Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון

Published: September 14, 2018 doi: 10.3791/58391
Automatic Translation
1, 1, 1
1Division of Cell Biology, La Jolla Institute for Allergy and Immunology

Summary

כאן אנו מציגים שיטה חדשה כדי למדוד במדויק את הבדלי טמפרטורה גוף פסיבי אנפילקסיס מערכתית (PSA), מזון אלרגיה העכבר מודלים באמצעות מד חום אינפרא אדום... הליך זה שוכפל במדויק בתוצאות ה-PSA הקודמת.

Abstract

מדידה טמפרטורת גוף העכבר היא בעלת חשיבות עליונה על חקירת אלרגיה וסימפטומים אנפילקטי. פי הטבעת זונדי טמפרטורות משותף, הם הוכחו להיות מדויק ולא יקר ערך בהקשר זה. עם זאת, שיטה זו של מדידת טמפרטורה דורש העכברים עכשיו כדי להכניס את המכשיר ללא פציעה של החיה. זה מגביל את היכולת להתבונן אחרים פנוטיפים של העכבר בו-זמנית. על מנת לחקור פנוטיפים אחרים תוך מדידת טמפרטורה, הגששים רקטלי אינן אידיאלי, שיטה נוספת היא הרצויה. כאן, אנחנו מציגים שיטה לא פולשנית של מדידת טמפרטורה זה בדרישת הדרישה העכבר הרדמה תוך שמירה על אמינות שווה כדי הגששים רקטלי מדידת טמפרטורת הגוף. אנו משתמשים מד חום אינפרא אדום שמזהה טמפרטורות פני הגוף בטווחים בין 2 ל- 150 מ מ. שיטה זו של מדידת טמפרטורת הגוף הוא מצליח בצורה אמינה שכפול מגמות שינוי טמפרטורה במהלך מערכת פסיבית אנפילקסיס ניסויים בעכברים. אנו מראים כי טמפרטורות פני הגוף הינם כ 2.0 ° C נמוך יותר בדיקה רקטלית מדידות, אך מידת ירידת טמפרטורה בעקבות המגמה זהה. יתר על כן, אנו משתמשים באותה השיטה כדי להתבונן עכברים במודל אלרגיה למזון כדי להעריך את רמות טמפרטורה והפעילות בו זמנית.

Introduction

מדידת טמפרטורת הגוף כבר חלק חיוני של פיקוח על ההשפעות של אנפילקטי הסימפטומים אצל בעלי חיים מודלים1,2. הבדלי טמפרטורה נמדדו באופן מסורתי על ידי בדיקה רקטלית מדחומים עכברים3,4. עם מדידות אלה, החוקרים באופן אמין מצטייר הבדלי טמפרטורה בין משתנים; עם זאת, שיטה זו היא הליך זמן רב וגורם מצוקה לעכברים, אשר יכול להגביר את טמפרטורת הגוף. בדיקה רקטלית יכולה גם לגרום קורע ולדלקת הרירית3. יתר על כן, צריך עכשיו העכברים כדי בצורה הומאנית את הגשוש רקטלית כדי למדוד את טמפרטורת3. זהו תהליך איטי, והיא אוסרת על המידה של טמפרטורות רצופים בתוך תקופה קצרה של זמן. יתר על כן, עכברים פעילות פנוטיפים לא יכול להיות שנצפו במהלך תקופה זו עד מההרדמה הוא לחלוטין נשחק, וזה תהליך גוזלת זמן אחר. לאחרונה, שיטות אחרות אמין כדי למדוד את חום הגוף השתמשו subcutaneously מושתל משדר אינפרא-אדום פסיבי תגיות או משדרי הרדיו הכוללים5,63,חיישן טמפרטורה. למרות שהן מתקבלות כפי המנהג אידיאלי על ידי כמה חוקרים, שיטות אלה הם לא בשימוש נרחב בגלל עלויות ראשוניות גבוהות ומצוקה לעכברים, עקב השתלה כירורגית של חיישן טמפרטורה מתחת לעור או חלק אחר של הגוף.

