تسجيل اليكتروريتينوجرام في "الزرد اليرقات" استخدام القطب نصيحة الأسفنج على شكل مخروط رواية A

ملخص

نقدم هنا، بروتوكول أن يبسط قياس الاستجابات اليكتروريتينوجرام مقولة الخفيفة من الزرد اليرقات. يمكن أن تساعد مسرى رواية على شكل مخروط الأسفنج-تلميح جعل دراسة التنمية البصرية في الزرد اليرقات باستخدام اليكتروريتينوجرام أرج أسهل تحقيقا مع نتائج موثوق بها، وانخفاض التكلفة.

الملخص

الزرد (دانيو rerio) يستخدم عادة كنموذج فقاريات في الدراسات الإنمائية، وهو مناسبة خاصة لعلم الأعصاب البصرية. للقياسات الوظيفية للأداء البصري، اليكتروريتينوجرافي (ERG) هو أسلوب غير الغازية مثالية، التي ظلت راسخة في الأنواع الفقارية أعلى. يتزايد استخدام هذا النهج لدراسة الدالة البصرية في الزرد، بما في ذلك أثناء مرحلة اليرقات المبكر. بيد أن مسرى التسجيل الأكثر استخداماً لليرقات الزرد أرج حتى الآن هو مسرى ميكروبيبيتي الزجاج، الأمر الذي يتطلب معدات متخصصة لصناعتها، يقدم تحديا للمختبرات ذات الموارد المحدودة. نقدم هنا، بروتوكول أرج الزرد يرقات باستخدام قطب نصيحة الأسفنج على شكل مخروط. مسرى الرواية أسهل لتصنيع والتعامل، أكثر اقتصادا، وأقل احتمالاً لتلف العين اليرقات من ميكروبيبيتي الزجاج. مثل أساليب أرج المنشورة سابقا، يمكن تقييم البروتوكول الحالي وظيفة الشبكية الخارجي عن طريق مستقبله واستجابات الخلية القطبين،-وب-موجه، على التوالي. البروتوكول يمكن أن تبين بوضوح صقل الدالة البصرية في جميع أنحاء التطور المبكر لليرقات الزرد، تدعم الأداة المساعدة وحساسية، وموثوقية مسرى الرواية. قطب كهربائي تبسيط مفيد بشكل خاص عند إنشاء نظام جديد لارج أو تعديل جهاز أرج الحيوانات الصغيرة الموجودة لقياس الزرد، ومساعدة الباحثين في علوم الأعصاب البصرية استخدامها في الزرد نموذج الكائن.

المقدمة

وقد أصبح الزرد (دانيو rerio) نموذج فقاريات وراثية مستخدمة على نطاق واسع، بما في ذلك الدراسات المتعلقة بعلوم الأعصاب البصرية. ازدياد شعبية من هذا النوع يمكن أن يعزى إلى المزايا بما في ذلك سهولة التلاعب بالجينات، عاليا يحافظ النظام المرئي الفقاريات (أنواع الخلايا العصبية ومورفولوجية تشريحية والمنظمة، وعلم الوراثة الكامنة)، وخصوبة عالية وانخفاض تكاليف تربية مقارنة بنماذج الثدييات¹. اليكتروريتينوجرام غير الغازية (ERG) منذ فترة طويلة تستخدم سريرياً لتقييم دالة visual البشرية، وفي إنشاء مختبر التحديد الكمي للرؤية في مجموعة من الأنواع الكبيرة والصغيرة بما فيها القوارض واليرقات الزرد^2،3

البروتوكول

جميع اليكتروريتينوجرام (ERG) إجراءات أجريت وفقا لأحكام القانون الوطني الأسترالي للصحة ومجلس البحوث الطبية في الممارسة لرعاية واستخدام الحيوانات ووافقت عليها لجنة الأخلاقيات المؤسسية الحيوان في جامعة ملبورن.

1. إعداد المخزن المؤقت

1. إعداد 10 × المخزن المؤقت ذهبية المسابقة (1.25 م كلوريد الصوديوم، 26 مم بوكل، كاكل 25 مم₂، 10 مم مجكل₂، الجلوكوز 100 مم، 100 مم هيبيس) باستخدام مياه التناضح العكسي (RO). ضبط المخزن المؤقت للأس الهيدروجيني 7.8 وتعقيم المخزن المؤقت باستخدام 0.22 ميكرومتر التصفية. المخزن المؤقت لتخزين 10 x في 4 درجات مئوية ك حل الأسهم³.
   ملاحظة: وينبغي استخدام 1....

