Summary
여기 우리 디자인, 비용, 및 건설의 필수 장비를 포함 하 여 murine 개체 위치 및 소설 개체 인식 행동 테스트, 경제적인 설립에 대 한 포괄적인 지침을 포함 하는 프로토콜을 제공 뿐만 아니라 행동 테스트, 데이터 수집 및 분석의 실행.
Abstract
Ethologically 관련 행동 테스트 마우스 모델을 사용 하 여 다양 한 생리 적 또는 병 적인 변화의 인지 효과 공부 하는 모든 연구의 중요 한 구성 요소입니다. 개체 위치 작업 (OLT)와 소설 개체 인식 작업 (NORT) 두 효과적인 행동 작업 기능과 메모리에 관련 된 특정 뇌 영역의 상대 건강을 일반적으로 사용 되는. 이들이 테스트의 둘 다의 고유의 특혜를 악용 하는 동안 이전에 대 한 메모리를 공개 참신에 대 한 마우스 개체 발생, OLT는 주로 hippocampal 활동에 크게 의존 공간 학습 평가. NORT, 대조적으로, 여러 뇌 영역에 의존 하는 개체 id의 공간이 아닌 학습을 평가 합니다. 두 작업은 오픈 필드 테스트 경기장, 마우스, 적절 한 환경 신호 및 비디오 녹화 장비를 해당 기본 값으로 개체 및 소프트웨어 필요합니다. 상업적으로 사용할 수 있는 시스템, 편리한 반면, 비쌀 수 있다. 이 원고는 경기장을 구축 하 고 OLT와 NORT를 수행 하는 데 필요한 장비를 설정 하는 간단 하 고 비용 효율적인 방법을 자세히 설명 합니다. 또한, 원고는 OLT와 NORT를 통합 하 고 데이터 수집 및 분석, 뿐만 아니라 대표 결과 대 한 일반적인 메서드를 제공 합니다 효율적인 테스트 프로토콜을 설명 합니다. 이러한 테스트의 성공적인 완료는 다양 한 마우스 모델 시스템의 메모리 함수에 대 한 값진 통찰력을 제공 하 고 이러한 기능을 지 원하는 기본 신경 영역 평가 수 있습니다.
Introduction
효과적인 인지 테스트 분리 하 고 제어 환경1동작을 검사 하 여 특정 뇌 영역의 신경 기능 평가. 인간에서는, 특정 작업 대상된 두뇌 지구, 전 두 엽 기능에 대 한 작업 또는 캠브리지 신경 심리적 시험 자동 배터리 (테스트 학습 짝된 동료를 정렬 하는 위스콘신 카드 등의 성능을 평가 하기 위해 설계 되었습니다. CANTAB) hippocampal 기능2,3. 이 테스트는 그 영역의 신경 활동에 기인 하는 행동을 평가 하 여 인 간에 있는 특정 뇌 영역의 기능을 연구 하도록 설계 되었습니다. 가장 생물 의학 연구의 최종 목표는 인간의 건강;의 개선 그러나, 뇌 기능 건강 또는 질병의 많은 연구와 인간의 윤리적으로 수행할 수 없습니다. 인간 참가자를 사용할 수 없는 연구, 쥐와 같은 작은 설치류는 종종 선택의 모델입니다. 마우스 모델을 사용 하 여 직접 실험 조작 유전자 발현의 변화, 상해의 유도 또는 optogenetic 기술을 통해 회로 활동의 심지어 변조를 포함 하 여 제어할 수 있습니다. 특정 지역에 의존 하는 행동을 측정 하 여 뇌 기능에 실험 변수의 영향을 평가 하는 것을 목표로 행동 테스트 쥐, 인간의 테스트와 유사 합니다.
해 마는 인간과 설치류4메모리 형성에 대 한 필수적인 구조입니다. 좀 더 구체적으로, 해 마 선언적 메모리 관련 된 관계형 표현 하지만 뇌4의 모터 센터에 절차상 메모리에 중요 한 역할을 한다. 그것은 섭 동에 절 묘하게 과민 하기 때문에 hippocampal 메모리 기능 신경 과학의 많은 분야에 걸쳐 연구의 초점을 하고있다.입니다. 뇌졸중 발작을 노화 하 고 장기간된 스트레스에 이르기까지 부정적인 섭 hippocampal 손상5와 연결 됩니다. 반면, 사회적 상호 작용, 물리적 환경 농축, 등 운동, 긍정적인 개입 hippocampal 기능6,,78향상. Hippocampal 메모리의 적절 한 테스트를 가진 설치류 학문 hippocampal 기능에 다른 환경 개입의 효과 뿐 아니라 메모리의 세포질이 고 분자 중재자에 대 한 통찰력을 밝힐 수 있다.
설치류, 몇 가지 테스트 해 마 의존 학습 및 메모리9,,1011연구 개발 되었습니다. 그들은 수 수 광범위 하 게 세분화, 행동에 변화를 이끌어내는 감정적인 원자가와 자극을 필요로 하는 작업 및 작업을 소설 자극11조사 설치류 취향에. 냉동 동작9,공포 유발11을 측정 하 여 불쾌 한 자극 (발 충격) 환경 컨텍스트 및 컨텍스트에 대 한 나중 테스트 메모리 쌍 등 상황별 두려움 컨디셔닝. 모리스 물 미로 건조 대응 반 즈 미로 부정적인 외부 보강을 사용 하 여 홍보 공간 학습4,11. 각각의 경우에 설치류 혐오 상황, 차가운 물에 잠기 다 되 고 또는 밝은 조명 플랫폼에 각각 노출에서 탈출을 추구 합니다. 광선 팔 미로 반면, 동물 자연 채집 동작 공간 메모리와 결합을 사용 하 여 검색 작은 음식 사례금4,11를 긍정적인 증강에 의존 합니다. 이러한 작업은 널리 사용 되 고 hippocampal 메모리에 대 한 기초 지식을 굴복 했다. 그러나, 부정과 긍정적인 외부 보강재 또는 충격 처럼 공포 유도 자극 이러한 행동을 한 감정적인 요소 추가 어떤 경우에 어떤 바람직하지 수 있습니다 테스트 합니다. 예를 들어 등 쪽과 복 부 된 고유 기능, 감정 조절, 각각12대 공간 메모리와 연결 됩니다. 자극에 감정적인 응답에 의존 하는 테스트 수 있습니다 정확 하 게 반영 하지 장애인된 공간 메모리 복 부 hippocampal 감정 조절 기능 또한 영향을 받는 경우.
