الولادة المعززة بالحمل الحراري (CED) هي طريقة تمكن من الولادة الفعالة للعلاجات في الدماغ عن طريق التسريب المباشر لأحجام الأنسجة الكبيرة. يتطلب الإجراء استخدام القسطرة وإجراء حقن مُحسَّن. يصف هذا البروتوكول منهجية CED لجسم مضاد في دماغ الماوس.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تسليم الأجسام المضادة إلى الدماغ مورين عن طريق الحمل الحراري تعزيز التسليم
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الولادة المعززة بالحمل الحراري (CED) هي تقنية جراحة عصبية تمكن من التسريب الفعال لأحجام الدماغ الكبيرة باستخدام نظام القسطرة. ويوفر هذا النهج طريقة آمنة للتسليم عن طريق اجتياز حاجز الدم في الدماغ ، مما يسمح بالعلاج بالعلاجات ذات نفاذية BBB الضعيفة أو تلك التي لا يُطلب التعرض المنهجي لها، على سبيل المثال، بسبب السمية. يتطلب CED تحسين تصميم القسطرة، وبروتوكول الحقن، وخصائص الإنفتوسات. مع هذا البروتوكول ونحن نصف كيفية تنفيذ CED من حل يحتوي على ما يصل إلى 20 ميكروغرام من الأجسام المضادة في putamen caudate من الفئران. وهو يصف إعداد القسطرة خطوة، واختبارها في المختبر وإجراء CED في الفئران باستخدام برنامج حقن منحدر. ويمكن تعديل البروتوكول بسهولة لأحجام التسريب الأخرى، ويمكن استخدامه لحقن مختلف التتبعأو المواد النشطة أو غير النشطة من الناحية الدوائية، بما في ذلك العلاج الكيميائي، السيتوكينات، والجسيمات الفيروسية، وliposomes.
المقدمة
يشكل حاجز الدم في الدماغ (BBB) حدودًا شبه قابلة للنفاذ تفصل الجهاز العصبي المركزي (CNS) عن الدورة الدموية. الوصول إلى الجهاز العصبي الوطني مع العلاجات هو ضروري ولكن في سياق أمراض مختلفة، مثل أورام الدماغ، مرض الزهايمر (AD) أو مرض باركنسون (PD) من بين أمور أخرى1. وهذا يصبح مهما في تطوير علاجات جديدة، وخاصة إذا كان الدواء اختبار معارض ضعف نفاذية BBB أو التعرض المنهجي يمكن أن يؤدي إلى سمية خطيرة1،2. تعرض بعض الأجسام المضادة المستخدمة سريرياً كلا من هذه الميزات. والحل لهذه المشكلة هو تقديم العلاجات مباشرة وراء BBB.
الولادة المعززة بالحمل الحراري (CED) هي تقنية جر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل المكتب البيطري الكانتوني السويسري تحت رقم الترخيص ZH246/15.
1. إعداد قسطرة الخطوة
- إعداد أنابيب السيليكا المنصهرة لخطوة القسطرة
- قطع الشعيرات الدموية السيليكا تنصهر مع القطر الداخلي من 0.1 ملم وسمك الجدار من 0.0325 ملم الأنابيب إلى طول 30 ملم.
- فحص الأنابيب للشقوق والحرارة تلميع نهايات باستخدام microforge لضمان فتحات الأنابيب يكون لها سطح أملس.
- تثبيت الأنبوب الداخلي في إبرة معدنية
- جبل إبرة 27 G على حقنة 10 درجة مئوية ووضع الحقنة في الروبوت مجسمة.
