Дискриминации в семи подмножеств иммунных клеток, два флюрохром проточная цитометрия

Maria Letizia Giardino Torchia; Raffaello Cimbro

doi:10.3791/58955

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Дискриминации в семи подмножеств иммунных клеток, два флюрохром проточная цитометрия

13.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58955

⸱

5 марта 2019 г.

Maria Letizia Giardino Torchia¹ , Raffaello Cimbro²

¹Oncology Research, Medimmune, LLC, ²Division of Rheumatology, Johns Hopkins University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем гранулярных протокол потока для определения CD4⁺ и CD8⁺ T клетки, γδ T клетки, клетки, клетки и моноцитов в периферической крови человека с помощью только двух флуорохромов вместо семи. С этим подходом пять дополнительных маркеров могут быть записаны на большинстве цитофлуориметрами потока.

Аннотация

Характеристика иммунных клеток сильно полагается на многоцветный проточной цитометрии для выявления субпопуляции, на основе дифференциальных выражения поверхностных маркеров. Настройки классической многоцветные панели требует мощных инструментов, пользовательские обозначенные антитела и тщательного изучения дизайна для сведения к минимуму спектрального наложения. Мы разработали многопараметрических анализ для выявления основных человеческих популяций иммунных (CD4⁺ и CD8⁺ T клетки, γδ T клетки, клетки B, НК-клетки и моноцитов) в периферической крови, объединив семь lineage маркеров, используя только два флуорохромов. Наша стратегия основывается на том наблюдении, что lineage маркеров постоянно выражаются в уникальное сочетание каждой популяции клеток. Сочетая эту информацию с тщательного титрования антител позволяет следователям для записи пять дополнительных маркеров, расширение оптических предел большинства потока цитофлуориметрами. Голова к голове сравнения показали, что подавляющее большинство населения иммунных клеток в периферической крови можно охарактеризовать с сопоставимой точности между нашего метода и классические «один маркер флюрохром один подход», хотя последняя все еще более точные для выявления групп населения, таких как NKT клетки и клетки γδ T. Сочетая семь маркеры с помощью двух флуорохромов позволяет для анализа сложных иммунных клеток населения и клинических образцов на цитофлуориметрами расхода флюрохром доступной 6-10 и даже на 2-3 флюрохром области инструментов в областях с ограниченными ресурсами. Высококачественные инструменты также могут воспользоваться такой подход с использованием дополнительных флуорохромов выполнить более глубокий анализ потока цитометрии. Этот подход также очень хорошо подходит для проверки несколько клеточных популяций в случае клинических образцов с ограниченным числом ячеек.

Введение

Проточной цитометрии — это метод, который был разработан для анализа нескольких параметров на одной частицы со скоростью несколько тысяч событий на втором¹. Примеры образцов анализируемой проточной цитометрии включают, но не ограничиваются, клетки, бусы, бактерии, везикул и хромосом. Аэрогидродинамических системы направляет частиц на допрос точки, где каждая частица пересекает пути с одним или несколькими лазерами, и несколько параметров записаны для дальнейшего анализа. Вперед и боковых рассеивается, порожденных рассеяния чисто лазерного света, используются для выявления целевых групп населения и извлечения сведений о относительный размер и вн....