OLT 해 마 의존 공간 메모리13의 측정을 제공 하는 간단 하 고 효과적인 테스트입니다. 작업 추가 외부 보강 없이 새로 움에 대 한 동물의 기본 환경 설정에 의존 하며 따라서 일반적으로 차동 감정적인 응답13과 관련 된 합병증을 피할 수 있습니다. OLT에 대 한 현재 프로토콜 마우스, 선물 된다 그러나 장비의 크기는 적절 하 게 크기를 조정 하는 경우 그것은 또한 쥐에 효과적 이다. Acclimating 오픈 필드 테스트 분야에 마우스를 다음 공간 환경 단서에 관하여 2 개체를 조사 하는 프로토콜에 의하여 이루어져 있다. 마우스는 다음 경기장에서 제거 하 고 지연 시도 간 간격 (ITI), 하는 동안 개체 중 하나 이동. ITI, 후 마우스 경기장 reintroduced 이며 자유롭게 탐색을 허용 합니다. 일반적으로 쥐 참신, 선호 하 고 만약 그들이 그들의 초기 노출에서 개체의 위치를 기억, 그들은 이동된 개체를 조사 하 고 더 많은 시간을 보낼 것입니다. 동물 hippocampal 병 변으로 공간 상황별 학습 장애는 고 결과적으로 보여주는 소설 위치14,15에서 개체에 대 한 기본 설정이 없습니다.
OLT은 메모리 신경 활동에 여러 뇌 영역에서 그리는 소설 개체 인식 작업 (NORT)의 추가 테스트와 독립적으로 또는 조합에서 사용할 수 있습니다. NORT는 OLT 때 개체 중 하나를 새 위치로 이동 하는 대신 새로운 개체로 대체 됩니다 테스트 단계까지. OLT 마찬가지로 개체의 메모리와 마우스 소설 개체를 조사 하 고 자발적으로 선호 합니다. 개체 인식 메모리 hippocampal 기판에 크게 의존, 개체 위치 메모리와 달리 다양 한 뇌 영역에 의존에 나타나고 해 마의 참여는 정착. 많은 연구 보고서는 hippocampal 병 변 또는 비활성화 영향을 주지 않습니다 소설 개체 기본 설정10,13,,1617, 다른 반대18,19찾을. 그러나, 그것은 여전히 설치류에 일반 메모리 기능을 평가 하 일반적으로 사용 되는 작업입니다.
여기에 제시 된 프로토콜 둘 다 오픈 필드 테스트 경기장을 사용 하 여 시작 하 고 OLT와 NORT, 실행에 관련 된 단계를 구분. 상업적으로 사용 가능한 행동 테스트 장비 비용 금지, 특히 더 작은 실험실에 대 한 될 수 있습니다. 이 프로토콜에는 경기장 최소의 비용 및 전문된 도구 없이 사내 구축 설계 및 간단한 단계 포함 되어 있습니다. 또한,이 프로토콜에는 이상적인 행동 테스트 지역, 경기장, 문맥 단서 및 OLT와 NORT 프로토콜의 구현에 대 한 무대를 설정 하는 비디오 녹화 시스템의 배치를 포함 하 여 자세히 설명 합니다. 성공적으로 결함이 연구에 대 한 대표적인 결과, 모든 재료와 각 연구에 대 한 절차를 최적화의 중요성을 강조 표시 됩니다.
| 설명 | 옵션 | 수량 |
| 파트 a: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 cm x 40 cm x 40.64 c m) | 라우트된 가장자리 | 2 |
| 파트 b: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 cm x 40 cm x 41.91 c m) | 라우트된 가장자리 | 2 |
| 파트 c: 아크릴 시트-불투명 화이트 (0.635 c m x 41.91 c m x 41.91 c m) | 라우트된 가장자리 | 1 |
| Acryllic 시멘트 (1 태평양 표준시.) | NA | 1 |
| 16 게이지 Hypo 주걱 | NA | 1 |
| 조합 광장 | NA | 1 |
| HD 웹캠 | NA | 1 |
| 비디오 캡처 소프트웨어 | NA | 1 |
| USB 2.0 연장 케이블 | NA | 1 |
| 케이블 도관 | NA | 1 |
표 1: 행동 테스트에 필요한 장비와 재료의 항목별된 목록입니다.
Protocol
다음 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 오하이오 주립 대학 (OSU)에 의해 승인 되었습니다.
1. 건물은 경기장
- 표 1에 제시 된 재료 주문: 아크릴, 아크릴 시멘트 및 16 G 5 시트 hypo 주걱.
- 눈, 피부, 그리고 보호의 다른 종류를 포함할 수 있는 제조업체의 지침에 따라 적절 한 안전 장비를 착용 하십시오.
- 아크릴 시트에서 보호 종이 코팅을 제거 합니다.
- 드라이 맞는 크기 올바른 (그림 1A)는 것인지 모든 자료.
- 조립 및 아크릴 시멘트로 주사기를 로드 합니다.
- Base (C 파트)의 위쪽 가장자리와 외부 벽 (Part B)의 긴 가장자리를 정렬 하 고 조합 또는 준 사관 스퀘어를 사용 하 여 서로 수직인 지 확인.
- 주사기를 사용 하 여 직접 조인 되는 두 조각의 모서리에 시멘트의 작고 꾸준한 구슬을 적용.
- (약 5 분) 처음 설정 될 때까지 보류 두 장소에서 (부품 B와 C)를 조각.
참고: 일반적으로, 그들은 80% 됩니다 24 h에 강화 하지만 어셈블리는 5 분 후에 계속 수 있습니다. - 동일한 자료를 다른 외부 벽 (Part B) 1.5-1.7 단계를 반복 합니다.
- 베이스 단계 1.5-1.7를 사용 하 여 두 내부 벽 (A), 한 번에 하나씩 연결 합니다.
- 또한 주사기를 사용 하 여 작은 적용 하 고 직접 시멘트의 꾸준한 구슬 내부와 외부 벽 (Part B)에 의해 형성 되 고 지금 코너에 벽 (A).
- 5 분에 대 한 장소에서이 잡으십시오.
- 24-48 h 후 진행 행동 테스트 환경을 설정 합니다.
2. 행동 테스트 환경 및 장비 설정
- 장소 환경 단서 (토론 섹션에 설명 된) 서로 테스트 영역 (그림 1B)에 경기장을 직면 하 고 건너편.
- 4 테스트 경기장 바닥 또는 단서와 생쥐 (그림 1B)에 시각 입력을 최대화 하기 위해 카메라에서 적절 한 거리에서 건장 한 테이블에 2-2 방식으로 정렬 합니다.
- 이 거리는 경기장 사이 단서는 적절 한 것인지 단서도 벽을 통해 각 경기장 바닥에서 누워 미터 막대기를 사용 하 여 시력의 라인을 확인 합니다.
- 카메라의 높이 테이블의 높이 조정 하 여 모든 4 개의 경기장의 비디오 설명서를 수 있는 최적의 광학 경로 길이 확인 합니다. (그림 1B)입니다.
- USB 연장 케이블에 카메라를 연결 합니다.
- 케이블 raceways를 사용 하 여 천장에 걸쳐 케이블을 실행 하 고 비디오 실행 하는 컴퓨터를 벽 아래 캡처 소프트웨어.
- (그림 1C) 연구원에서 테스트 영역에서 마우스를 분리 하는 커튼 뒤에 컴퓨터를 숨깁니다.
