésié Nembutal. Une injection intraveineuse de phényléphrine a été utilisée pour induire une augmentation de la pression artérielle moyenne et pour évoquer le baroréflexe et transitoires sympathoinhibition4,6. Afin de quantifier la RSNA, la RSNA raw a été redressée et inscrivit en 10 segments s sans chevauchement ; l’esti.......
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Discussion
Les étapes essentielles pour mesurer la RSNA comprennent : (1) en évitant de s’étendant de l’artère rénale et des nerfs en séparant les reins des muscles paravertébraux et lorsque vous placez le segment de nerf sur les électrodes d’enregistrement, (2) soigneusement disséqué les fibres nerveuses rénales du tissu environnant/navire, (3) s’assurer que les fils de l’électrode sont libres de tissus, le sang, ou liquide lymphatique et (4) empêchant le nerf ne se dessèchent pas en appliquant l’huile minérale à la nerveuse rénal.......
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Déclarations de divulgation
Anne M. Fink est membre du Conseil consultatif client pour Data Sciences International.
Remerciements
Cette étude a été financée par le National Institute for Nursing Research (K99/R00NR014369).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Fil d’acier inoxydable | A-M Systems ; Sequim, WA | 791000 | RSNA électrode |
| Tube en polyéthylène (PE-50) | VWR ; Radnor, PA | 63019-048 | Électrode RSNA ; canulation de récipient |
| Connecteur à broche miniature | A-M Systems ; Sequim, WA | 520200 | d’électrode RSNA |
| Daniels Manufacturing Corp. ; Orlando, FL | M22520 | Électrode RSNA | |
| Bande de connecteur | Amphenol ; Clinton Township, MI | 221-2653 | Électrode RSNA |
| J-B Kwik Epoxy | J-B Weld, Sulphur Springs, TX | 8270 | Électrode RSNA |
| Silicone | Permatex ; Hartford, CT | 2222 | Électrode RSNA |
| Héparine sodique ; Injectable (flacon de 10 ml, 1000 U/mL) | Approvisionnement vétérinaire KV ; David City, NE | P03466 | Perméabilité des lignes veineuses |
| Phényléphrine HCl ; Injectable (fiole de 1 mL ; 10 mg/mL) | Approvisionnement chirurgical ACE ; Brockton, MA | 950-6312 | Test de la sympathoinhibition rénale |
| Supports chirurgicaux élastiques à crochet unique | Appareil de Harvard ; Holliston, MA | 72-2595 | Incision |
| Ruban chirurgical en soie | 3M, Minneapolis, MN | 1538-0 | Supports chirurgicaux sécurisés |
| Aiguilles, 20 G | Sigma-Aldrich ; St. Louis, MO | Z192554-100EA | Canulation vasculaire |
| Dumont #7 pince incurvée | Outils de science fine ; Foster City, CA | 11274-20 | Cornure vasculaire |
| 5-0 attaches de suture en soie | Braintree Scientific ; Braintree, MA | SUT-S 106 | Canulation |
| Pince hémostatique délicate | Roboz Surgical Instrument Co. ; Gaithersburg, MD | RS-7117 | Canulation vasculaire et chirurgie RSNA |
| Crile Pince hémostatique | Outils de science fine ; Foster City, CA | 13004-14 | Flexion d’aiguille |
| Émetteur de télémétrie | Data Sciences International ; Minneapolis, MN | PA-10 | Surveillance de la pression artérielle moyenne (télémétrie) |
| Seringue de re-gel | Data Sciences International ; Minneapolis, MN | 276-0038-001 | Réutilisation de l’émetteur (télémétrie) |
| Transducteur de pression jetable | Transpac ; San Clemente, CA | MI-1224 | Surveillance de la pression artérielle moyenne |
| Infuseur de pression Clear-Cuff | MILA International Inc. ; Florence, KY | 2281339 | Surveillance de la pression artérielle moyenne |
| Pince de canulation des vaisseaux | Outils de science fine ; Foster City, CA | 00574-11 Insertion du | cathéter |
| Suture en nylon monofilament noir 4-0 sur aiguille de coupe inversée | McKesson Médico-Chirurgical ; San Francisco, CA | S661GX Émetteur | de télémétrie sécurisé |
| Récepteur de télémétrie | Data Sciences International ; Minneapolis, MN | RPC-1 | Surveillance de la pression artérielle moyenne (télémétrie) |
| LabChart Pro (logiciel), PowerLab (matériel d’acquisition) | AD Instruments ; Colorado Springs, CO | ML846, MX2 matrix 2.0 (compatible avec la télémétrie Data Science International) | 3 options pour logiciel/matériel d’acquisition |
| SciWorks (logiciel), DataWave (matériel d’acquisition) | DataWave Technologies, Loveland, CO | N/A | |
| Spike 2 (logiciel), Micro1401-3 | Cambridge Electronic Design Ltd., Londres UK | 1401-3 | |
| Micro-drill | Roboz Surgical Instrument Co. ; Gaithersburg, MD | RS-6300 Chirurgie | du SNC |
| Cadre de chirurgie stéréotaxique | Stoelting ; Wood Dale, IL | 51600 | Chirurgie du SNC |
| Amplificateur à microélectrodes avec préamplificateur 10X | A-M Systems ; Sequim, WA | 1800-2 | RSNA enregistrement |
| Écarteurs | Fine Science Tools ; Foster City, CA | 17009-07 | Chirurgie RSNA |
| Pince à épiler Micro-dissection | Outils de science fine ; Foster City, CA | 11251-10 | RSNA chirurgie |
| Micro-crochet | Outils de science fine ; Foster City, CA | 10064-14 | Chirurgie RSNA |
| Huile minérale | Fisher Scientific ; Waltham, MA | 8042-47-5 | Chirurgie RSNA |
| Moniteur audio | A-M Systems ; Sequim, WA | 3300 | RSNA |
| chirurgie Gel de silice | Wacker, München ; Allemagne | RT601A-B | Chirurgie RSNA |
| Pinces électriques | Tyco Electronics ; Schaffhouse, Suisse | EB0283-000 | Aiguille de mise à la terre ou de sécurisation |
| ciseaux de Bonn, pointes droites/pointues | Roboz Surgical Instrument Co ; Gaithersburg, MD | RS-5840 | Aiguille de gavage de perfusion |
| Appareil de Harvard ; Holliston, MA | 75-0286 | Pompe | |
| perfusion Masterflex | Cole-Parmer ; Vernon Hills, IL | 7524-10 | Tube en |
| silicone durci au platine | Masterflex Cole-Parmer ; Vernon Hills, IL | 96410-15 | Perfusion |
| de formol (solution tamponnée à 10 % ; 4 L) | Sigma-Aldrich ; St. Louis, MO | HT501128 | Perfusion |
| Saccharose | Sigma-Aldrich ; St. Louis, MO | S0389 | Cryoprotection |
Références
- Mancia, G., Grassi, G. The autonomic nervous system and hypertension. Circulation Research. 114 (11), 1804-1814 (2014).
- Kannan, A., Medina, R. I., Nagajothi, N., Balamuthusamy, S. Renal sympathetic nervous system and the effects of denervation on renal arteries. <....
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Réimpressions et autorisations