כדי להדגים כי הפרש הטמפרטורות הוא שיקוף מדויק של סימפטומים מחלת מודל1,2, עכברים חייב להיות ער במהלך מדידת טמפרטורה ולהיות מסוגל לחזור פעילותם פנוטיפי נורמלי מיד לפני ואחרי המדידה. לשם כך, חיפשנו שיטה שבה זה יכול להיעשות.

מטרתנו הייתה למדוד במדויק ובזול העכבר טמפרטורת הגוף, ללא הצורך בהרדמה, ללא הגבלות על פעילות, כדי לאפשר התבוננות פנוטיפים התנהגותיים במהלך ואחרי הזמן של מדידת טמפרטורה. כדי להשיג מטרה זו, היה ברור כי שיטה פחות פולשנית מאשר הטמפרטורה רקטאלית רגילה רגשים היה נדרש. מדחום אינפרא אדום שימשו במשך עשרות שנים ברפואה קלינית, במיוחד ברפואת ילדים כדי להשיג קריאת הטמפרטורות מדויק. זה כבר שיטה חלופית שמותר לה קלינאים להשיג במהירות ובדייקנות מדידות טמפרטורה בתינוקות וילדים בררן כי הם פעיל ניידים. עלינו ליישם את אותה טכניקה בעכברים, פיתחו שיטה מוצלחת כדי להשיג טמפרטורות ללא הרדמה. חשוב לציין, אנו מראים כי בשיטה זו הוא מסוגל משכפל את התוצאות ומבוססת אנפילקסיס מערכתית פסיבי לגבי שינויי טמפרטורה, בעוד גם היכולת לצפות את הפעילות של העכבר במהלך המדידה. יתר על כן, אנו משתמשים באותה השיטה כדי להעריך את חום הגוף של עכברים אלרגיות מזון, כשחקרו בו-זמנית תסמינים אחרים, כדי להדגים כי טמפרטורת הגוף הוא אכן של שיקוף מדויק של רמת פעילות, ותפקיד הכוללת של עכבר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של מכון הויה לאלרגיה ואימונולוגיה.

1. עכבר מדידה טמפרטורת גוף במהלך ההרדמה

  1. הנח את העכבר בתיבת אינדוקציה הרדמה. עזים ומתנגד באמצעות 1 ליטר/דקה זרימת החמצן עם 5% איזופלוריין.
    הערה: ההרדמה היא מאושרת כאשר העכבר מפסיק התנועה הרצונית, היה משותק עבור מעל גיל 30 s. לחלופין, קצב הנשימה הצג, וברגע עכברים נושמים-נשימה 1 לכל כל 2 s או יותר, הוא אישר ההרדמה.
  2. להחזיק את העכבר על ידי העורף של הצוואר עם האצבע והאגודל והחזק את הזנב עם אצבע הזרת על מנת לחשוף את הבטן התחתונה.
  3. מקם את חיישן מד חום אינפרא אדום מתחת בבטן התחתונה תוך החזקת את העכבר עם הגוף שלו במקביל לקרקע.
    הערה: שטוח המשטח החיצוני של המדחום (לא השטח של החיישן) צריך להיות כ 2-5 מ מ מהמשטח של הבטן. התוצאה שכפל של טמפרטורות נמדד בזמן עכברים הם לא מרדימים (המתוארת בסעיף 2). חשוב לקבוע אתר היעד של הבטן. מכוון בין שתי פטמות העליון מאפשר תוצאות עקביות.
  4. החזק על ההדק כדי למדוד את הטמפרטורה. להבטיח את קיום יציבה העכבר על מד חום.

2. העכבר מדידה טמפרטורת גוף ללא הרדמה

  1. הרם את העכבר עד אמצע הזנב.
  2. לחשוף את הבטן של העכבר.
    1. לאפשר את העכבר כדי לשמור על משטח ישר-קצה, כגון השפה של הכלוב פתוח או כלוב-העליון עם לרדווד.
      הערה: פעולה זו מאפשרת את העכבר כדי למתוח את הגוף העליון ולחשוף את הבטן.
    2. לחילופין, לאפשר את העכבר כדי להחזיק ישר-הקצה העליון של המדחום, הפוך את העכבר לשבת על משטח שטוח החיצוני של המדחום עם הבטן שלה רק על חיישן אינפרה אדום.
      הערה: בכל עת שכפות רגליו האחוריות מונחות על פני השטח של המדחום, ודא כי כפות הרגליים הם לא הפרעה החיישן מהמשטח בטן. מדי חום עם הרגל חסימה למדוד לך חום נמוך מזה של הבטן.
  3. החזק על ההדק כדי למדוד את הטמפרטורה.
    הערה: עכברים נוטים לנוע; תשמרי על מדידת באותו המיקום של הגוף באופן עקבי על ידי לקיחת מידות הטמפרטורה כאשר עכברים הם יחסית פחות נייד

