قصيرة الأجل الحرة العائمة شريحة الثقافات من الدماغ البشري الكبار

Artur Fernandes; Niele  Dias Mendes; Glaucia  Maria Almeida; Giovanna  Orlovski Nogueira; Carla de Moraes Machado; Jose de Anchieta de Castro Horta-Junior; João  Alberto Assirati Junior; Norberto Garcia-Cairasco; Luciano Neder; Adriano Sebollela

doi:10.3791/59845

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

قصيرة الأجل الحرة العائمة شريحة الثقافات من الدماغ البشري الكبار

9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59845

⸱

نوفمبر 5, 2019

Artur Fernandes¹^,² , Niele Dias Mendes¹^,³ , Glaucia Maria Almeida¹ , Giovanna Orlovski Nogueira¹ , Carla de Moraes Machado⁴ , Jose de Anchieta de Castro Horta-Junior⁴ , João Alberto Assirati Junior⁵ , Norberto Garcia-Cairasco² , Luciano Neder³ , Adriano Sebollela¹

¹Department of Biochemistry and Immunology, Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, ²Department of Physiology, Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, ³Department of Pathology and Forensic Medicine, Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, ⁴Department of Anatomy, Institute of Biosciences, São Paulo State University, ⁵Clinical Hospital at the Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo

في هذه المقالة

ملخص

يتم تقديم بروتوكول لاعداد الثقافات شريحة العائمة الحرة من الدماغ البشري الكبار. البروتوكول هو اختلاف أسلوب الثقافة شريحة تستخدم علي نطاق واسع باستخدام ادراج غشاء. انها بسيطه ، وفعاله من حيث التكلفة ، وأوصيت لتشغيل اختبارات قصيرة الأجل تهدف إلى كشف أليات الضمور العصبي وراء امراض الدماغ المرتبطة بالعمر.

الملخص

التنميط العضوي ، أو الثقافات الشريحة ، وقد استخدمت علي نطاق واسع لنماذج الجوانب من الجهاز العصبي المركزي يعمل في المختبر. علي الرغم من إمكانات شريحة الثقافات في علوم الأعصاب ، والدراسات التي تستخدم الانسجه العصبية الكبار لاعداد مثل هذه الثقافات لا تزال نادره ، وخاصه تلك التي من البشر. استخدام الانسجه البشرية الكبار لاعداد شريحة الثقافات جذابة بشكل خاص لتعزيز فهم الامراض العصبية البشرية ، كما انها تحمل خصائص فريدة من نوعها من الدماغ البشري الناضجة التي تفتقر إلى الشرائح المنتجة من القوارض (عاده حديثي الولادة) النسيج العصبي. يصف هذا البروتوكول كيفيه استخدام انسجه المخ التي تم جمعها من المتبرعين الاحياء الذين قدموا إلى جراحه المخ المعدية لاعداد الثقافات القصيرة الأجل والعائمة الحرة. وتقدم أيضا إجراءات لصيانة واجراء اختبارات البيولوجيا الحيوية والخلايا البيولوجية باستخدام هذه الثقافات. تظهر النتائج التمثيلية ان التصفيح القشري البشري النموذجي يتم الاحتفاظ به في شرائح بعد 4 أيام في المختبر (DIV4) ، مع وجود متوقع لأنواع الخلايا العصبية الرئيسية. وعلاوة علي ذلك ، الشرائح في DIV4 الخضوع للموت خليه قويه عند الطعن مع التحفيز السامة (H₂O₂) ، مما يدل علي امكانيه هذا النموذج لتكون بمثابه منصة في اختبارات موت الخلايا. هذا الأسلوب ، وهو بديل ابسط وفعاله من حيث التكلفة للبروتوكول المستخدمة علي نطاق واسع باستخدام ادراج غشاء ، ويوصي بشكل رئيسي لتشغيل المقايسات علي المدى القصير تهدف إلى كشف أليات الضمور العصبي وراء امراض الدماغ المرتبطة بالسن. وأخيرا ، علي الرغم من ان البروتوكول مكرس لاستخدام الانسجه القشرية التي تم جمعها من المرضي الذين قدموا إلى العلاج الجراحي لصرع الفص الصدغي المقاوم للادويه ، الا انه يقال ان الانسجه التي يتم جمعها من مناطق/ظروف الدماغ الأخرى يجب ان تكون أيضا تعتبر مصادر لإنتاج الثقافات شريحة العائمة الحرة مماثله.

المقدمة

استخدام عينات الإنسان في البحوث هو بشكل لا لبس فيه خيارا كبيرا لدراسة امراض المخ البشرية ، والتقنيات الحديثة فتحت طرقا جديده لتجريب قويه واخلاقيه باستخدام الانسجه المستمدة من المريض. وقد استخدمت أساليب مثل الثقافات العضوية/شريحة أعدت من الدماغ البشري الكبار بشكل متزايد في نماذج مثل optogenetics¹، الكهربية²^،³^،⁴^،⁵، اللدونة ⁶^،⁷^،⁸^،⁹، السمية العصبية/نيوروبروتكايشن¹⁰^،<....