- 4 각 약 2-5 cm 길이 폭에서 적어도 3 다른 개체의 조립 (그림 1D)를 테스트 하기 위해 사용 하는 높이 10 c m 최대.
그림 1: 행동 테스트 준비. (A) 오픈 필드-테스트 아레나 어셈블리 부품 A 및 해당 하는 내부 벽, 외부 벽으로 파트 B 파트 C 기반으로. 완성 된 무대 자료 (파트 C)의 인접 한 가장자리에 외부 벽 사이 들어갈 두 내부 벽 (부품 A) 두 외벽 (부품 B) 기지의 전체 가장자리를 실행 하는 있을 것 이다. 모든 벽은 기지 위에 휴식 것입니다. (B)는 0.62 m 높은 테이블, 60 x 90 cm 환경 신호, 빛, 및 동시에 모든 4 개의 분야의 캡처 수 있도록 테스트 영역에 대 한 카메라에 경기장의 대표적인 배열. (C) A 커튼 실험 쥐에서 실험 및 컴퓨터 시스템을 숨깁니다. 오버 헤드 조명에이 사진을 가기의 목적에 대 한 하지만 테스트 중에 바닥 램프는. 또한, 환경 단서 중 테스트 영역의이 사진에 대 한 제거 되었습니다 하지만 테스트 중 모두 검은색 큐 테이블 뒤에 직면 하 고, 경기장 앞 4 큐. (D) A 대표 개체 (및 규모에 대 한 눈금자) 하는 OLT 또는 NORT 마우스 테스트 적합 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
- 이러한 개체를 확인 합니다.
- 사용 될 실험 쥐의 섹스, 스트레인, 그리고 연령 집단 대표에 8 야생-타입 마우스의 최소 얻기 (예: 6 9 주 된 여성 및 남성 C57Bl/6 쥐).
- 매일 3-5 일 전에 테스트의 과정을 통해 1 분에 대 한 모든 쥐를 처리 합니다.
- 4의 그룹으로 마우스를 분할 하 고, 이미 홀로 지 내게 하지 그들이 경우 깨끗 한 감 금 소를 들고 개별으로 이동.
- 시험장에 갖다 고 적어도 30 분 적응 하도록 허용.
참고: 이러한 30 분을 위한 공간에서 실험의 존재 줄일 것입니다 쥐에 대 한 스트레스는 작업 하는 동안 특히 경우에 실험 자 남성20. - 새 환경 순응 이루어집니다는 실험 시작, 비디오 녹화를 시작 하는 후에.
- 각 마우스 (릴리스 코너 라고 함)는 경기장의 한 모퉁이의 벽을 직면 하 고 (그림 2A).
- 10 분 동안 자유롭게 경기장 탐험 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 20 분 동안 그들의 깨끗 한 들고 연습장에 마우스를 반환 합니다.
- 깨끗 한 동물 시설 모든 경기장 청소 방법, 다음 사용 하기 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 것이 좋습니다.
- 개체는 경기장, 6 x 6 cm2 (그림 2B) 그 코너의 각 벽에 균형 세력 그런 2 비 릴리스 모서리 근처 2 다른 개체를 부착 양면 테이프를 사용 하 여.
- 비디오 녹화를 시작 합니다.
- 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
- 무대와 10 분 동안 자유롭게 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 장소 쥐 20 분 동안 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시.
- 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
- 모든 개체 (적어도 3 개의 다른 개체 OLT와 NORT 실시 하는 경우) 각 마우스와 함께 테스트 되었습니다 때까지 동일한 위치에 부착의 새로운 개체 2 개 교육 실험을 반복 합니다.
- 개체 위에 앉아 마우스를 허용 하는 개체를 제외 합니다.
- 4 단계에 따라 각 개체를 각 마우스의 조사 시간을 분석 합니다.
- 음수 또는 양수 값이 기본 개체를 제외 합니다.
3. 행동 테스트 실시
- 테스트 하기 전에 1 주: 행동 테스트를 실시 하는 개인에 게 친 하 게
- 성인 6 9 주 된 여성 및 남성 C57Bl/6 마우스 매일 3-5 일 전에 테스트의 과정을 통해 1 분에 대 한 처리 합니다.
- 제 1 일: habituation 세션
- 4의 그룹으로 마우스를 분할 하 고, 이미 홀로 지 내게 하지 그들이 경우 깨끗 한 감 금 소를 들고 개별으로 이동.
- 시험장 갖다 고 적어도 30 분 동안 시험장에 적응 하도록 허용.
참고:: 이 분을 위한 공간에서 실험의 존재는 실험 자 남성20인 경우에 특히 작업 동안 쥐에 대 한 스트레스를 줄일 것입니다.
- 새 환경 순응 이루어집니다는 실험 시작, 비디오 녹화를 시작 하는 후에.
- 경기장 (경기장 당 한 마우스)에서 각 마우스를 놓습니다 릴리스 모서리 (그림 2A)의 벽을 직면 하 고.
- 6 분 동안 자유롭게 경기장 탐험 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 시도 간 간격 (ITI) 동안 그들의 깨끗 한 들고 연습장에 마우스를 반환 합니다.
- 깨끗 한 동물 시설 모든 경기장 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
- 각 마우스에 대 한 3 habituation 세션의 총 단계 3.3-3.9 두 번 더 반복 합니다.
- 자신의 집 새에 모든 쥐를 반환 합니다.
- 동물 시설 70% 에탄올으로 닦아 같은 청소 권장 사용 다음 날 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 모든 경기장을 청소.
- 제 2 일: 교육 시험, OLT, NORT
참고:는 NORT 옵션 테스트입니다.- 24 시간 후 테스트 룸에 쥐의 동일한 그룹을 가져오고 적어도 30 분 전날에 habituation 세션 전에 해 서 시험장에 적응 하도록 허용.
- (그림 2B) 경기장에 배치 하는 2 개체를 사용 하 여 훈련 시험을 실시 합니다.
- 그들은 경기장에 균형 세력 그런 개체 6 x 6 cm2 2 비 릴리스 모서리에서 부착 양면 테이프를 사용 하 여.
- 비디오 녹화를 시작 합니다.
- Habituation 세션 동안 릴리스 코너 벽에 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
- 무대와 10 분 동안 자유롭게 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 20 분의 일일이 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시 장소 마우스.
- 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
- OLT를 수행 합니다.
- 새로운 비 자료 코너에 예 심 훈련에 사용 되는 개체 중 하나를 이동 하 고 개체 더블 양면 테이프 (그림 2C)와 그 코너의 각 벽에서 6 cm을 부착.
참고: 다른 개체 예 심 훈련 기간 동안 그것이 있어야 합니다. - 비디오 녹화를 시작 합니다.
- 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
- 10 분에 대 한 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 20 분의 일일이 그들의 깨끗 한 지주 장에 다시 장소 마우스.
