Method Article

Альвеолярных макрофагов фагоцитоза и распродажа бактерий в мышей

DOI:

10.3791/59088

⸱

March 2nd, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Physiological Sciences, Eastern Virginia Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы приводим общие методы для анализа фагоцитарную функцию мышиных альвеолярных макрофагов и бактериальных Распродажа из легких. Эти методы исследования в пробирке фагоцитоз флуоресцеин Изотиоцианаты бусы и в естественных условиях фагоцитоз Pseudomonas aeruginosa зеленого флуоресцентного белка. Мы также описывают метод для очистки P. aeruginosa мышей.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Альвеолярных макрофагов (AMs) гвардии пространство альвеолярных легких. Фагоцитоз, AMs играет решающую роль в обороне против вторгаясь патогенов, удаление омертвевших клеток или посторонних частиц и в резолюции воспалительных реакций и тканей ремоделирования, процессов, посредничестве различные поверхности рецепторы AMs. Здесь мы приводим методы для анализа фагоцитарной функции с помощью экспериментальных стратегий и в vitro и in vivo анализов различать шаблон признание рецептор-, рецептор комплемента- и гамма Fc рецептор опосредованный AMs фагоцитоз. Наконец мы рассмотрим метод, чтобы установить и характеризуют P. aeruginosa пневмонии модели мышей для оценки бактериальных Распродажа в естественных условиях. Эти анализы являются наиболее распространенными методами для оценки функции AM и может также использоваться для изучения функции макрофагов и бактериальных Распродажа в других органах.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

АПП являются крупные резидентов фагоцитов в альвеолах в стадии покоя и один из основных игроков врожденные иммунные реакции через признание и интернализации ингаляционных патогенов и инородных частиц1,2. Сообщалось, что AMs имеют важное значение для быстрого разминирования многих легочных патогены, например P. aeruginosa и клебсиеллы пневмонии3,4, так что дефицит в AM фагоцитоза часто приводит к респираторных инфекции, такие как острая пневмония, которые вызывают более высокие показатели смертности и заболеваемости.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол следует принципам институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) из Восточной Вирджинии медицинской школы.

1. флуоресцентные бусинки фагоцитоз

  1. Усыпить мыши (C57BL/6J, 6 недель, женщины) CO2 удушение согласно IACUC протоколы для этического эвтаназии животных.
  2. Положите мыши животе на доске рассечение, покрытые бумажные полотенца. Придавить его лапы с spread-eagle конечностей и подключить строку под его передних зубов тянуть его голову назад, так что трахеи располагается прямо и уровня.
  3. Влажные мыши горло, грудь и живот с 70% этанол лечить и предотвращать мех от прилипания....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы впервые провели эксперимент, чтобы анализировать фагоцитоза, мышь первичной AMs. На протяжении всех анализов мы сравнили AMs, изолированные от WT и TRIM72KO мышей. Как показано на рис. 1А, микроскопии флуоресцирования показал что фагоцитоза FITC-стеклянные бусины мышь первичной AMs происходит после 1 ч инкубации. Рисунок 1 B подачей cytometry показывает анализ фагоцитоза. Количестве.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

При выполнении функции обмена газа, легких упорно противостоит посторонних частиц, патогенов и аллергенов. АПП обеспечивают первую линию обороны в силу их основная функция, а именно фагоцитоза. АПП также координировать с другими иммунные клетки в уничтожении патогенных микроорганизмов, а также в резолюции воспаления. Здесь мы описали методы специально оценки фагоцитоза, AMs, изолированных от легких мыши. Протокол, представленный в этой рукописи объясняет детальное изучение фагоцитоза in vivo и в пробирке, которые также м.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа поддерживается Грант R01HL116826 X. Zhao.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
18-G ИглаNipro Medical CI+1832-2CМолекулярная биология класс
2,7-диаминофлуорен (DAF)Sigma-AldrichD17106Молекулярная биология класс
70% этанолDecon Labs Inc.18C27BАналитический класс
96-луночный планшетCorning3603Клеточная биология класс
ACK лизисный буферLife TechnologiesA10492Молекулярная биология класс
Alexa fluor-488 Зимозан-A-биочастицаThermofisher ScientificZ23373Молекулярная биология класс
C5 дефицит сыворотки Sigma-AldrichC1163Биохимический реактив
ЦентрифугаLabnet InternationalC0160-R
Cytospin 4 ЦитоцентрифугаThermofisher ScientificA78300101 Выпуск 11
DMEM Среда для клеточных культурGibco11995-065Клеточная биология класса
FBSAtlanta BiologicalsS11550Клеточная биология класс
Flow ЦитометрBD BiosciencesFACSCalibur
Flow Jo SoftwareFlowJo, LLC
ЩипцыDumont0508-SS/45-PS-1Подходит для вскрытия лабораторных животных
FITC-карбоксилированные латексные шарикиSigma-AldrichL4530Клеточная биология класс
GFP-P. aeruginosaATCC101045GFPПодходит для  анализы на клеточную инфекцию
Чашка со стеклянным дномMatTek Corp.P35G-0.170-14-CШприц высокого давления класса клеточной биологии
Penn-CenturyFMJ-250Подходит для использования на лабораторных животных
ГомогенизаторOmni InternationalTH-01
Перекись водородаSigma-AldrichH1009Аналитический класс
Инвертированный флуоресцентный микроскопOlympusIX73
Кетамин ГидрохлоридHospiraCA-2904Фармацевтический класс
Shandon Kwik-Diff StainsThermofisher Scientific9990700Клеточная биология класс
LB АгарFisher ScientificBP1425Молекулярная биология класс
LB Бульон FisherScientificBP1427Молекулярная биология класс
MicroSpray АэрозолизаторPenn-CenturyIA-1CПодходит для использования на лабораторных животных
ПараформальдегидSigma-AldrichP6148Реагент класса
PBSGibco20012-027Клеточная биология класса
кролика анти-SRBC-IgG MP Biomedicals55806Подходит для иммунологических анализов
кроликов анти-SRBC-IgM Cedarline LaboratoriesCL9000-MПодходит для иммунологических анализов
НожницыMiltex5-2Подходит для вскрытия лабораторных животных
Ларингоскоп мелких животныхPenn-CenturyLS-2Подходит для использования лабораторными животными
Додецилсульфат натрия (SDS)BioRad1610301Аналитический класс
Пружинные ножницы (Med)Инструменты для тонкой науки15012-12Подходит для вскрытия лабораторных животных
Пружинные ножницы (маленькие)Fine Science Tools91500-09Подходит для вскрытия
лабораторных животных овечьих эритроцитов (SRBC)  MP Biomedicals55876Мытый, консервированный SRBC
МочевинаSigma-AldrichU5378Молекулярная биология класса
Ксилазин Akorn Animal Health59399-110-20Фармацевтический класс

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hussell, T., Bell, T. J. Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context. Nature Reviews Immunology. 14, 81-93 (2014).
  2. Belchamber, K. B. R., Donnelly, L. E. Macrophage Dysfunction in Respiratory Disease. Results and Problems in Cell Different....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Alveolar MacrophagePhagocytosis AssayBacterial ClearanceMouse ModelP aeruginosaIntratracheal DeliveryBronchoalveolar LavageFlow CytometryFluorescence MicroscopyComplement Receptor

Related Articles