כאן אנו מציגים שיטה חדשה כדי למדוד במדויק את הבדלי טמפרטורה גוף פסיבי אנפילקסיס מערכתית (PSA), מזון אלרגיה העכבר מודלים באמצעות מד חום אינפרא אדום... הליך זה שוכפל במדויק בתוצאות ה-PSA הקודמת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מדידה טמפרטורת גוף העכבר באמצעות מד חום אינפרא אדום במהלך אנפילקסיס מערכתית פסיבי והערכה אלרגיה למזון
במאמר זה
סיכום
תקציר
מדידה טמפרטורת גוף העכבר היא בעלת חשיבות עליונה על חקירת אלרגיה וסימפטומים אנפילקטי. פי הטבעת זונדי טמפרטורות משותף, הם הוכחו להיות מדויק ולא יקר ערך בהקשר זה. עם זאת, שיטה זו של מדידת טמפרטורה דורש העכברים עכשיו כדי להכניס את המכשיר ללא פציעה של החיה. זה מגביל את היכולת להתבונן אחרים פנוטיפים של העכבר בו-זמנית. על מנת לחקור פנוטיפים אחרים תוך מדידת טמפרטורה, הגששים רקטלי אינן אידיאלי, שיטה נוספת היא הרצויה. כאן, אנחנו מציגים שיטה לא פולשנית של מדידת טמפרטורה זה בדרישת הדרישה העכבר הרדמה תוך שמירה על אמינות שווה כדי הגששים רקטלי מדידת טמפרטורת הגוף. אנו משתמשים מד חום אינפרא אדום שמזהה טמפרטורות פני הגוף בטווחים בין 2 ל- 150 מ מ. שיטה זו של מדידת טמפרטורת הגוף הוא מצליח בצורה אמינה שכפול מגמות שינוי טמפרטורה במהלך מערכת פסיבית אנפילקסיס ניסויים בעכברים. אנו מראים כי טמפרטורות פני הגוף הינם כ 2.0 ° C נמוך יותר בדיקה רקטלית מדידות, אך מידת ירידת טמפרטורה בעקבות המגמה זהה. יתר על כן, אנו משתמשים באותה השיטה כדי להתבונן עכברים במודל אלרגיה למזון כדי להעריך את רמות טמפרטורה והפעילות בו זמנית.
מבוא
מדידת טמפרטורת הגוף כבר חלק חיוני של פיקוח על ההשפעות של אנפילקטי הסימפטומים אצל בעלי חיים מודלים1,2. הבדלי טמפרטורה נמדדו באופן מסורתי על ידי בדיקה רקטלית מדחומים עכברים3,4. עם מדידות אלה, החוקרים באופן אמין מצטייר הבדלי טמפרטורה בין משתנים; עם זאת, שיטה זו היא הליך זמן רב וגורם מצוקה לעכברים, אשר יכול להגביר את טמפרטורת הגוף. בדיקה רקטלית יכולה גם לגרום קורע ולדלקת הרירית3. יתר על כן, צריך עכשיו העכברים כדי בצורה הומאנית את הגשוש רקטלית כדי למדוד את טמפרטורת3. זהו תהליך איטי, והיא אוסרת על המידה של טמפר....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של מכון הויה לאלרגיה ואימונולוגיה.
1. עכבר מדידה טמפרטורת גוף במהלך ההרדמה
- הנח את העכבר בתיבת אינדוקציה הרדמה. עזים ומתנגד באמצעות 1 ליטר/דקה זרימת החמצן עם 5% איזופלוריין.
הערה: ההרדמה היא מאושרת כאשר העכבר מפסיק התנועה הרצונית, היה משותק עבור מעל גיל 30 s. לחלופין, קצב הנשימה הצג, וברגע עכברים נושמים-נשימה 1 לכל כל 2 s או יותר, הוא אישר ההרדמה. - להחזיק את העכבר על ידי העורף של הצוואר עם האצבע והאגודל והחזק את הזנב עם אצבע הזרת על מנת לחשוף את הבטן התחתונה.
- מקם את חיישן מד חום אינפרא אדום מתחת בבטן התחתונה תוך החזקת את העכבר עם הגוף שלו במקביל ל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אנפילקסיס מערכתית פסיבית: להזרקה הרביעי, שבוע 10 עכברים BALB/c הנשי הישן היו מרדימים. לפני הזריקה, מדדנו את חום הגוף שלהם (Video 1) כפי שמתואר בשלב 1. איור 1 מציג את המגמה טמפרטורה של שתי האוכלוסיות לאחר ההזרקה הרביעי. העכבר רגיש-IgE הראה ירידה טמפרטורה מקסימלית של 3.0 מעלות צלזיוס ב 20 דקות, בעוד העכבר שליטה PBS היה טיפה המרבי של 1.1 ° C-20 דקות7. יתר על כן, במהלך תהליך זה, פעילות הציונים הוערכו בהתבסס על הניידות של ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול המתואר הוקמה במטרה מדידת טמפרטורת הגוף ללא השימוש בהרדמה. למרות שלו בקלות יחסית עם איזו טמפרטורה ניתן להשיג קריאת, ישנם מספר אזהרות להכיל טכניקה זו, בנוסף ההשפעות ברורה יותר כגון: טיפול שונות בטמפרטורות הסביבה והמתח.
ראשית, על מנת לשמור על טמפרטורות עקבי לאורך כל הניסוי, המיקום שבו הטמפרטורה נמדדים חייב להיות מראש באמצעות ציוני דרך אנטומיים, ועל החוקרים להיות אפשרות לשכפל את המדידה של הגוף אמר מיקום. על-ידי אבטחת forepaws של העכבר על משטח ישר-קצה, כגון שפתו של כלוב או על הקצה של המדח.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
במחקר Kawakami מעבדה נתמכה על ידי NIH מענקים: R01 AR064418-01A1, HL124283-01-R01, R21 AI 115534-01, ו R41AI124734-01.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מדחום אינפרא אדום ללא מגע | SinoPie | DT-8861 | |
| אנטי דיניטרופניל (DNP) IgE | Sigma Aldrich | D8406-.2MG | |
| PrecisionGlide 30 G מחט | BD | 305128 | |
| מחט PrecisionGlide 26 G | מזרק BD | 305111 | |
| 1 מ"ל | BD | 309659 | |
| Dinitrophenyl - אלבומין סרום אנושי | Biosearch Technologies | D-5059-10 | |
| Ovalbumin מחלבון ביצת עוף | Sigma Aldrich | A5503-50G | |
| Imject Alum | ThermoFisher Scientific | 77161 | |
| מחטי האכלה לבעלי חיים, חד פעמי | Fisher Scientific | 01-208-87 |
מקורות
- Finkelman, F. D. Anaphylaxis: lessons from mouse models. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 120 (3), Quiz 516-507 506-515 (2007).
- Lee, J. K., Vadas, P. Anaphylaxis: mechanisms and management. Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 41 (7), 923-938 (2011).
- Newsom, D. M., Bolg....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