- 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
- 새로운 비 자료 코너에 예 심 훈련에 사용 되는 개체 중 하나를 이동 하 고 개체 더블 양면 테이프 (그림 2C)와 그 코너의 각 벽에서 6 cm을 부착.
- NORT를 수행 합니다.
- 개체를 새로운 개체와 OLT 동안 이동 하지 교체 하 고 새로운 개체 더블 양면 테이프 (그림 2D)와 코너의 두 벽에서 6 cm을 부착.
- 비디오 녹화를 시작 합니다.
- 릴리스 모서리에 벽을 직면 하는 각 마우스를 놓습니다.
- 10 분에 대 한 개체를 조사 하는 쥐를 수 있습니다.
- 동영상을 기록 중지 합니다.
- 자신의 집 새에 다시 마우스를 놓습니다.
- 깨끗 한 모든 경기장 및 동물 시설 개체 청소 다음 사용 하기 전에 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올으로 닦아 같은 방법을 권장 합니다.
그림 2: 재판에 대 한 경기장 구성. (A) 오픈 필드 개체 없이 아레나 habituation 세션에 대 한 테스트. 검은색 화살표 릴리스 모서리를 나타냅니다. 이 코너 각 분야에서 동일한 상대 위치와 모든 마우스 테스트 한 모든 재판에 대 한 일관성 있어야 합니다. (B) 훈련 재판에 대 한 두 개의 서로 다른 개체는 그들의 각각 벽에서 6 x 6 cm에 오픈 필드에 확보. (C)에 OLT, 하나의 개체는 새로운 위치, 벽과 하지 릴리스 코너 또한 6 x 6 cm 이동 합니다. (D)에 대 한 the NORT, OLT에서 고정 된 개체는 OLT에서 이동된 개체는 이제 익숙한 개체 소설 개체로 바뀝니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
4. 행동 테스트 데이터 분석
참고: 비디오의 분석 이상적으로 적어도 2 명의 독립적인, 멀게 경험에 의해 완료 되어야 한다.
- 비디오 파일을 엽니다.
- 적극적인 수사를 확인 하는 데 화면을 통해 각 개체 주위 2 cm의 테두리를 제공 하는 투명 한 원 적용. 경기장에 배치 하는 통치자와 비디오 파일 이미지를 사용 하 여이 표를 보정.
- 마우스 동작을 관찰 하 고 기록 시간 마우스 적극적으로 조사 하 고 그것의 코 2 cm의 최대 거리에 있는 개체에서 해당 개체에서 지적으로 구성 된 개체.
- 레코드 타임 스탬프 마우스 개체를 조사 하 고 중지 하는 경우 개체 및 타임 스탬프를 조사 하기 시작 합니다.
- 재판 기간에 대 한 경기장에서 두 개체에 대해이 반복 합니다.
- 마우스 조사 각 개체, 개체의 각 인스턴스에 대 한 정지 시간에서 시작 시간을 뺀 모든 이러한 값을 추가 하 여 누적 시간을 계산 합니다.
- 총 조사 시간 또는 다음 수식 차별 색인의 %를 계산.
- 총 조사 시간 % 계산 =
참고: 값을 50% 이상 소설 위치 또는 개체의 큰 조사를 나타냅니다. - 차별 지 계산 =
참고: 양수 값 소설 개체를 조사 하 고 더 많은 시간을 나타냅니다. 0의 차별 색인 동등한 시간 두 개체와 함께 보낸 나타냅니다.
- 총 조사 시간 % 계산 =
- 그래픽으로 결과 비교 되는 그룹의 수에 대 한 적절 한 t-검정 또는 ANOVA를 사용 하 여 완전 한 통계 분석을 나타냅니다.
Representative Results
그림 3 남성과 여성의 성인 C57Bl/6 마우스이 프로토콜6을 사용 하 여 얻은 전형적인 긍정 및 부정적인 결과의 예를 제공 합니다. OLT와 NORT 데이터의 해석 항상 그룹의 집계 데이터에 적용 됩니다 (아래 내용 참조). 단일 마우스에 대 한 조사 시간 메모리 또는 메모리의 부족으로 해석 될 수 없습니다. 그러나, 쥐의 그룹의 성능 (즉., 여러 샘플) 또는 통계 테스트를 사용 하 여 고정된 기회 수준에 다른 그룹에 비교 될 수 있다. 전형적인 훈련 재판 중 쥐의 그룹 표시 되지 않습니다 중요 한 기본 평균 개체 중 하나에 대 한 그들은 둘 다 동등 하 게 소설 그리고 쥐 (그림 3A 와 3B) 본질적으로 음수 또는 양수 값을 필요가 없습니다. 쥐의 그룹의 집계 데이터 훈련 기간 동안 다른 한 개체에 대 한 상당한 선호를 보여주면, 그 고유한 기본 설정/혐오 후속 실험에서 결과 혼동 것입니다 때문에 이러한 개체 사용 하지 해야 합니다. 또한, 모든 마우스의 총 조사 시간 최소 기준을 충족 해야 합니다 (일반적으로 20 초21에서 설정) 메모리의 후속 테스트에 영향을 미칠 수 있습니다 조사에서 기준 차이가을 비교 한다.
OLT, 동안 메모리 개체 위치에 대 한 지출 평균 이동된 개체 (그림 3A)와 총 조사 시간의 50% 이상 크게 쥐에 의해 반영 된다. 개별 마우스의 총 조사 시간은 크게 다릅니다, 결과 (그림 3B) 개체에 대 한 차별 색인으로 묘사 더 나은. 그림 3B 에서 평균 차별 색인에 크게 증가 이동 했다 쥐 개체와 함께 더 많은 시간을 보낸 것을 나타냅니다. 증가 백분율 시간 또는 차별 색인에 의해 측정 여부 개체 이동 후의 조사에서 증가 쥐 개체는 훈련 기간 동안 위치 기억 나왔다.
이 프로토콜의 마지막 재판 개체 인식 메모리를 평가합니다. 1 쥐 그룹이 대표적인 예를 들어 각각 50%와 0, 고정된 컨트롤 값에 비해 긍정적인 차별 지 (그림 3D) 뿐만 아니라 조사 시간 (그림 3C)의 더 높은 평균 백분율을 보여 줍니다. 과 같이 OLT 데이터 개별 쥐 간의 총 조사 시간에 중요 한 변화는 경우 차별 색인이 이다 가능성이이 데이터를 시각화 하려면 더 나은 방법. 그림 3E 는 NORT에이 테스트 (내용 참조)에서 발생할 수 있는 통계 합병증 중 일부 2-그룹 비교의 예를 보여 줍니다. 그룹 B에 대 한 1-표본 t-검정 조사 50% 이상 크게 보여, 같은 테스트 그룹 A는 하지 않습니다. 이 A와 B는 서로 다른 의미 하지 않는다. 그룹의 차이 확인 하려면 비교 하는 a 그룹 B 별도 2 표본 비패라메트릭 맨-휘트니 검정을 수행 합니다. 이 대표적인 그룹 데이터의 2-표본 비패라메트릭 맨-휘트니 검정 큰 차이 보여줍니다 (p = 0.66) 소설 개체 조사 시간에 두 그룹 사이.
