في بعض الكائنات التي تتلاعب بالجينات ، قد يفشل استخدام بروتوكول واحد للحث علي المحدودة في خلايا Purkinje المخيخ ، وقد يكون هناك اختلاف بين المحدودة والتعلم الحركي. بروتوكولات متعددة ضرورية لتقييم التعريفي المحدودة في الكائنات التي تتلاعب بالجينات. يتم عرض البروتوكولات القياسية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم الحث علي الاكتئاب علي المدى الطويل في شرائح البالغين المخيخار
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
اللدونة متشابك يوفر اليه للتعلم والذاكرة. للتعلم المحرك المخيخ ، والاكتئاب علي المدى الطويل (المحدودة) من الإرسال متشابك من ألياف المتوازية (PF) إلى الخلايا Purkinje (PC) يعتبر أساسا للتعلم الحركي ، ولوحظت أوجه القصور في كل من المحدودة والتعلم الحركي في مختلف التلاعب بالجينات الحيوانية. واستخدمت مجموعات التعلم الحركي المشتركة ، مثل التكيف مع منعكس حركه اللااراديه (okr) ، منعكس الدهليزية العين (VOR) ، واختبار rotarod لتقييم قدره التعلم الحركي. ومع ذلك ، أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها من محطه GluA2-كربوكسي المعدلة في الفئران التكيف الطبيعي لل VOR و OKR ، علي الرغم من نقص PF-المحدودة. وفي ذلك التقرير ، تمت محاولة الحث علي المحدودة فقط باستخدام نوع واحد من بروتوكول التحفيز في درجه حرارة الغرفة. وهكذا ، تم استكشاف الظروف التي تحفز المخيخ المحدودة في نفس الطرق في المسوخ باستخدام بروتوكولات مختلفه في درجه حرارة الفسيولوجية القريبة. وأخيرا ، وجدنا بروتوكولات التحفيز ، التي يمكن ان يسببها المحدودة في هذه الفئران التلاعب الجينات. في هذه الدراسة ، يتم اقتراح مجموعه من البروتوكولات لتقييم التعريفي المحدودة ، والتي سوف تسمح بشكل أكثر دقه فحص العلاقة السببية بين المحدودة والتعلم الحركي. في الختام ، الظروف التجريبية حاسمه عند تقييم المحدودة في الفئران التلاعب الجينات.
المقدمة
وقد تم توضيح التنظيم متشابك من الشبكات العصبية المفصلة من القشرة المخيخ ، وتتالف من أجهزه الكمبيوتر ، والخلايا العصبية الطبقة الجزيئية (سله والخلايا النجميه) ، golgi الخلية ، PFs من الخلايا الحبيبية ، وألياف المطحلب وتسلق ألياف (CFs) ، من حيث الاثاره/تثبيط والتباعد/التقارب ، والمخطط الدوائر تنظيما جيدا وقد اقترح ان المخيخ هو "اله العصبية"1، علي الرغم من انه لم يكن هناك في السابق اي فكره عن الغرض من هذا "اله". واقترح في وقت لاحق Marr ان المدخلات PFs لأجهزه الكمبيوتر تشكل طبقه ثلاثية شبكه التعلم النقابي2. واقترح أيضا ان كل CF ينقل التعليمات الدماغية للحركة عنصري2. وقال انه يفترض ان التنشيط في وقت وا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت لجنه ريكين علي جميع الإجراءات التجريبية المتعلقة برعاية الماشية واستخدامها في التجارب. تم الاحتفاظ الفئران في مرفق الحيوانية من مركز ريكين لعلوم المخ تحت درجه حرارة تسيطر عليها جيدا (23-25 °C) والرطوبة (45 ٪-65 ٪) الظروف. واستخدمت كل من الذكور والإناث الفئران WT (C57BL/6 ، 3-6 أشهر).
1. اعداد الحلول المستخدمة في التجارب
ملاحظه: وينبغي اجراء جميع الحلول في المياه الفائقة خاليه من المعادن (المقاومة > 18.2 MΩ) وغيرها من الشوائب (الكربون العضوي الكلي (TOC) < 5.0 ppb). يتم العمل السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF) لقطع شريحة وتسجيل الطازجة في يوم التجربة من 10 مرات (x10) الأسهم من ACSF. فقاعه الحل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد استخدمت أربعه بروتوكولات في هذه الدراسة للحث علي المخيخ المحدودة. وفي البروتوكولين الأول والثاني (البروتوكولان 1 و 2) ، تم تطبيق الاقتران بين التحفيز وتحفيز التيار الكهربي في ظل ظروف المشبك الحالية. في البروتوكولين الآخرين (البروتوكول 3 و 4) ، تم استبدال الاستقطاب الجسدي لتحفيز CF تحت ظروف الجهد المشبك. تمت مقارنه اثار الجهد أو الآثار الحالية اثناء التحفيز الملتحمة (الشكل 2).
الاقتران من 1 PF-التحفيز و 1 CF-التحفيز تحت الحالية-المشبك الظروف (البروتوكول-1) كانت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الاختلافات بين البروتوكولات الاربعه
في البروتوكولات التي تحفز المحدودة 1 و 2 ، Cjs 300 مرات في 1 هرتز يكفي للحث علي المخيخ المحدودة. تردد التحفيز من CF يبدو ان تكون في نطاق الفسيولوجية ، لان ارتفاع معدل إطلاق النار في حاله تاهب الفئران الكبار (P60) وأفيد ان 1.25 هرتز36. ومع ذلك ، فان التحفيز CF وحدها لا تسبب اللدونة علي المدى الطويل في المشبك PF-CF ، كما هو مستخدم في البروتوكولين 1 و 2 (الشكل 4، الشكل 5) ، علي ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
ونشكر ا. اوبا علي مساعدتها التقنية. وقد دعم هذا البحث جزئيا بمنحه المعونة للبحوث العلمية (C) 17K01982 إلى ك امواكو
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مكبر للصوت الأجهزة الجزيئية - Axon | Multiclamp 700B | ||
| البورسليكات الزجاجية الشعرية | Sutter | BF150-110-10 | |
| أجهزة جزيئية محول | الأرقام - Axon | Digidata1322A | |
| مجتذب القطب الكهربائي | نموذج P-97 | ||
| Isoflurane | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 26675-46-7 | |
| المعزل | A.M.P.I. | ISOflex | |
| Dosaka EM | PRO7N | ||
| المجهر | NIKON | Eclipse E600FN | |
| مضخة التمعجية | جيلسون | MP1 مضخة | |
| Picrotoxin | Sigma-Aldrich | P1675 | |
| صانع المياه النقية | Merck-Millipore | MilliQ 7000 | |
| برنامج للتجربة | مسبار جزيئي - Axon | pClamp 10 | |
| برنامج للإحصاء | KyensLab | KyPlot 5.0 | |
| محفز | WPI | DS8000 | |
| تحكم في درجة الحرارة | Warner | TC-324B | |
| Tetrodotoxin | Tocris | 1078 |
المراجع
- Eccles, J. C., Ito, M., Szentagothai, J. The Cerebellum as a Neuronal Machine. , Springer. New York. (1967).
- Marr, D. A theory of cerebellar cortex. Journal of Physiology. 202 (2), 437-470 (1969).
- Albus, J. S.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
