Analisi quantitativa della composizione cellulare nelle lesioni aterosclerotiche avanzate del muscolo liscio delle cellule Lineage-Tracing topi

Sidney Mahan; Mingjun Liu; Richard  A. Baylis; Delphine Gomez

doi:10.3791/59139

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Articolo metodologico

Analisi quantitativa della composizione cellulare nelle lesioni aterosclerotiche avanzate del muscolo liscio delle cellule Lineage-Tracing topi

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DOI:

10.3791/59139

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20 febbraio 2019

Sidney Mahan¹ , Mingjun Liu¹ , Richard A. Baylis²^,³ , Delphine Gomez¹^,⁴

¹Heart, Lung, Blood and Vascular Medicine Institute, University of Pittsburgh, ²Robert M. Berne Cardiovascular Research Center, University of Virginia, ³Department of Biochemistry and Molecular Genetics, University of Virginia, ⁴Division of Cardiology, University of Pittsburgh School of Medicine

In questo articolo

Sommario

Vi proponiamo un protocollo standardizzato per caratterizzare la composizione cellulare delle lesioni aterosclerotiche murine di stadio avanzato compreso di metodi sistematici di dissezione animale, inclusione di tessuti, taglio, colorazione e analisi delle arterie brachiocefaliche dai topi di atheroprone del muscolo liscio delle cellule lignaggio traccia.

Abstract

L'aterosclerosi rimane la principale causa di morte nel mondo e, nonostante innumerevoli studi preclinici che descrive promettenti bersagli terapeutici, nuovi interventi sono rimasti sfuggenti. Questo è probabilmente dovuta, in parte, a una dipendenza da modelli preclinici di prevenzione che studiano gli effetti delle manipolazioni genetiche o trattamenti farmacologici sullo sviluppo di aterosclerosi, piuttosto che di malattia stabilita. Anche, i risultati di questi studi sono spesso confusione perché l'uso delle analisi di lesione superficiale e una mancanza di caratterizzazione delle popolazioni di cellule di lesione. Per aiutare a superare questi ostacoli traslazionali, proponiamo un maggiore affidamento su modelli di intervento che impiegano indagine dei cambiamenti nella composizione cellulare a livello di singola cellula di macchiatura di immunofluorescenza e microscopia confocale. A tal fine, descriviamo un protocollo per la prova di un presunto agente terapeutico in un modello murino di intervento compreso un approccio sistematico per la dissezione animale, l'incorporamento, sezionamento, colorazione e quantificazione delle lesioni dell'arteria brachiocefalica. Inoltre, a causa della diversità fenotipica delle cellule all'interno delle lesioni aterosclerotiche ritardo-fase, descriviamo l'importanza di utilizzare sistemi di cellula-specifico, inducibile lignaggio traccia mouse e come questo può essere sfruttato per caratterizzazione imparziale delle popolazioni di cellule della lesione aterosclerotica. Insieme, queste strategie possono assistere i biologi vascolari più accuratamente gli interventi terapeutici di modellare ed analizzare la malattia aterosclerotica e speriamo che si tradurranno in un più alto tasso di successo negli studi clinici.

Introduzione

L'aterosclerosi è la principale causa di morbilità e mortalità in tutto il mondo sottostante la maggior parte di malattia dell'arteria coronaria, malattie delle arterie periferiche e di colpo. Ritardo-fase aterosclerosi coronaria può portare a complicazioni gravi tra cui contabilità l'infrazione del miocardio quasi il 16% del mondo popolazione mortalità¹^,². A causa di un impatto devastante sulla salute pubblica, notevoli sforzi compiuti per decifrare i meccanismi che guidano la progressione di aterosclerosi, così come per sviluppare nuove strategie terapeutiche. Ancora, il tasso di probabilità di approvazione ....