모두는 OLT와 NORT는 개체의 본질적인 가치에 매우 민감한 이며 개체 등가의 철저 한 테스트 결과 혼동 수 없는 본질적인 바이어스 인지 확인 하는 데 필요한. 그림 3 층 및 3g 부적절 한 개체 선택의 예를 보여줍니다. 파일럿 테스트에서 4의 샘플 크기와, 마우스 동향 지출 개체 개체 B (그림 3 층)에 대 한 쌍이 될 때 A와 조사 시간의 50% 미만으로 보였다. 이러한 개체 소설 개체 및 16의 큰 샘플 크기 NORT 개체 A에에서 사용 했다, 쥐 크게 50% 미만 개체 A와 조사 시간 (그림 3)를 보냈다. 소설 개체에이 혐오는 쉽게 인식할 수 있는 실험에 기술 결함으로 여기 고 고유의 기본 설정/혐오에 대 한 개체의 파일럿 테스트 하는 것은 필수적입니다 하는 이유를 보여준다.
그림 3: 야생 타입 성인 C57Bl/6 마우스 행동 테스트 데이터. (A) 조사, 개체 이동 후의 OLT 쇼 크게 증가 대 예 심 훈련 기간 동안 이동된 개체의 % 총 조사 시간의 비교. p < 0.0001, 쌍체 t 검정입니다. (B) 대표 결과 훈련과 OLT 재판 차별 색인으로 표시 하는 동안 이동된 개체 조사에 대 한 유사 하 게 보여 크게 증가 개체의 조사에서 이동 후. p < 0.0001, 쌍체 t 검정입니다. (C)는 NORT에 소설 개체의 % 총 조사 시간 소설 개체 조사에 대 한 중요 한 선호를 보여줍니다. * * p = 0.0024, 1-표본 t-검정 vs. 50 %입니다. (D) 대표 소설 개체 조사 NORT 차별 색인 마찬가지로 소설 개체 조사에 대 한 기본 설정 표시 표시에 대 한 결과. * * p = 0.0024, 1-표본 t-검정 vs 0. (E) 마우스의 두 개의 서로 다른 그룹을 포함 NORT 분석의 대표적인 결과. B 조 1-표본 t-검정에 의해 50%에서 크게 다릅니다 (* * p = 0.0024), 그룹 A는 하지 않습니다만 (p = 0.5837). 별도 분석에서 그룹을 비교 하는 2 표본 맨-휘트니 검정 고르지 그룹 크기 때문에 사용 되 고 조사에 큰 차이 발견 (p = 0.66, ns). (F) % 시간 유효성 검사 실험 작은 샘플 크기에 개체와 개체에 대 한 반감으로 추세를 보여줍니다. p = 0.2159, 1-표본 t-검정. (G) 더 큰 샘플 크기와는 NORT에 새로운 개체로 사용 (F)에서 개체, 개체에 상당한 혐오 감을 발견 되, 비록 소설 개체. * p = 0.0270, 1-표본 t-검정. 이 개체 선택에서 기술적인 실패의 예입니다. 데이터는 C-E6이전 간행물 적응 패널에서 ± SEM. 데이터를 의미 하는 대로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Discussion
이 프로토콜 개체 위치 및 소설 개체 인식 행동 쥐에서 테스트를 수행 하는 비용 효율적인 방법을 제공 합니다. 이러한 테스트 hippocampal 기능 뿐만 아니라 다른 대뇌 피 질의 영역, 전 두 엽 피 질, 개체 인식10에 참여 등의 기능 평가 가능 OLT와 NORT 모리스 물 미로, 상황별 두려움 컨디셔닝, 반 즈 미로 또는 광선 팔 미로에 필요한 강한 감정적인 원자가와 자극 방지의 이점이 있다. 그들은 또한 광선 팔 미로 대 한 필요에 따라 식량 부족에 대 한 필요성을 하지 마십시오. 또한,이 프로토콜 실행 또는 분석을 위한 광범위 하거나 복잡 한 장비를 요구 하지 않는 간단한 2 일 테스트 절차를 설명 합니다. 이러한 작업의 한 가지 단점은 그들은 학습 또는 획득의 측정에 대 한 허용 하지 않습니다. 참신 조사에 차이 훈련, 가난한 배운 했다에 대 한 메모리 또는 둘 다 중 개체에 대 한 가난한 학습 때문일 수 있었다. 총 시간 배제 탐사 드라이브에 고유의 차이 대 한 중요 한 조치 이지만 학습의 측정은 개체를 조사. 학습의 측정 실험 질문에 대 한 중요 한 경우에, 물 미로, 반 즈 미로, 또는 광선 팔 미로 가능성이 것입니다 것이 좋습니다.
행동 분야의 사용자 지정 건물 수백 달러를 저장 하 고 다양 한 실험실의 재정 범위 내에서 테스트 개체를 가져올 수가 있다. 이 프로토콜은 많은 장애물을 제거 하 고 아크릴에 사내 경기장 건설 특수 훈련 된 과학자를 더 액세스할 수 있도록 제작 과정을 간소화. 그 쥐, 검은 쥐에 대 한 백색 아크릴 등 흰 쥐에 대 한 검정 아크릴으로 명암 것입니다 색깔된 아크릴 시트를 구입 것입니다 촉진 데이터 수집 및 분석, 상용 사용 하는 경우에 특히 주의 하는 것이 중요 하다 분석 소프트웨어입니다. 주문 테이블에 대 한 필요성을 제거 하는 "가장자리 라우팅" 컷-크기 시트 (표 1), 보았고 아크릴 시멘트를 사용 하 여 훈련 하 고 안내 하는 구멍을 원추형의 필요가 제거 합니다. 종종 패스너, 드릴링, 절단 아크릴에 속이 고 그것은 휴식, 칩, 균열의 취 성 특성으로 인해 발생 합니다. 시멘트 용 매 이다, 때문에 조인 되는 지역으로 흐를 것 이다, 용 해 및 어떤 아크릴 연 화 발생. 따라서, 그것은 해야 적용 되지 각 부분에 별도로 마치 그것이 전통적인 접착제. 접착제, 달리 시멘트는 부정적인 공간 채우기 또는 표면에 고착 하지 것입니다. 이 이렇게 하면 훨씬 더 나은 본드를 만드는 부드럽고 평평한 지 대로 "라우트된 가장자리"를 주문 하는 주된 이유입니다. 때 시멘트 건조, 그것은 "용 매 용접" 이라고 하는 과정에서 한 조각에 두 아크릴 시트를 융합 됩니다. 금속 용접 처럼 완제품은 한 조각, 하지만 용접된 면은 약한 위치를 항상 유지 됩니다. 따라서, 일단은 경기장 사용에, 직접적인 영향 또는 그 과정에서 극단적인 스트레스를 피하기 위해 배려를가지고 한다.
