여기, 우리는 기본 창 자 호르몬 분 비 및 장내 흡수 분자 메커니즘 연구에 강력 하 고 생리 적 모델 제시-격리 끼얹는다 쥐 소장.
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이 논문에서
요약
초록
용기는 식욕과 음식 섭취, 소화, 영양소의 흡수와 분포, 및 포스트 높은가격순 포도 여행 15 개 이상의 다른 펩 티 드 호르몬을 생산 하는 신체의 가장 큰 내 분 비 기관 이다. 창 자 호르몬 분 비를 조절 하는 분자 메커니즘을 이해 하는 것은 이해 하 고 소화 관 호르몬 생리학 번역에 대 한 기본적 이다. 전통적으로, 기본 창 자 호르몬 분 비 메커니즘 (실험 동물 또는 인간)에서 vivo에서 공부 하거나 또는 문화 셀 또는 셀 라인 점 막 창 자 호르몬 분 비 기본을 사용 하 여. 여기, 창 자 호르몬 분 비를 공부 하기 위한 대체 방법으로 격리 된 끼얹는다 쥐 소장을 소개 합니다. 이 모델의 미 덕은 그것은 생리 적으로 중요 한 매개 변수 vivo에서 학문, 점 막 분극, paracrine 관계의 노선 등에서 분 비에 대 한 책임의 대부분을이 의미 그대로 직감에 의존 관류/자극 노출입니다. 또한, 그리고 vivo에서 연구와는 달리 거의 완전 한 실험 제어 및 분 비의 직접 평가 대 한 격리 끼얹는다 쥐 소장 수 있습니다. 달리 생체 외에서 학문, 그것은 크기와 주소 중요 한 질문, 어떤 자극 원인 용기 (luminal 또는 혈관)의 측면에서 분 비는 다른 소화 관 호르몬의 분 비와 분 비의 역학을 공부 하 자극, 분 비 응답 기본 세부 분자 센서에서 분석 하 고. 또한, 준비 책임 전송기를 포함 하 여 장내 흡수의 역학에 관한 내용과 장내 흡수의 연구에 대 한 강력한 모델입니다.
서론
용기는1식욕 조절 영양소의 흡수 및 영양 처리, 장 성장 규제 15 개 이상의 다른 펩 티 드 호르몬을 생산 하는 신체의 가장 큰 내 분 비 기관 이다. 창 자 호르몬, 따라서, 많은 기본적인 생리 적 과정에 참여 이며 분 비와 각 호르몬의 분 비를 제어 하는 분자 세부의 이러한 패턴을 이해 따라서 우리의 기본 생리에 대 한 중요 한 이해 하 고 소화 관 호르몬 작업;의 변환 측면을 해결 하기 위한 하지만 어떻게 하나 밑에 창 자 호르몬 분 비 분자 감지 메커니즘을 공부할 수 있습니다? 일반적으로, 호르몬 분 비 절연된 용기 준비 또는 창 자 호르몬 분 비 1 차 셀 문화에서 그대로 유기 체 (인간 또는 실험 동물), 공부 될 수 있다 또는 셀 문화2,3, 를 불멸 하 게 4 , 5 , 6. 우리의 선호 모델은 격리 끼얹는다 쥐 소장, 최적의 시간 해상도 (분 비 속도 든 지도 결정 될 수 있다 자세히 공부 창 자 호르몬의 분 비를 허용 하는 생리 적으로 관련 ....
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프로토콜
모든 연구는 덴마크 동물 실험 검사자 (2013-15-2934-00833)와 덴마크 입법 동물 실험 (1987 년)와 국가 통치의 지침에 따라 지역 윤리 위원회 허가 실시 했다 건강 (출판물 번호 85-23)의 학회.
1. 실험 동물
- 남성 Wistar 쥐 (250 g)와 가져오고, ad libitum 액세스 표준 차 우와 물를 가진 감 금 소 당 2 집 12시 12분에 유지 h 빛 어두운 주기에. 우리의 동물 시설 처리 비 물 및 Alrtromin 설치류 차 (1319 크고, Brogaarden, Lynge, 덴마크)를 사용 합니다.
참고: 수 동물 순응의 최소한 1 주일.
2. 수술 전 준비
- 관류 버퍼 확인: Krebs 벨소리 중 탄산염 버퍼 보충 0.1 %BSA (분수 V), 5% dextran T-70, 3.5 mmol/L 포도 당, 및 5 mmol/L pyruvate, 롤, 그리고 조미료 (필요한 경우); 산도 7.4입니다.
- 필터의 적절 한 크기를 통해 필터링 하 여 적절 한 양의 관류 버퍼를 준비 하 고 5 M HCl의 dropwise 추가 의해 ~7.5에 pH를 조정.
- 추가 3-isobutyl-1....
