В некоторых генов манипулировать животных, используя один протокол может не вызвать LTD в мозжечковых клетках Purkinje, и может быть несоответствие между LTD и двигательного обучения. Для оценки ltd-индукции у животных, манипулируемых генами, необходимы несколько протоколов. Отображаются стандартные протоколы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка долгосрочной депрессии индукции в взрослых церебеллярной ломтики
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Синаптической пластичности обеспечивает механизм для обучения и памяти. Для мозжечкового моторного обучения, долгосрочная депрессия (LTD) синаптической передачи от параллельных волокон (PF) к клеткам Purkinje (PC) считается основой для моторного обучения, и недостатки как LTD, так и моторного обучения наблюдаются в различных генно-манипулируемых животных. Для оценки способности моторного обучения использовались общие наборы моторного обучения, такие как адаптация оптикинетического рефлекса (OKR), вестибулярно-глазного рефлекса (VOR) и тест на ротарод. Тем не менее, результаты, полученные от GluA2-carboxy конечной модифицированных стук в мышей продемонстрировали нормальную адаптацию VOR и OKR, несмотря на отсутствие PF-LTD. В этом докладе индукция LTD была предпринята только с использованием одного типа протокола стимуляции при комнатной температуре. Таким образом, условия, чтобы вызвать мозжечковые LTD были изучены в том же стук-в мутантов с использованием различных протоколов при почти физиологической температуре. Наконец, мы нашли протоколы стимуляции, с помощью которых LTD может быть индуцирована в этих генно-манипулируемых мышей. В этом исследовании предлагается набор протоколов для оценки ltd-индукции, что позволит более точно изучить причинно-следственную связь между LTD и моторного обучения. В заключение, экспериментальные условия имеют решающее значение при оценке LTD в ген-манипулируемых мышей.
Введение
Синкаптическая организация разработанных нейрональных сетей мозжечковой коры, состоящей из ПК, молекулярных пластовых интернейронов (корзинных и стеллатных клеток), клеток Голги, PFs из гранулированных клеток, мшистых волокон и альпинистских волокон (CFs), были выяснены с точки зрения возбуждения / ингибирования и расхождения / конвергенции, и хорошо организованной схемы диаграммы предположил, что мозжечок является "нейрональной машины"1, хотя ранее не было ни малейшего представления о цели этой "машины". Позже Марр предложил, чтобы ввод PFs на ПК представлял собой трехслойную ассоциативную сеть обучения2. Он также предп....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все экспериментальные процедуры были одобрены комитетом RIKEN по уходу и использованию животных в экспериментах. Мыши содержались на животном объекте Центра наук и мозга RIKEN при хорошо контролируемой температуре (23-25 градусов по Цельсию) и влажности (45%-65%) Условия. Были использованы как мужские, так и женские мыши WT (C57BL/6, 3-6 месяцев).
1. Подготовка решений, используемых в экспериментах
ПРИМЕЧАНИЕ: Все растворы должны быть сделаны в ультрачистой воде, свободной от металлов (резивек (резистивность (18,2 МЗ) и других примесей (общий органический углерод (TOC) lt; 5.0 ppb). Работая искусст....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Четыре протокола были использованы в этом исследовании, чтобы вызвать мозжечковый LTD. В первых двух протоколах (протокол 1 и 2) соединение PF-стимуляции и CF-стимуляции применялось в условиях текущего зажима. В двух других протоколах (протокол 3 и 4) соматическая деполяризация была заменена на CF-стимуляцию в условиях напряжения-зажима. Сравнивались следы напряжения или ток-следы во время конъюнктивной стимуляции(рисунок 2).
Соединение 1 PF-стимуляции и 1 CF-стим.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Различия между четырьмя протоколами
В ltd-индуцирующих протоколов 1 и 2, Cjs 300 раз на 1 Гц достаточно, чтобы вызвать мозжечковый LTD. Частота стимуляции CF, казалось, в физиологическом диапазоне, потому что сложный всплеск скорости стрельбы в оповещения взрослых мышей (P60) было сообщено, 1,25 Гц36. Тем не менее, cf стимуляции только не вызывает долгосрочной пластичности в PF-CF синапсе, как это используется в протоколах 1 и 2(Рисунок 4,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим А. Оба за ее техническую помощь. Это исследование было частично поддержано Грант-в-помощь для научных исследований (C) 17K01982 в K.Y.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Усилитель | Молекулярные устройства-Axon | Multiclamp 700B | |
| Боросиликатное стекло капилляр | Sutter | BF150-110-10 | |
| Дигитайзер | Молекулярные приборы-Axon | Digidata1322A | |
| Съемник электродов | Sutter | Модель P-97 | |
| изофлуран | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 26675-46-7 | |
| Изолятор | A.M.P.I. | ISOflex | |
| Линейный слайсер | Dosaka EM | PRO7N | |
| Микроскоп | NIKON | Eclipse E600FN | |
| Перистальтический насос | Gilson | MP1 Одноканальный насос | |
| Picrotoxin | Sigma-Aldrich | P1675 | |
| Генератор чистой воды | Merck-Millipore | MilliQ 7000 | |
| Программное обеспечение для эксперимента | Молекулярный зонд-Axon | pClamp 10 | |
| Программное обеспечение для статистики | KyensLab | KyPlot 5.0 | |
| Стимулятор | WPI | DS8000 | |
| Регулятор температуры | Warner | TC-324B | |
| Тетродотоксин | Tocris | 1078 |
Ссылки
- Eccles, J. C., Ito, M., Szentagothai, J. The Cerebellum as a Neuronal Machine. , Springer. New York. (1967).
- Marr, D. A theory of cerebellar cortex. Journal of Physiology. 202 (2), 437-470 (1969).
- Albus, J. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