이 프로토콜은 또한 동시에 최대 4 마우스 (그림 1 및 그림 2)의 테스트에 대 한 4 경기장을 설정 하는 방법을 보여 줍니다. 경기장의 불투명 벽 방지 마우스 테스트 하는 동안 서로 볼 하지만 여전히 가능성이 방에 다른 마우스는 데 냄새를 발생 또는 테스트 하는 손상 시킬 수 있는 잡음 산만. 자세한 여기 수 요법이 니 재판으로 마우스 행동 테스트 하기 전에 여러 동물 실 조건에 노출 되는이 관심사를 완화 도움이. 그러나, 경우 산만 다른 쥐 또는 실험에서 다른 마우스 처리와 관련 된 잡음은 강한 우려, 하나의 마우스와 하나의 경기장 있지만 사용할 수 있습니다, 뿐만 아니라, 여러 마우스 OLT와 NORT를 완료 하는 데 필요한 시간을 증가 시킬 것 이다. 4 이상의 경기장을 이론적으로 뿐만 아니라, 사용할 수 있지만 대부분의 카메라는 충분히 넓은 시야 좋은 해상도 함께 많은 무대를 보여 필요가 없습니다.
크기 및 거리 제공 여기 차원 (그림 1B 및 1 C)에서 16 m3 x 16 x 16은 일반적인 테스트 룸에서 마우스 행동 테스트 하기 위한 일반 지침입니다. 적절 한 환경 단서의 설정, 각 환경에 대 한 경기장, 및 비디오 녹화 장비를 낙관 되어야 한다. 신호는 큰 도형이 나 패턴 (일반적으로 흑인과 백인) 공간 OLT 동안 향하게 하 쥐 수 있도록 구성할 수 있습니다. 대신 서로 다른 위치에서 신호를 배치, 신호 또한 테스트 영역의 벽에 탑재할 수 있습니다. 이 프로토콜 행동 테스트 하는 동안 연구원 및 컴퓨터를 숨기려고 커튼으로 시험장을 분할 하는 것이 좋습니다. 모든 습관 들 임, 간 시험 간격 및 활성 실험, 동안 연구원 테스트 영역에서 자신을 분리 하는 커튼을 종료 해야 합니다. 이것은 실용적인, 컴퓨터 마우스에 비추어 남아 있을 수 있습니다 하지만 연구원 보기에서 작업 하는 동안 이동 해야 합니다. 연구원은 현재, 쥐 공간 큐로 그녀 또는 그에 의존 하는 시도할 수 있습니다.
모든 행동 테스트 하는 것은 약 310 럭 스 및 경험에 대 한 향수 같은 최소한의 외부 사운드 또는 강한 환경 냄새 신호에 희미 하지만 조명 온도 및 습도 제어 환경에서 완료 되어야 합니다. 각 시도 테스트 하루 사이 모든 경기장 및 개체 후 각 신호를 최소화 하기 위해 70% 에탄올 또는 unscented 표 백제로 닦아 잎사귀 같은 살 균의 방법을 권장 하는 동물 시설 청소 되어야 한다. 화학 소독 제를 사용 하는 경우 70% 에탄올과 최종 린스가 많은 화학 소독 제 동물의 발을 자극 수 있기 때문에 좋습니다. 마찬가지로 몇 일 전에 테스트는 OLT와 NORT 수행 되며20,22를 테스트 하는 동안 스트레스를 줄일 수 있는 개인 들을 숙지 하는 데 필요한 마우스 처리 어떤 행동 작업. 으로 마우스 테스트 지역 주변 생소 한 개인 때문에 급성 스트레스를 경험할 수 있다, 또한 모든 행동 테스트 같은 개인 (들)에 의해 완료 해야 것이 좋습니다. 테스트 매개 변수 및 조건이이 프로토콜에 대 한 자세한 6 9 주 된 성인 C57Bl/6 마우스에 대 한 최적화 된이 연령 그룹에서 부상으로 인해 메모리 장애 공개에 가장 도움이 될 것 이라고 또는 메모리 손상 때문에 이전 마우스 자체이 나이. 목표는 젊은 쥐에서 메모리 개선에 대 한 테스트를, 경우 1 일 1 시간에서까지 더 이상 일일이 쉽게 20 분 ITI 버전에서 성능에 천장 효과 피하기 위해 더 적절 한 것입니다. 실제로, 그것은 이다 (즉시 리콜)에 대 일 분에서 몇 시간 또는 일 (대 한 원격 기억), 실험 및 긴장의 특정 요구와 쥐의 연령대에 따라 배열할 수 있다. 중요 한 것은, 길이 관계 없이 모든 그것은 이다 실험에서 세션 간에 일관 되어야 합니다. 다른 긴장 및 쥐의 나 전시 행동 및 학습, 지역 배열, 테스트 각 재판 및 간격, 타이밍의 차이 쥐, 그들의 나이, 그리고 특정 상해의 특정 변형에 따라 사용 되는 개체를 수정할 수 있습니다 / 9,21,,2325테스트 질병/개입 모델 되 고.
공간 메모리 기능 hippocampal 의존에서 테스트 하는 동안 OLT 확고는 NORT 수도 해 마에 의존 하지 않을 수 있습니다. NORT에서 데이터의 해석 계정에이 경고를 해야한다. 여부 해 마 관련 개체 인식 메모리에 대 한 결정 변수에 아직 동의 하지 하지만 일일이 길이 또는 공간 신호18의 saliency 포함 될 수 있습니다. 특히, 제시 프로토콜 공간 OLT는 NORT hippocampal 프로세스를 사용 하 여 쪽으로 마우스를 편견 수 있습니다 NORT 전에 사용 합니다. 따라서, 순서 반전 될 수 있다, 또는 각 작업 실행 될 수 있습니다 하지 독립적으로, 경험의 질문과 요구에 따라 주의 하는 것이 중요 하다.
개체 선택은 OLT와 NORT22,24의 중요 한 측면 이다. 이상적인 개체는 충분히 무거운 하지 쉽게 마우스에 의해 전치 하 고 물자, 유리 또는 금속, 마우스 씹는 또는 긁힘 손상 수 없습니다. 나무, 거품, 또는 연약한 플라스틱 개체 되지 않습니다 그들은 쉽게 모양 없이 하 고 냄새 없는 유지 하기 어려운 적절 한. 또한, 재판에서 사용 되는 개체 모두 해야 상대적으로 비슷한 크기, 질감, 냄새에 소재 합니다. 그림 1D 는 사용 될 수 있는 적절 한 개체의 예를 제공 합니다. 여자의 오렌지 플라스틱 입상이 그것을 주는 충분 한 무게 모래 가득 이며 청소 시 약 또는 다른 냄새를 일으키는 요원의 누설을 방지 하기 위해 봉인. 위쪽의 모양 때문에 쥐의 위에 상승 하거나이 개체에 앉아 수 없습니다. OLT에 NORT,이 개체는 가장 비슷한 크기, 무게, 물자, 색깔 및 복잡성, 토끼의 유사한 플라스틱 입상 등의 다른 개체와 결합 됩니다. 되도록 개체 조사는 진정으로 참신에 대 한 선호를 반영, 최소 8 쥐 같은 변형에 해당 본질적인 가치에 대 한 모든 개체를 확인 합니다, 섹스, 그리고 실험 그룹의 나이 프로토콜의 2.9에서에서 설명 합니다. 또한, 개체 용어는 개체의 고유한 특성은 개체의 기본 설정에는 영향을 미치지는 추가 되도록 동일한 연구에서 쥐 사이 소설 또는 이동 개체에서 무작위로 한다. 개체 배치 OLT와 NORT의 성패에 크게 달라질 수 있습니다. 개체는 경기장에서 counterbalanced 될 하 고 벽에 너무 가까이 하지 않을 해야 합니다. 개체에 의해 혼잡 코너 숨기려고 쥐에 대 한 매력적인 장소 이며이 사의 조치를 혼동 됩니다.