النتائج

يوفر هذا القسم نتائج تمثيلية لارج القياسات تؤخذ يوميا من 4 إلى 7 إدارة الشرطة الاتحادية. من 4 إدارة الشرطة الاتحادية، تظهر الردود أرج قوية موجه وب المكونات، التي تنشأ من photoreceptors وخلايا ثنائية القطب، على التوالي. زيادة السعة ب-الموجه في سن كل اختبار، مع شدة الضوء (الشكل 2؛ 3 الشكل). جدير بالذكر أن حساسية الشبكية الزرد اليرقات إلى ومضات باهتة زادت مع تقدم العمر. -وب-موجه لم يمكن التعرف على كثافة أقل من تسجيل-1.61 cd.s/m² في 4 .......

المناقشة

قراءات فنية مثل أرج أصبحت متزايدة الأهمية في الجناح للأدوات المستخدمة في دراسة الزرد اليرقات^8،9،،من¹²¹⁴. نظراً لصغر حجم العين الزرد اليرقات، تكيفت ميكروبيبيتيس الزجاج كتسجيل كهربائي في نشر معظم البروتوكولات^3،4،5،،من^{89 ,}

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
0.22 وميكرو ؛ مرشح m	Millex GP	SLGP033RS	يقوم بتصفية 10 مرات من المخزن المؤقت لجرس السمكة الذهبية للتعقيم
1 مل حقنة	Terumo	DVR-5175	مع 30G & مرات & frac12 ؛ " إبرة لإضافة قطرات من المحلول الملحي إلى طرف الإسفنج الكهربائي لمنع الجفاف وزيادة الضوضاء في إشارات ERG.
30 جم & مرات ½ "إبرة	Terumo	NN * 3013R	لإضافة قطب كهربائي ذو طرف ملحي.
مكبر للصوت	الحيوي ADInstruments	ML135	لتضخيم إشارات ERG.
محلول التبييض	9333441000973 King White		للحصول على طريقة بديلة للكلورة القطب الكهربائي الشظية. العنصر النشط: 42 جم / لتر هيبوكلوريت الصوديوم.
حمام مائي تداول	Lauda-Ko?nigshoffen	MGW Lauda	تستخدم لصنع platfrom المسخن بالماء.
ذات الرصاص	الكهربائي Grass Telefactor	F-E2-30	لتوصيل أقطاب الأسلاك الفضية بمكبر الصوت.
فاراداي قفص	الحل الضوئي الدولي		للحفاظ على التكيف مع الظلام وإحاطة إعداد Ganzfeld لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء.
Ganzfeld Bowl	الحل الضوئي الدولي   ؛		محفز الضوء المصمم خصيصا: قطر 36 مم ، حجم فتحة 13 سم.
Luxeon LEDs	شركة فيليبس لايت		لتحفيز الضوء عشرين 5W و 1W LED.
جهاز المنالم	هارفارد	BS4 50-2625	يحمل قطب التسجيل أثناء التجارب.
برنامج جداول بيانات Microsoft Office Excel	الإصدار	2010	من Microsoft لتحليل البيانات.
جل مرطب للعين	GenTeal	Gel 9319099315560	يستخدم لتغطية يرقات الزرد أثناء التسجيلات لتجنب الجفاف. العنصر النشط: 0.3٪ هيبروميلوز و 0.22٪ كربومر 980.
ماصة باستور	كوبان	200C	تستخدم لنقل يرقات الزرد بحذر.
نظام الحصول على البيانات Powerlab	يتحكم	في مصابيح	لتوليد المحفزات.
الإسفنج PVA	MeiCheLe	R-1675	لوضع يرقات الزرد وصنع القطب المخروطي الشكل
محلول ملحي	Aaxis Pacific	13317002	للطلاء الكهربائي الكهربائي للأسلاك الفضية.
Scope	ADInstruments	الإصدار 3.7.6	في نفس الوقت بتشغيل التحفيز من خلال نظام Powerlab وجمع البيانات
الفضية (سلك دائري دقيق)	A & معدن E	0.3 مم	يستخدم لعمل أقطاب ERG للتسجيل والرجوع إليها.
مجهر ستيريو	Leica	M80	تستخدم لتشكيل وقياس قمة الإسفنج المخروطي الشكل (مع شريط مقياس على العدسة). وضعت في قفص فاراداي لوضع القطب.
Tricaine	سيجما ألدريتش	E10521-50G	لتخدير يرقات الزرد.
منصة ساخنة بالماء	مصنوعة		لصيانة درجة حرارة منصة الإسفنج وجسم اليرقات أثناء تسجيلات ERG

الكابلات البلاتينية الدقيق LED برنامج يقوم حسب الطلب