Method Article

В реальном времени обработки изображений и количественная оценка развития грибковых биопленки, с использованием двухфазной системы рециркуляции потока

DOI:

10.3791/58457

⸱

October 18th, 2018

 , 
1Department of Oral Biology, University at Buffalo

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы описываем Ассамблея, операции, и очистки потока аппарата предназначена для грибковых биопленки изображения в режиме реального времени под потока. Мы также представить и обсудить количественных алгоритмы для использования на приобретенные изображения.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В Ротоглоточный кандидоз члены рода Candida должны придерживаться и растут на устные слизистой поверхности находясь под воздействием слюны. Хотя были разработаны модели для роста под потока, многие из этих систем являются дорогими, или не позволяют изображений в то время как клетки находятся под потока. Мы разработали новый аппарат, который позволяет нам изображения рост и развитие клеток Candida albicans под потока и в режиме реального времени. Здесь мы подробно протокол для Ассамблеи и использование этого аппарата потока, а также количественная оценка данных, которые создаются. Мы в состоянии дать количественную оценку ставок, которые клетки придают и отсоединить от слайдов, а также определить меру биомассы на слайде с течением времени. Эта система является экономичным и универсальный, работают со многими типами света Микроскопы, включая недорогие benchtop Микроскопы, и способный распространяется изображений раза по сравнению с другими системами потока. В целом это низкая пропускная система, которая может обеспечить весьма подробную информацию в реальном времени о росте биопленки плесневые под потока.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кандидоз (C. albicans) это оппортунистическая грибкового патогена людей, которые могут заразить многих типов тканей, включая устные слизистой поверхности, вызывая Ротоглоточный кандидоз и приводит к нижней качества жизни для пострадавших лиц1. Биопленки является важной характеристикой для патогенеза C. albicans, и многочисленные исследования проводились на формирование и функции C. albicans биопленки,2,3,,4, 5, многие из которых были проведены с использованием статических (отсутств....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. сборка аппарата потока

  1. Настройка частей, которые перечислены в Таблице материалов согласно схеме на рисунке 1 с учетом соображений, обсуждаются ниже.
    Примечание: Для удобства, поток, аппарат делится на две стороны, зеленой стороне (все вверх по течению слайда для фляги СМИ) и оранжевый сторону (все по течению слайда для фляги СМИ).
    1. Убедитесь, что все аппарата потока воздуха, плотно затянуты для предотвращения утечки, с единственным исключением СМИ колбы (рис. 1, 1). Для этого применяются ленты сантехников для любого мужчины потоков перед монтажом Кроме Гаситель (PD) и ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Представитель изображения обычного ночь промежуток времени эксперимент с использованием одичал тип C. albicans клеток при 37 ° C можно увидеть в Рисунок 2A и 1 дополнительного видео. Изображения были контраст, расширение для улучшения видимости. Была выполнена количественная оценка исходных данных, и представитель графики можно увидеть в рисунке 2B. Для создания этих гра.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Использование системы потока изложенные выше позволяет поколения количественных покадровой видео биопленки грибковые роста и развития. Для проведения сравнений между эксперименты это исключительно важное значение для обеспечения визуализации параметры то же самое. Это включает в себя обеспечение микроскоп для Кёлер освещения для каждого эксперимента (многие руководства доступны в Интернете для этого процесса). Помимо изображений параметров, есть некоторые важные шаги, чтобы иметь в виду при работе с аппаратом потока. Во-.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы признать доктор Wade Sigurdson для предоставления ценный вклад в дизайн аппарата потока.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
НасосCole Parmer07522-206
Головка насосаCole Parmer77200-60
6 ТрубкаCole Parmer96410-14N/A
Адаптер для ловушки для пузырьковCole Parmer30704-843
Адаптер для ловушки для 1/4" ID вакуумная линияCole Parmer31500-553
Встроенный фильтрующий адаптер (4 необходимы)Cole Parmer31209-408,9
Оранжевая сторона YCole Parmer31209-557
Зеленая сторона Yтам же108272
* Слайдыibidi801964
* Слайд luersibidi108024
Вакуум вспомогательная ловушка для мыльных пузырейElveflow/Darwin microfluidicsKBTLarge - Микрофлюидная ловушка для пузырей Комплект3
колб для носителейCorning4980-5001
0.2 &; m воздушный фильтрCorning4312291
Стеклянная бутылка с резьбой для PD и фильтрующей колбы (2 необходимы)Corning1395-1005,10
Порт Винтовая крышка для PD и фильтрующей колбы (2 необходимо)Wheaton11297505,10
Соединитель трубки с винтовой крышкойWheaton11298145,10
Соединитель трубки скошенная шайбаDanco885795,10
Трубочный соединитель плоская шайбаDanco885695,10
Зажимы для встроенных фильтров и последующих фильтров Y (7 необходимы)Oetiker/MSC Industrial Supply Company15100002-1007,8,9
Зажимной инструментOetiker/MSC Industrial Supply Company14100386н/д
20 μ m встроенный фильтрАналитические Научные Приборы850-13318
10 μ m встроенный фильтрАналитические научные приборы850-13339
2 μ m входной фильтрфильтра Supelco/Sigma-Aldrich5826710
* 0.22 &; m фильтрфильтра MilliporeSVGV010RS11
* 0,22 &; М медиафильтр " адаптер»BD Biosciences32965411
Резиновая пробкаFisher Scientific14-131E1
Мешалка с подогревом и внешним отверстием для зондаThermoFisher Scientific88880006Н/Д
Датчик температурыThermoFisher Scientific88880147Н/Д
из

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pankhurst, C. L. Candidiasis (oropharyngeal). BMJ clinical evidence. 2012, 1304(2012).
  2. Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., López-Ribot, J. L. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans. Revista iberoamericana de micología. 18 (4), 163-170 (2001).
  3. Nobile, C. J., Mitchell, A. P.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fungal Biofilm DevelopmentReal time ImagingTwo Phase Flow SystemCandida AlbicansFlow Apparatus AssemblyCell Attachment DetachmentBiomass QuantificationDark Field MicroscopyFluid Flow EffectsOropharyngeal Candidiasis

Related Articles