"활성"에 조사 때 개체에 그것의 코를 가진 개체를 종사 하는 마우스를 정의 하는 데이터 수집에 중요 한 전제 조건 2 cm 이상의 거리. 마우스를 개체 위로 이동 또는 개체 과거 찾고 활성 조사로 자격이 되지 않습니다. 또한, OLT와 NORT 마우스 기억 공간 위치 또는 개체의 실제 기능에 따라, 이후이 교육 실험의 충분 한 연구 되어야 합니다. 따라서, 연구원 최소 조사 시간을 정의 하 고 조사, 20 초21에서 전통적으로 설정의 기본 수준을 충족 하지 않는 모든 과목을 제외 해야 합니다.
개체 조사 시간 정량화 하거나 비싼 분석 소프트웨어 없이 다양 한 방법으로 수행할 수 있습니다. 수동 채 점을 사용 하는 경우, 여기에 설명 된 대로, 가장 포괄적인 데이터 수집 마우스 개체를 조사 하는 경우 비디오에 타임 스탬프를 기록 하 여 얻을 수 있습니다. 3 개별 재판 동안 개체의 시작 및 중지 시간 기록 편견된 타임 스탬프의 영구 로그 만들고에 기초 시계를 사용 하 여 대체 방법 반대로 데이터의 정확한 수동 계산을 용이 하 게 없애는 마우스 각 개체를 조사 하는 총 시간을 기록 합니다.
상용 소프트웨어 패키지 개체 조사 점수에 대 한 사용할 수 있습니다. 상용 소프트웨어는 총 거리를 포함 하 여 여기에 설명 된 데이터를 점수 손으로 넘어 데이터의 여행, 경기장의 특정 영역 및 운동16,23의 속도에서 보낸 시간을 제공할 수 있습니다. 소프트웨어를 한 번 제대로 보정 하 고 개체 조사를 안정적으로 감지 확인 또한 수동 점수 보다 훨씬 빨리 데이터를 얻을 수 있습니다. 이 빠른 데이터 항복 팬 들은 수동 점수에 필요한 인간 시간에 비해 순수한 저축의 정보를 얻을 긴 안목으로 보면, 수 있습니다. 그러나, 행동 분석에 대 한 대부분의 소프트웨어 패키지는 많은 실험실에 대 한 금지 될 수 있는 높은 초기 비용 및 수동 채 점 자주 달성 될 수 있다 행동 득점의 시간당 비용을 최소 하 하는 학생 연구원. 상용 소프트웨어는 또한 얼마나 많은 사용자가 동시에, 소프트웨어 데이터 처리량 및 시간 절감을 제한 액세스할 수에 제한 함께 제공 됩니다. 비록 이러한 소프트웨어 패키지에 많은 이점이 있다, 그들은 시간 조사 하는 OLT와 NORT에서 개체의 필수 정보를 수집 하는 필요 하지 않습니다. 수동으로이 데이터를 얻기 위해 기능 통해 소설 개체 작업 다양 한 연구에 더 많은 재정적으로 액세스할 수 있습니다.
이 프로토콜의 추가 기능이입니다 그 요법이 니의 첫 번째 세션 활동 및 불안 수준에 대 한 데이터를 얻을 수 있습니다 오픈 필드에 기본적으로 재판. 활동 수준의 주행 한 총 거리를 사용 하 여 측정할 수 있다 또는 평균 속도, 소프트웨어 추적 사용할 수 있는 경우. 마찬가지로, 추적 소프트웨어, 불안 측정 경기장 또는 센터에서 주행 거리의 중심에서 소비 된 시간에서 파생 될 수 있습니다. 이러한 데이터 그리드 경기장 비디오 오버레이 및 횡단을 정량화 하 여 수동으로 또한 취득 수 있습니다. 이 오픈 필드 데이터 총 모터 적자 또는 나중에 개체 조사를 방해할 수 있습니다 과도 한 불안을 배제 수 있습니다.
이 프로토콜에 사용 되는 통계적 테스트는 분석의 전통적인 방법의 대표. 쥐의 2 그룹을 비교할 때 두 표본, 두 꼬리 t-검정 그룹 간의 이동 이나 새로운 개체를 조사 하는 백분율 시간 차이의 중요성을 테스트 것이 좋습니다. 샘플 크기 조차 없는 경우, 매우 높은 다양성, 또는 표시 그룹 사이 고르지 못한 변화 비 파라메트릭 테스트 것이 좋습니다 대신, t-테스트의 기본 가정에의 많은 이러한 조건에 위반 될 것입니다. 쥐의 3 개 이상의 그룹을 비교할 때 ANOVAs 그룹 % 시간 이동 또는 소설 개체 조사에 상당한 효과가 있는지 여부를 테스트 하도록 추천 된다. 오류 수정 게시물-특별 검사, 같이 Tukey의 테스트 또는 Bonferroni 수정 없음을 비교, 테스트 그룹의 각 쌍 사이 백분율 조사 시간에 차이를 적용할 수 있습니다. OLT와 함께 데이터를 분석 하는 추가 방법으로 OLT 실험 훈련에서 이동된 개체를 조사 하는 백분율 시간에 중요 한 변화에 대 한 테스트 하는. 마우스의 단 하나의 그룹과이 테스트 쌍, 두 꼬리 t-검정, 각 마우스에서 OLT 훈련에서 이동된 개체와 백분율 시간에 중대 한 변화에 대 한 테스트의 형태를 걸릴 것 이다 (분석 한 쌍이 다는 것을 명심 하지 독립 측량, 각 마우스 두 가지 데이터 포인트를 생성 하는 때문에,). 마우스, 양방향 ANOVA를 사용 될 것 이라고, 반복된 측정의 2 개 그룹으로 반복 측정 되 고 재판 (OLT 대 훈련)과 그룹 할당 되 고 두 번째 요소. 치료 그룹 간의 차이점에 대 한 게시물-특별 테스트 재판 내에서 서로 그룹을 비교 해야 합니다.