3. פסיבי אנפילקסיס מערכתית7

  1. יום 0: לרגש עם אימונוגלובולין E (IgE).
    1. להכין µL 200 (לכל עכבר) של אנטי-dinitrophenyl (DNP) IgE-ריכוז של µg/mL 100 ב- PBS.
    2. Intraperitoneally להזריק µL 200 של IgE אנטי-dinitrophenyl (DNP) המבושלות שלב 3.1.1 או PBS בלבד (PBS בלבד היא הפקד שלילי). שימוש במחט 26 גרם להזרקה. לבצע זריקות לרוחב רק האמצע, בערך בין שתי הפטמות נחות ביותר.
  2. יום 1: לגרום אנפילקסיס עם DNP-HSA.
    1. להכין µL 100 (לכל עכבר) של DNP-HSA-ריכוז של 10 מ"ג/מ"ל ב- 0.9% NaCl.
    2. עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.
    3. למדוד את טמפרטורת הגוף משתמש בטכניקה המתוארת בשלב 1.
    4. מזריקים לווריד µL 100 של DNP-HSA מוכן בשלב 3.2.1. שימוש במחט 30 G להזרקה. לבצע הזריקות על הסינוס ורידים retroorbital. הכנס את המחט בצד המדיאלי של העין בזווית של רדוד, מכוון מאחורי העין.
    5. לאחר ההזרקה, הצב והעכברים בכלובים בודדים. ודא כי העכברים לשחזר מן ההרדמה. שים לב כי הם מתעוררים ולהיות ניידים בהתנדבות.
    6. למדוד את חום הגוף באמצעות מד חום אינפרא אדום ולבחון את פעילותם בכל 10 דקות במשך 70 דקות.

4. העכבר מודל של מזון אלרגיה8,9

הערה: התרשים מוצג באיור2.

