تحليلاً تخليق البروتين البربخيه وإفراز

Wei Zhou; Petra Sipilä; Geoffry N. De Iuliis; Matthew D. Dun; Brett Nixon

doi:10.3791/58308

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحليلاً تخليق البروتين البربخيه وإفراز

9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/58308

⸱

أغسطس 25, 2018

Wei Zhou¹^,² , Petra Sipilä³ , Geoffry N. De Iuliis¹^,² , Matthew D. Dun²^,⁴ , Brett Nixon¹^,²

¹Priority Research Centre for Reproductive Science, School of Environmental and Life Sciences, University of Newcastle, ²Hunter Medical Research Institute, ³Department of Physiology, Turku Center for Disease Modeling, Institute of Biomedicine, University of Turku, ⁴School of Biomedical Sciences and Pharmacy, Faculty of Health and Medicine, University of Newcastle

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نحن تقرير توطين الفلورة دينامين لتوضيح البروتوكولات للكشف عن البروتينات في الفروع البربخيه جزءا لا يتجزأ من البارافين الماوس وتلك الخلية البربخيه مخلدة خط (mECap18). ونحن أيضا وصف البروتوكولات من أجل عزل البروتينات الافرازية من السوائل البربخيه وخلية مكيفة وسائل الإعلام.

الملخص

البربخ الثدييات يولد واحد من السوائل intraluminal أعقد من أي الغدة الصماء بغية دعم الخصية بعد نضوج وتخزين المني. وينشأ هذا التعقيد نظراً لنشاط الخلايا الظهارية بطانة افرازية والاستيعابية مجتمعة. هنا، يمكننا وصف تقنيات لتحليل البروتين البربخيه وإفراز بالتركيز على نموذج الأسرة البروتين من ميتشانوينزيميس دينامين (الإدارة)؛ جتباسيس الكبيرة التي لديها إمكانات لتنظيم الاتجار الأحداث غشاء ثنائي الاتجاه. لدراسة التعبير البروتين في الأنسجة البربخيه، يمكننا وصف منهجية قوية لوسم الفلورة البروتينات المستهدفة في أقسام جزءا لا يتجزأ من البارافين والكشف عن اللاحقة للتوزيع المكاني لهذه البروتينات عن طريق مجهر الفلورة. ونحن أيضا وصف المنهجية الأمثل لعزل وتوصيف اكسوسومي مثل حويصلات، المعروفة باسم ابيديديموسوميس، وهي تفرز في التجويف البربخيه للمشاركة في الاتصالات بين الخلايا مع نضوج الخلايا المنوية. كنهج تكميلي، يصف لنا أيضا كشف الفلورة البروتينات المستهدفة في خط خلية الظهارية البربخيه (mECap18) نصيب خلد SV40 ماوس. وعلاوة على ذلك، فإننا نناقش الأداة خط الخلية mECap18 كنموذج مناسب في المختبر لاستكشاف تنظيم نشاط افرازي البربخيه معها. لهذا الغرض، يصف لنا تثقيف متطلبات الصيانة خط الخلية mECap18 واستخدام أنظمة انتقائية تثبيط الدوائية القادرة على التأثير على بروتين افرازي الشخصية. سهولة تقييم هذه الأخيرة عن طريق الحصاد مكيفة الثقافة المتوسطة، وتركيز البروتينات يفرز عن طريق ترسيب حمض التريكلوروسيتيك/الأسيتون وتحليلها لاحقاً عبر الحزب الديمقراطي الصربي صفحة و immunoblotting. نؤكد أن هذه الأساليب مجتمعة مناسبة لتحليل الأهداف البديلة البروتين البربخيه تمهيدا لتحديد دورها الوظيفي في نضوج الحيوانات المنوية و/أو تخزين.

المقدمة

المني من جميع أنواع الثدييات اكتساب القدرة على عرض الحركة التقدمية إلى الأمام وتسميد البويضة خلال تلك النسب المطول عن طريق البربخ، منطقة متخصصة للغاية من النظام الذكور مجرى الهواء خارج الخصية، التي قد 7-14 يوما للتنقل (تبعاً للأنواع الأحيائية)¹. بسبب التكثيف الشديد من الكروماتين الأب وسفك معظم السيتوبلازم الذي يصاحب سيتوديفيرينتييشن المني في الخصيتين، مدفوعة نضج الفنية اللاحقة حصرا بتفاعلها مع المكروية البربخيه. هذا الوسط، يخلق بدوره، بنشاط سوما البربخيه بطانة افرازية والاستيعاب ويعرض مستوى استثنائي من تباين الجزء-الجزء¹. وهكذا، الجزء الأكثر نشاطا من حيث البروتين وإفراز تلك الواقعة في الجزء الأقرب من البربخ (أي نصيب الفر....