- باستخدام الروبوت، حرك الحقنة فوق سطح صلب والم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتيح هذا البروتوكول إعداد قسطرة الخطوة (الشكل 1) لاستخدامها في إجراء CED في بيئة مختبرية. من أجل السيطرة على القسطرة للتسرب، الجزر على طول الجهاز إبرة وانسداد، ونحن نوصي بإجراء حقن صبغة، على سبيل المثال، trypan الحل الأزرق، في كتلة أغاروز. يصور الشكل 3 سحابة من التربان الأزرق الذي يتشكل بعد حقن 1 ميكرولتر عند 0.5 ميكرولتر/دقيقة باستخدام قسطرة CED (الشكل3A). لم يكن هناك ارتداد على طول الجهاز الإبرة مرئية خلال بداية خطوة القسطرة. وعلا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الولادة المعززة الحمل الحراري، أو ضخ المخدرات بوساطة الضغط في الدماغ، واقترح لأول مرة في أوائل عام 19903. هذا النهج وعود التسريب من كميات كبيرة من الدماغ وراء حاجز الدم في الدماغ بطريقة تسيطر عليها2. ومع ذلك، حتى الآن، تم إجراء عدد قليل فقط من التجارب السريرية باستخدام هذا النهج، ويرجع ذلك جزئيا إلى CED في الإعداد السريري قد أظهرت أن تتطلب من الناحية الفنية24،25. ويبدو أن التطورات الأخيرة في تصميم القسطرة وبرامج الت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يذكر يوهانس فوم بيرغ كمخترع في طلب البراءة (PCT/EP2012/070088) من جامعة زيوريخ. [ميشل] [بففينجر], [ليندا] [سكهلّمر] و يوهانس [فوم] [برغ] ذكرت كمخترعات على براءة اختراع طلب ([إب19166231]) من الجامعة زوريخ. وليس لصاحبي البلاغ مصالح مالية إضافية.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل بمنح من جامعة زيوريخ (FK-15-057)، ومؤسسة نوفارتيس للبحوث الطبية والبيولوجية (16C231) وأبحاث السرطان السويسرية (KFS-3852-02-2016، KFS-4146-02-2017) إلى يوهانس فوم بيرغ وبريدج بروف للمفهوم (20B1-1) _177300) إلى ليندا شيلهامر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 و مو ؛ L حقنة | هاميلتون | 7635-01 | |
| 27 جرام إبرة نهاية حادة | هاميلتون | 7762-01 | |
| Agarose | Promega | V3121 | |
| Atipamezol | Janssen | ||
| شمع العظام | براون | 1029754 | |
| بوبرينورفين | إنديفيور شفايز AG | ||
| كاربروفين | فايزر AG | ||
| لقم ثقب للأسنان ، فولاذ ، مقاس ISO 009 | Hager & Meisinger | 1RF009 | |
| الإيثانول 100٪ | Reuss-Chemie AG | 179-VL03K- / 1 | |
| Fentanyl | Helvepfarm AG | ||
| FITC-Dextrain ، 2000 كيلو دالتون | سيجما ألدريتش | FD2000S | |
| فلومازنيل | لاباتيك فارما AG | ||
| الفورمالديهايد | سيجما ألدريتش | F8775-500ML | |
| لزوجة عالية غراء سيانواكريليت | ميغروس | ||
| محلول اليود | مونديفارما ميديتوميدين | ||
| أوريون فارما AG | |||
| ميكروفورج | ناريشيج | MF-900 | |
| ميدازولام | روش فارما AG | ||
| مرهم العيون | باوش + لومب | فيتامين أ بلاش | |
| PBS | ThermoFischer Scientific | 10010023 | |
| جسم مضاد للماعز متعدد النسيلة مضاد للفئران IgG (H + L) إلى جانب Alexa Fluor 647 | Jackson Immuno | ||
| Scalpels | Braun | BB518 | |
| السيليكا القطر الداخلي 0.1 مم ، سمك الجدار 0.0325 مم | Postnova | Z-FSS-100165 | |
| إطار تجسيمي للفئران | Stoelting | 51615 | |
| روبوت تجسيمي | Neurostar | Drill and Injection Robot | |
| Succrose | Sigma Aldrich | S0389-500G | |
| لاصق الأنسجة الموضعية | Zoetis | GLUture | |
| Trypan الأزرق | ThermoFischer Scientific | 15250061 | |
| Water | Bichsel | 1000004 |
المراجع
- Scherrmann, J. M. Drug delivery via the blood-brain barrier. Vascular Pharmacology. 38 (6), 349-354 (2002).
- Barua, N. U., Gill, S. S. Convection-enhanced drug delivery: prospects for glioblastoma treatment. CNS Oncology. 3 (5), 313-316 (2014).
- Bobo, R. H.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
