Текущий протокол описывает комплексный метод исследования миграции клеток рака и вторжения на единой платформе в режиме реального времени, обеспечивая легко воспроизводимые и время эффективный вариант для изучения клеток мобильность и морфологии.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Простая миграция/вторжения рабочий процесс, с помощью автоматизированных Imager клеток
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Рак клеток мобильность имеет решающее значение для начала метастазов. Таким образом исследование клеточного движения и инвазивного потенциала имеет большое значение. Анализов миграции обеспечивают основные понимание клеточного движения на 2D уровне, тогда как вторжения анализов более физиологически важны, подражая в естественных условиях раковых клеток выскальзывание из оригинального сайта и вторжение через внеклеточного матрикса. Текущий протокол обеспечивает один рабочий процесс для миграции и вторжения анализов. Вместе с комплексной автоматизированной микроскопических камеры для реального времени изображения HD и модуль встроенного анализа это дает исследователи время эффективный, простой и воспроизводимые экспериментальный вариант. Этот протокол также включает замены расходных материалов и методов альтернативного анализа для пользователей, чтобы выбрать из.
Введение
Миграции клеток и вторжения являются важные биологические процессы, которые позволяют нормальных функций в теле человека, таких, как закрытие раны, вторжение плаценты в матки и молочной железы морфогенеза1,2,3. Человеческое тело имеет точного и строгого контроля этих биологических событий; Однако есть некоторые исключения. Злокачественные опухоли, например, возможность избежать этой гарантии, демонстрируют ненормальное распространения и вторгнуться в соседние ткани, которая называется метастазированием. Метастазирование является главной причиной смертности, связанной с раком<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Две линии клетки должны обрабатываться отдельно. Следующие процедуры должны применительно к одной строке одну ячейку, если не указано.
1. оптимизировать плотность клеток до ранения
- Культура адэрентных клеток в колбах культуры ткани2 см T75, около 80% слияния в фенол красный бесплатно Дульбекко изменение Eagle среднего (DMEM) с 10% плода бычьим сывороточным (ФБС), 200 мм L-глютамина и 2 мкг/мл инсулина при 37 ° C с 5% CO2 ( стандартные инкубационных условий для большинства рак клеточных линий, культура формулировки являются клетки линии зависимых).
- Удалите медиа культуры,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот assay переноса/вторжения основан на исцеление assay рану, которая оценивает уровень клеток в клетки свободно OBLASTь, созданный инструментом скретч 96-контактный. Разница между миграцией и вторжения анализов, что миграция assays клетки мера, движущихся на ткани Культура лечение пластиковые поверхности и вторжения меры клетки перемещение через гель ECM.
Царапинам инструмент предназначен для сделать последовательное царапин р.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Миграция и вторжения являются важными параметрами для оценки подвижности раковых клеток. Используя инструмент скретч 96-pin, это возможно для проведения анализов в 2D и 3D ранозаживляющее одновременно. Помимо содействия автоматическое сканирование, обеспечение стабильной клетки культуры среды с минимальными нарушениями, скретч assay проводились с использованием скретч инструмент 96-pin обеспечивает последовательное скретч раны, позволяя эксперименты, которые являются более надежными и воспроизводимость. Формат пластин 96.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.
Благодарности
Мы хотели бы отметить нашу финансовую поддержку Фонда группы Блумфилд через охотник медицинский научно-исследовательский институт (КЖДИ 13-02). X.Z поддерживается АПА стипендии через университета Ньюкасла и HCRA биомаркеров флагман PhD стипендии.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,5% раствор трипсина-ЭДТА (10x) | ThermoFisher Scientific | 30028-02 | Разбавить до 2x в DPBS |
| Countess II FL Автоматический счетчик клеток | ThermoFisher Scientific | AMQAX1000 | Автоматизированный счетчик клеток |
| Моющее средство 1 (Alconox) | Sigma-Aldrich | 242985 | 0,5% рабочей концентрации |
| Моющее средство 2 (Virkon S) | VetProduct DIRECT | 1% рабочее Концентрация | |
| Дульбекко s Модифицированная среда Eagle, без фенольно-красного | ThermoFisher Scientific | 21063-045 | Содержит 10% FBS, 200 мМ L-глутамина, 2 μ г/мл инсулина |
| ECM Gel (matrigel) | Sigma-Aldrich | E6909 | Фактор роста сниженный, фенол красный не содержит Essen |
| ImageLock 96-луночная пластина, плоское дно | Essen | 4379 | |
| EVE Счетные слайды | BioTools | EVS-50 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Bovogen Biologicals | SFBS-F-500ml | |
| IncuCyte 96-луночная царапина для инвазии раневых клеток аксессуары | Essen | 4444 | Включая CoolBox, 2x CoolSink |
| IncuCyte Набор для миграции | Essen | 4493 | Включая 96-луночный блок контактов, 2x моечные лодки и программное обеспечение |
| IncuCyte ZOOM | Essen | Система анализа живых клеток | |
| Раствор инсулина человека | Sigma-Aldrich | 19278-5ML | |
| L-глутамина раствор (100x) | ThermoFisher Scientific | 25030-091 | |
| Колба для культуры тканей, 75 см<суп>2 зоны роста | Greiner Bio-One | 658175 |
Ссылки
- Graham, C. H., Lala, P. K. Mechanisms of placental invasion of the uterus and their control. Biochemistry and Cell Biology. 70, 867-874 (1992).
- Affolter, M., Zeller, R., Caussinus, E. Tissue remodelling through branching morphogenesis. Nature Reviews Mo....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