  1. יום 0: לרגש העכברים עם ביצית/אלום.
    1. להכין µL 100 (לכל עכבר) של ביצית (0.5 mg/mL), אלום (10 mg/mL) ביחד ב- PBS. מערבולת על ההגדרה נמוכה במשך 30 דקות.
    2. עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.
    3. באמצעות מחט 26 גרם, מזריקים intraperitoneally העכבר כל 100 µL של ביצית/אלום תערובת מוכנה בשלב 4.1.1.
      הערה: מערבולת התערובת ביצית/אלום שוב, בקצרה לפני כל זריקה, הכי טוב לוודא תערובת homogenized. ראה שלב 3.1.3 לפרטים באתר הזרקת.
    4. לאחר ההזרקה, עכברים המקום בחזרה בכלובים המקורי שלהם. ודא כי העכברים לשחזר מן ההרדמה. שים לב כי הם מתעוררים ולהיות ניידים בהתנדבות.
  2. יום 14: מבצע רגישות עולה השני עם ביצית/אלום.
    1. חזור על שלבים 4.1.1 4.1.2, 4.1.3.
  3. בימים 28-46: אתגר העכברים עם ביצית בכל יום אחר.
    1. להכין µL 100 (לכל עכבר) של ביצית-ריכוז של 250 מ"ג/מ"ל ב- PBS.
      הערה: התערובת צריכה להיעשות על ידי בעדינות להתנדנד הלוך ושוב ביד מאשר עם מערבולת כדי למזער את היווצרות בועה.
      1. אם בעזרת מעכבי אלרגיה למזון, להכין את מעכבי9. להכין µL 100 (לכל עכבר) של מעכב-ריכוז של 1 מ"ג/מ"ל ב- PBS. דבר זה מאפשר משלוח של 100 µg של מעכב עבור כל עכבר.
        הערה: לא יעלה על 100 µL של מעכב לכל העכבר, כפי העכברים מסוגלים רק לטפל µL 200 נפח gavage סה כ במהלך יום אתגר אחד. ככל 100 µL נחוצים גם האתגר ביצית, 100 µL הוא המספר המירבי מומלץ נפח לשימוש מעכב.
    2. עזים ומתנגד העכברים כפי שמתואר בשלב 1.1.
    3. אורלי gavage כל עכבר עם 100 µL של הפתרון ביצית (25 מ"ג של ביצית ב 100 µL ל- PBS gavaged לכל עכבר) הוכנה בשלב 4.3.1.
      1. אם משתמש מעכבי, לנצל אותן טכניקות שמתואר השלבים הבאים gavage מעכב (או שליטה PBS) מוכן בשלב 4.3.1.1 30 דקות לפני האתגר ביצית. לאחר 30 דקות, להמשיך הלאה לשלב הבא.
      2. שימוש במחט gavage עם מזרק 1 מ"ל. לקחת את µL 100 של ביצית לתוך המזרק.
      3. את המחט לתוך הפה; לאחר מכן, לכוון את המחט לכיוון שמאל או צד ימין של הגרון, החלק בעדינות את המחט דרך הוושט. מזריקים µL 100 של ביצית.
        הערה: כדי להבטיח כי המחט אינה לקנה, להתבונן פעיל נושם לפני הזרקת ביצית. גם התנגדו החדרת המחט מוקדם אם היא נכנסה קנה הנשימה ולא הוושט.
    4. למקם את העכברים שלהם בכלובים בודדים. לשימוש התבוננות קלה באיכות צואה, כלובים ללא מצעים.
    5. ודא ההתאוששות מן ההרדמה. שים לב כי העכברים להתעורר ולהיות ניידים בהתנדבות.
    6. למדוד את חום הגוף של העכברים-timepoints 10, 20, 40 ו- 60 דקות בטכניקה המתוארת בסעיף 2.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

אנפילקסיס מערכתית פסיבית: להזרקה הרביעי, שבוע 10 עכברים BALB/c הנשי הישן היו מרדימים. לפני הזריקה, מדדנו את חום הגוף שלהם (Video 1) כפי שמתואר בשלב 1. איור 1 מציג את המגמה טמפרטורה של שתי האוכלוסיות לאחר ההזרקה הרביעי. העכבר רגיש-IgE הראה ירידה טמפרטורה מקסימלית של 3.0 מעלות צלזיוס ב 20 דקות, בעוד העכבר שליטה PBS היה טיפה המרבי של 1.1 ° C-20 דקות7. יתר על כן, במהלך תהליך זה, פעילות הציונים הוערכו בהתבסס על הניידות של העכבר בכל. עכברים נצפו לראשונה ללא שום עצבנות. לאחר מכן, הם נצפו עם עצבנות על-ידי החדרת היד של המאבחן לתוך הכלוב וביצוע מגע רך עם העכבר. על סמך התגובות שלהם, העכברים הם מוערכים, הבקיע בסולם של 1 עד 3. ציון של 1 מציין עכבר כי הוא משותק או מינימלית ניידים עם או בלי עצבנות; ציון של 2 מצביע עכבר כי הוא משותק בלי עצבנות היא ניידת עם עצבנות מבלי לבצע תנועות התחמקות מהירה; תוצאה של 3 המציין עכבר או ניידים או משותק בלי עצבנות, סלולרי עם עצבנות ועושה תנועות התחמקות מהירה. קטעי וידאו 2 ו- 3 לספק דוגמאות של שתי הקבוצות המדגימים את שיטות מדידת טמפרטורה, כמו גם את המידות רמת הפעילות המתאימה. השימוש מד חום אינפרא אדום המותר עבור מדידות טמפרטורה ללא הרדמה, אשר בתורו אפשרה להערכת התנהגות פנוטיפ לפני, במהלך, ואחרי מדידת טמפרטורה; לעומת זאת, בדיקה רקטלית המסורתי דורש הרדמה, לכן למנוע כל הערכה התנהגותית תוך מספר דקות המקיפים את המידות טמפרטורה.