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결과
주어진된 자극 하면 관심의 창 자 호르몬의 분 비 여부를 결정 하는 기능 꾸준한 기준선 분 비에 의존 합니다. 또한, 자극에 대 한 응답이 관찰 되는 경우 긍정적인 통제에 대 일 분 비 응답 분명 테스트 자극에 응답의 부족 응답의 일반적인 부족을 반영 하지 않는다는 것을 제외 하 여야 합니다. 그림 2A 와 2B 좋은 품질 데이터;의 예를 보여 줍니다. 격리 끼얹는다 쥐 소장에서 GLP-1 분 1 분 간격 (수단 ± SEM) 표시 됩니다. 기저 상태에서 분 비는 꾸준한; 테스트 자극 (인슐린), 그리고 긍정에 대 일 분 비 응답의 관리 전후에 둘 다 컨트롤 (bombesin (BBS))은 분명 하다. 또한, 인슐린 동안 평균된 분 비 뿐만 아니라 GLP-1 (인슐린 또는 게시판 관리 앞 각각 기준 기간) 동안 기저 조건에서 분 비를 평균 하 고 게시판 자극 막대 그래프 (수단 ± SEM).......
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토론
격리 된 끼얹는다 쥐 소장 역학과 분자 메커니즘을 자세히 공부 하는 창 자 호르몬 분 비를 기본 허용 하는 강력한 연구 공구 이다. 이 모델을 사용 하 여 데이터의 성공적인 생산을 위한 가장 중요 한 단계는 수술입니다. 용기의 처리는 필연적으로 내장에 손상을 발생 하 고 그러므로 지켜져야 한다 절대 최소. 심지어 더 중요 한 것은, 작업의 속도 mesenteric 동맥에 카 테 테 르 배치에 대 한 시간에 관해서는 특히 키. 우리의 경험은 카 테 터를 성공적으로 두어야 한다는 관류 혈관에 구멍을 삭감 하는 데 후 분 이내에 시작 되어야 합니다. 카 테 터의 배치 작업의 가장 어려운 부분 이다 mesenteric 동맥의 작은 크기와 포털 정 맥의 얇은 벽에 의해 복잡 하 고이 단계 약간 연습을 요구 한다. 그러나 정 맥 카 테 터의 빠른 삽입은,, 하지 mesenteric 동맥에 대 한 경우 처럼 긴급, 용기로는 지금 끼얹는다 고 유지. 다음 중요 한 단계는 실험을 수행 하는. 작업이 성공적으로 수행 되었다, perfused 용기.......
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공개 사항
이 작품의 저자는이 문서와 관련 된 잠재적인 충돌의 관심을 선언합니다.
감사의 글
이 작품에 의해 지원 되었다 무제한 그랜트 교수 옌스 Juul 홀스트 하 Novo Nordisk 센터에서 기본적인 대사 연구 (Novo Nordisk 기초, 덴마크), Novo Nordisk 설치류 관류 연구 (no를 부여 하 고 재단법인에서 별도 부여에 대 한 NNF15OC0016574), 유럽 연구 위원회 (그랜트 no.695069) 및 theEuropean 조합에서 교수 홀스트에 부여의 한 postdoc로 7 프레임 워크 및 프로그램을 위한 연구, TechnologicalDevelopment, 논증 활동 (보조금 번호 266408) Lundbeck 재단 (R264-2017-3492)에서 룬 E. Kuhre를 부여 합니다. 우리 주의 교정에 대 한 제 나 E. 헌트와 캐롤 린 F. 디 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Chemicals for perfusion buffer | |||
| 소 혈청 알부민(BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| 염화칼슘 이수화물(CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| Dextran 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| 푸마르산 디소듐 염 (C44H2Na2O4)Sigma | Aldrich | F9642 | |
| 포도당 (C6H12O6) | Merck | 108342 | |
| Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| 염화칼륨(KCl) | Merck | 104936 | |
| 인산이수소칼륨(KH2PO4) | Merck | 104873 | |
| 피루브산 나트륨염(C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| 나트륨 중탄산염 (NaHCO3) | Merck | ||
| 염화나트륨 (NaCl) | Merck | 106404 | |
| L-글루타민산나트륨 일수화물 (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| Name< | strong>Company | < strong>카탈로그 번호 | Comments |
| Perfusion equitment | |||
| Universial perfusion system | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 기본 유닛 UNIPER UP-100, 유형 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 롤러 펌프, 4채널 | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| Windkessel | 하버드 생명과학, Inc. | ||
| 온도 조절 순환기, 목욕 볼륨 3L, 230V/50Hz | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 삼각대 스탠드에 가열된 수술대, 유형 873 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| 733776 햇볕을 쬐는 캐뉼라, OD = 2.0mm, ID = 1.0mm | Harvard Bioscience, Inc. |
참고문헌
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al.
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재인쇄 및 허가