또는, OLT 또는 NORT에 메모리의 증거 테스트 중인 모든 경우, % 시간 조사 50%의 고정 값 개체의 한 표본 t-검정 사용할 수 있습니다. % 시간 50% 보다 상당히 높은 메모리 개체에 대 한 제안합니다. 50% 이하로 크게 % 시간 (몇 가지 이유로), 혐오를 제안 하 고 개체 선택 다시 평가 되어야 합니다. 그러나, 1-표본 t-검정은 두 개 이상의 그룹에서 서로 다른 지 여부를 공개할 수 없습니다. 예를 들어 마우스, 그룹 A p에 대 한 새로운 개체와 시간의 60%를 지출 하는 경우의 두 그룹으로 실험에에서만 p에 대 한 59%의 새로운 개체와 함께 시간을 보낸 50%, 및 그룹 B 0.049 하나 샘플 t-테스트 비교 = = 0.051 그룹 A는 50%에서 크게 다른 (그리고 그룹 B) 아니에요. 그러나, 그것은이 두 그룹은 서로 크게 다른 결론에 잘못 된입니다. 2-표본 t-검정 비교 A와 B는이 두 그룹을 통계적으로 구별할 수 있습니다 쉽게 밝힐 수 있다. 최종 목표는 두 개 이상의 그룹의 메모리 성능을 비교 하는, 경우는 외부 표준에 비해 뿐만 아니라, 서로 그 그룹을 통계적으로 비교 해야 합니다. 유사한 지침 비교 훈련과 OLT 사이의 이동된 개체와 함께 보낸 시간에 대 한 적용 됩니다. 이 경우에, 한 그룹 및 다른에 훈련과 OLT 사이의 이동된 개체 % 시간에 상당한 차이 찾는 표시 되지 않습니다이 그룹 통계적으로 다르다. 그룹은 게시물-특별 그룹 내 재판에서 뿐 아니라 각 재판 내에서 서로 대 한 비교 해야 합니다.
그것은 어떤 개별 마우스의 조사 시간 또는 메모리에 대 한 증거로 사용할 수 없습니다 유의 해야 합니다. 오히려, 메모리 개체 위치 또는 이러한 작업의 정체성에 대 한 수만 체결 다른 그룹의 집계 데이터 또는 고정된 기회 수준 (50 시간, 차별 비율 0%)에 비해 통계적으로 집계 데이터에 따라. 샘플 크기는 특정 조작 및 동작, 둘 다에 사용 되는 마우스에 따라 달라 집니다에 다양성의 효과 크기에 무 겁 게 따라 달라 집니다 필요. 나이, 성, 및 조작 모든 다양성에 영향을. 그림 3A 와 3B, n에서 제시 하는 예제 데이터에서 = 14 과목 사용 되었다 영역은 0.68의 효과 크기, α 쌍체 t 검정에 0.65의 힘 = 0.05. 경우 0.8의 힘은이 비교, 18의 샘플 크기를 필요한 것입니다.
이 토론은 p-값 주위에 프레임이 고 의미 차단 때문에 이러한 조치 및 분석 가장 일반적으로 OLT와 NORT 데이터에 대 한 보고 따라서 경험 및 검토자에 게 친숙 한 것은. P-값에 대 한이 의존이 통계적으로 잘못 된26으로 무 겁 게 강평 되었다. 그러나, 대체 분석 방법 존재 하 고 있지만 일부 저널27에 승인, 아무도 광범위 하 게 채택 되었다 행동 및 생물 의학 분야에 의해 표준26로.
요약 하자면,이 프로토콜 효과적으로 최소한의 비용에서 생쥐에서 메모리를 테스트합니다. 프로토콜에 적절 한 수정에 대 한 권장 어떤 작은 설치류 모델 성공적인 구현을 보장 하기 위해 포함 되어 있습니다. 이 프로토콜의 응용 프로그램을 특정 부상 또는 치료 개입 모델 공부 되 고 세포질이 고 분자 메커니즘을 보완 하는 귀중 한 기능적 관련성을 밝힐 수 있다.
Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 NIH에서 R00 NS089938 및 EDK 만성 뇌 손상 및 오하이오 주립 대학에서 발견 테마에서 씨앗 자금에 의해 투자 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 15.75" with Routed Edges |
| Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 16.5" with Routed Edges |
| Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 16.5" x 16.5" with Routed Edges |
| TAP Acryllic Cement (1 pt.) | TAP Plastics | NA | |
| 16 G Hypo Applicator | TAP Plastics | NA | |
| Debut Video Capture Software Pro Edition | NCH Software | NA | |
| Stanely SAE/Metric Comb Square | Grainger | 6R171 | |
| Logitech Pro Stream Webcam C922x | CDW | 4429927 | |
| Belkin 16' USB 2.0 Active Extension Cable | CDW | 570691 | |
| Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8') | CDW | 300902 | |
| Spatial/Environmental Cues | Variable | NA | |
| Objects for testing | Variable | NA | |
| 70% ethanol | Variable | NA | |
| Double-sided tape | Variable | NA |
References
- Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias. Neuron. 93 (3), 480-490 (2017).
- Lange, F., Seer, C., Kopp, B. Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).
- Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research. Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).
- Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. The hippocampus-what does it do? Behavioral and Neural Biology. 57 (1), 2-36 (1992).
- Bartsch, T., Wulff, P. The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability. Neuroscience. 19 (309), 1-16 (2015).
- Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice. Frontiers in Aging Neuroscience. 10 (142), 1-16 (2018).
- Chieffi, S., et al. Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A. Frontiers in Physiology. 14 (8), 85 (2017).
- Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis. Hippocampus. 26 (2), 261-271 (2016).
- Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (3), 163-174 (2000).
- Barker, G. R., Warburton, E. C. When is the hippocampus involved in recognition memory? Journal of Neuroscience. 31 (29), 10721-10731 (2011).
- Savage, S., Ma, D.
- Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures? Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).
- Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. Examining object location and object recognition memory in mice. Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).
- Ammassari-Teule, M., Passino, E. The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction. Psychobiology. 25 (2), 118-125 (1997).
- Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor. Neuropsychopharmacology. 38 (6), 1050-1059 (2013).
- Hattiangady, B., et al. Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78 (2014).
- Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory. Learning and Memory. 17 (3), 155-160 (2010).
- Cohen, S. J., Stackman, R. W. Jr Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task. Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).
- Cohen, S. J., et al. The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory. Current Biology. 23 (17), 1685-1690 (2013).
- Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
- Ennaceur, A., Delacour, J. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data. Behavioral Brain Research. 31 (1), 47-49 (1988).
- Leger, M., et al.
- Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice. Public Library of Science ONE. 11 (1), e0147733 (2016).
- Ennaceur, A. One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues. Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).
- Lueptow, L. M. Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice. Journal of Visualized Experiments. (126), e55718 (2017).
- Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose. The American Statistician. 70 (2), 129-133 (2016).
- Ranstam, J. Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative. Osteoarthritis and Cartilage. 20 (8), 805-808 (2012).