העכבר מודל של אלרגיה למזון8: התרשים של דגם העכבר מוצגת באיור2. עכברים הם עכברים BALB/c הנשי הגילאים 8-10 שבועות בזמנו של רגישות עולה. עכברים נצפו ב 10, 20, 40 ו- 60 דקות לאחר כל אתגר עבור טמפרטורת הגוף והפעילות. תוצאה נציג מוצג באיור 3 של שינוי הטמפרטורה במהלך אתגר 7. העכברים הראו ירידה בטמפרטורה מירבית ב 10 דקות; לכן, הטמפרטורות 10 דקות שימשו כדי לתאם עם טמפרטורות הגוף ברמות פעילות 10 דקות (עם ניקוד בהתבסס על הקריטריונים המתואר לעיל). הציון פעילות וטמפרטורה ירידה הראו מתאם משמעותי סטטיסטית (איור 4). כפי שהוזכר בסעיף אנפילקסיס מערכתית פסיבי, תצפיות התנהגותיות בוצעו בשל היעדר הרדמה, מד חום אינפרא אדום היה מנוצל. לעומת זאת, הגששים רקטלי את תהליך כל תצפיות התנהגותיות או הערכות במהלך הזמן של מדידת טמפרטורה. עת טמפרטורה זו, פעילות אחרת פנוטיפים חייב להיות מוקלט, זה חיוני כדי לנצל את מערכת למדידת טמפרטורה שלא דורש הרדמה.

Figure 1
איור 1 : פסיבי אנפילקסיס מערכתית בעכברים BALB/c. שני עכברים היו ip מוזרק עם אנטי-DNP IgE ביום 0 ולאחר מכן הרביעי מוזרק עם תמיסת מלח או DNP-HSA ביום 1. טמפרטורת הגוף נמדדה באמצעות מד חום אינפרא אדום לפני ההזרקה, כל 10 דקות לאחר ההזרקה מינימלית 70 אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : מזון אלרגיה העכבר דגם מפרטים טכניים- ביום 0, היו עכברים BALB/c sensitized ip עם ביצית, אלום, שוב ביום 14. ביום 28, 30 דקות לפני כל אתגר, עכברים היו בעל-פה gavaged עם PBS שליטה או מעכב אלרגיה למזון (HRF-2CArecombinant משחררים היסטמין גורם עם שלו cysteines שני עם alanines)9. עכברים ואז לערער ig עם 25 מ ג של ביצית. אתגרים בוצעו כל יום אחר אתגרים 9. עכברים נצפו עבור מדידת טמפרטורת הגוף והפעילות הבקיע ב 10, 20, 40 ו- 60 דקות לאחר האתגר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : דגם אלרגיה למזון בעכברים BALB/c. טמפרטורה לשנות לאחר האתגר ביצית ז' נוטרה על ידי מד חום אינפרא אדום. תוצאות טיפוסי מוצגים לפחות ארבעה ניסויים עצמאית (* *, p < 0.01 בין PBS וטיפולי 2CA על ידי מבחן t של סטודנט; ns: לא משמעותי). קווי שגיאה = ב- SEM אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 : הקשר בין פעילות לבין הטמפרטורה ב 10 דקות בניסויים אלרגיה למזון- התוצאות משקפות המידות שנלקחו 4 סטים נפרדים של ניסויים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Movie Image 1
וידאו 1: גוף מדידת טמפרטורה בזמן עכברים הם מרדימים. ניתן לקחת מדידות טמפרטורת הגוף עכברים עם או ללא הרדמה. למדידות עקבית, זה חיוני כדי תמיד לכוון את המדחום באותו מיקום הגוף. אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)

Movie Image 2
סרטון 2: רמת הפעילות ב 40 דקות לאחר ההזרקה DNP-HSA iv. עכברים הם נצפו בלי עצבנות בתחילה, ואז עם עצבנות. על סמך התגובות שלהם, העכברים היו מוערכים, הבקיע בקנה מידה הפעילות של 1 עד 3. העכבר משמאל (anti-DNP עכבר sensitized) ניתן ציון של 1, בעוד העכבר בצד הימין (PBS בקרת עכבר) ניתן ציון של 3. אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)

Movie Image 3
וידאו 3: גוף מדידת הטמפרטורה ב 40 דקות לאחר ההזרקה DNP-HSA iv. איור זה מדגים את היכולת של מד חום אינפרא אדום כדי במדויק, noninvasively למדוד את חום הגוף בלי ההרדמה. יתר על כן, הציונים פעילות הפגינו 2 וידאו משקפות את מידת ירידת טמפרטורה נמדדת בסרטון הזה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)

Movie Image 4
וידאו 4: שגיאות בטמפרטורה קריאה על-ידי הינד כף של חסימה של החיישן. וידאו זה מדגים את ההבדל בין טמפרטורות עם ובלי כף הרגל בתוך ההיקף חיישן. אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הפרוטוקול המתואר הוקמה במטרה מדידת טמפרטורת הגוף ללא השימוש בהרדמה. למרות שלו בקלות יחסית עם איזו טמפרטורה ניתן להשיג קריאת, ישנם מספר אזהרות להכיל טכניקה זו, בנוסף ההשפעות ברורה יותר כגון: טיפול שונות בטמפרטורות הסביבה והמתח.

ראשית, על מנת לשמור על טמפרטורות עקבי לאורך כל הניסוי, המיקום שבו הטמפרטורה נמדדים חייב להיות מראש באמצעות ציוני דרך אנטומיים, ועל החוקרים להיות אפשרות לשכפל את המדידה של הגוף אמר מיקום. על-ידי אבטחת forepaws של העכבר על משטח ישר-קצה, כגון שפתו של כלוב או על הקצה של המדחום, הבטן חשופים ברצון חיישן אינפרה אדום של המדחום. באופן כללי, הבטן היא פני שטח גדול המאפשר גמישות עבור תוצאות עקביות. יתר על כן, הבטן יש שיער sparser מאשר המשטח הגבי של העכבר, ולכן מאפשר קריאה מדויקת יותר של טמפרטורת הגוף.

שנית, תמיד חייב להיות במעקב כפות הרגליים האחוריות בעת לקיחת מידה לטמפרטורה. כאשר המדחום קרוב בבטן, העכברים נוטים להציב את רגליהם על המדחום עצמה. כאשר כפות הרגליים או הבהונות בתוך ההיקף של החיישן, הטמפרטורה הקריאה עשוי להיות נמוך מזה של הבטן, כפי שמתואר ב 4 וידאו. חשוב לאפשר את העכבר על שתי גדות עם הרגליים משני צדדיו של החיישן, תוך שמירה על היקף חינם של כל חלקי הגוף או אובייקטים מלבד השטח בטן.

שלישית, משטחים בטן של עכברים לא יכול להיות רטוב כאשר לוקחים את המידות. משטח רטוב תשנה היכולת מד החום למדוד טמפרטורה מדויקת; בדרך כלל, הטמפרטורה שנמדדה יהיה נמוך יותר מאשר הערך הממשי. בעיה זו יכולה להימנע על ידי שמירה על העכברים בכלובים עם מצעים טריים במהלך תקופת תצפיתית. זה גם מבטיח כי היובש של פני השטח בטן יתוקנן בכל פעם שנמדדות הטמפרטורות.

לבסוף, מדחום אינפרא אדום יש שוליים גדולים יותר של שגיאה מאשר הגששים רקטלי, גם אם רק מעט. השוליים למדידות עם הגששים פי הטבעת הוא ± 0.1 º C, ואילו עבור מדחום אינפרא אדום, זה ± 0.2 ° C. זה מרווח הטעות הייתה מינימלית בהשוואה הכוללת הבדלי טמפרטורות בין אוכלוסיות לניסוי PSA. וחשוב מכך, פרוייקט הדורש הבדל עדין כמו ± 0.1 º C אולי גם צופה שוליים אחרים של בעיות שגיאה, ללא קשר אם מד חום אינפרא אדום או בדיקה רקטלית של משתמשים. במהלך הכנת פרוטוקול זה, זה היה גם הוכח כי קיים מתאם טוב מאוד בין הגוף הטמפרטורה נמדדת טמפרטורה מושתלת משדרים, טמפרטורות פני הגוף נמדדת מדחום אינפרא אדום במהלך היפותרמיה הנגרמת ליפופוליסכריד6.

ירידת טמפרטורה במודל אלרגיה למזון בשימוש היה לא נצפתה בעבר8,10. התקן עבור הערכה בעבר כדי לקבוע את חומרת פנוטיפ כשקלע שלשול; עם זאת, שיטה זו חסרה אובייקטיביות. על-ידי שימוש את מד חום אינפרא אדום, הראנו את הטמפרטורה עדין טיפות יכול להתגלות. היינו אז יוכלו לתאם את אלה עם רמות הפעילות, כמו העכברים לא היו מרדימים במהלך ההליך. שיטה זו מאפשרת מהיר, מדויק, קל לשימוש, לא פולשנית, וזולה דרך למדוד את חום הגוף בעכברים בעת היותו מסוגל להתבונן אחרים פנוטיפים זה אחרת יהיו חסרים אם עכברים הם מרדימים למדידות בדיקה רקטלית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

במחקר Kawakami מעבדה נתמכה על ידי NIH מענקים: R01 AR064418-01A1, HL124283-01-R01, R21 AI 115534-01, ו R41AI124734-01.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Non-contact infrared thermometer SinoPie DT-8861
Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE Sigma Aldrich D8406-.2MG
PrecisionGlide 30 G needle BD 305128
PrecisionGlide 26 G needle  BD 305111
1 mL syringe BD 309659
Dinitrophenyl - human serum albumin Biosearch Technologies D-5059-10
Ovalbumin from chicken egg white Sigma Aldrich A5503-50G
Imject Alum ThermoFisher Scientific 77161
Animal Feeding Needles, disposable Fisher Scientific 01-208-87

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Finkelman, F. D. Anaphylaxis: lessons from mouse models. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 120 (3), Quiz 516-507 506-515 (2007).
  2. Lee, J. K., Vadas, P. Anaphylaxis: mechanisms and management. Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 41 (7), 923-938 (2011).
  3. Newsom, D. M., Bolgos, G. L., Colby, L., Nemzek, J. A. Comparison of body surface temperature measurement and conventional methods for measuring temperature in the mouse. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (5), 13-18 (2004).
  4. Wong, J. P., Saravolac, E. G., Clement, J. G., Nagata, L. P. Development of a murine hypothermia model for study of respiratory tract influenza virus infection. Laboratory Animal Science. 47 (2), 143-147 (1997).
  5. Quimby, J. M., Olea-Popelka, F., Lappin, M. R. Comparison of digital rectal and microchip transponder thermometry in cats. Journal of American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 402-404 (2009).
  6. Mei, J., Riedel, N., Grittner, U., Endres, M., Banneke, S., Emmrich, J. V. Body temperature measurement in mice during acute illness: implantable temperature transponder versus surface infrared thermometry. Scientific Reports. 8 (1), 3526 (2018).
  7. Doyle, E., Trosien, J., Metz, M. Protocols for the induction and evaluation of systemic anaphylaxis in mice. Methods in Molecular Biology. 1032, 133-138 (2013).
  8. Brandt, E. B., et al. Mast cells are required for experimental oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Clinical Investigations. 112 (11), 1666-1677 (2003).
  9. Ando, T., et al. Histamine-releasing factor enhances food allergy. The Journal of Clinical Investigations. 127 (12), 4541-4553 (2017).
  10. Brandt, E. B., et al. Targeting IL-4/IL-13 signaling to alleviate oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 53-58 (2009).

Tags

אימונולוגיה זיהום גיליון 139 מד חום אינפרא אדום טמפרטורת הגוף אנפילקסיס מערכתית לא פולשנית פסיבי אלרגיה למזון עכבר
מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kawakami, Y., Sielski, R., Kawakami, … More

Kawakami, Y., Sielski, R., Kawakami, T. Mouse Body Temperature Measurement Using Infrared Thermometer During Passive Systemic Anaphylaxis and Food Allergy Evaluation. J. Vis. Exp. (139), e58391, doi:10.3791/58391 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter