부인과 및 유방암 종양에서 암 줄기 세포 구체 획득

Mafalda Laranjo; Maria João Carvalho; Beatriz Serambeque; André Alves; Carlos Miguel Marto; Isabel Silva; Artur Paiva; Maria Filomena Botelho

doi:10.3791/60022

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방법 논문

부인과 및 유방암 종양에서 암 줄기 세포 구체 획득

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DOI:

10.3791/60022

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2020년 3월 1일

Mafalda Laranjo^*¹^,²^,³^,⁴ , Maria João Carvalho^*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶ , Beatriz Serambeque¹^,²^,³ , André Alves²^,⁷ , Carlos Miguel Marto¹^,²^,³^,⁴^,⁸ , Isabel Silva⁹ , Artur Paiva³^,⁹^,¹⁰ , Maria Filomena Botelho¹^,²^,³^,⁴^,⁸

¹Institute of Biophysics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, ²Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR), area of Environment Genetics and Oncobiology (CIMAGO), Faculty of Medicine, University of Coimbra, ³CNC.IBILI/Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB), University of Coimbra, ⁴Clinical Academic Center of Coimbra (CACC), ⁵Universitary Clinic of Gynecology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, ⁶Gynecology A Service, Coimbra Hospital and Universitary Center, ⁷Institute of Pharmacology & Experimental Therapeutics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, ⁸Institute of Experimental Pathology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, ⁹Cytometry Operational Management Unit, Clinical Pathology Service, Coimbra Hospital and Universitary Center, ¹⁰Polytechnic Institute of Coimbra, ESTESC-Coimbra Health School, Laboratory Biomedical Sciences

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 방법론의 목적은 유세포분석및 서양세포분석과 서양계의 기능성 분석및 현상형 특성화를 사용하여, 구형 프로토콜을 사용하여 암 세포주 및 원발성 인간 종양 샘플에서 암 줄기세포(CSC)를 식별하는 것입니다. 얼룩.

초록

암 줄기 세포 (CSC)는 종양 발생, 치료 및 재발성 질병에 대한 저항성을 담당하는 자가 재생 및 가소성을 가진 작은 집단입니다. 이 모집단은 표면 마커, 효소 활성 및 기능 적 프로파일로 식별 할 수 있습니다. 이러한 접근법은 현상형 이질성과 CSC 가소성으로 인해 제한적입니다. 여기에서, 우리는 유방과 부인과 암에서 CSC 구체를 얻기 위하여 구체 형성 프로토콜을, 기능적인 성질, CSC 마커 및 단백질 발현을 평가하기 위하여 업데이트합니다. 구체는 현탁액 배양에서 낮은 밀도로 단일 세포 파종으로 수득되며, 반고체 메틸셀룰로오스 배지를 사용하여 이동 및 응집체를 피합니다. 이 수익성 있는 프로토콜은 암 세포주뿐만 아니라 1 차적인 종양에서 또한 이용될 수 있습니다. 종양 미세 환경, 특히 CSC 틈새 를 모방하는 것으로 생각되는 삼차원 비 부착 현탁액 배양은 CSC 신호링을 보장하기 위해 표피 성장 인자 및 기본 섬유아세포 성장 인자로 보충됩니다. CSC의 강력한 식별을 목표로 기능및 자형학적 평가를 결합한 보완적인 접근 방식을 제안합니다. 구 형성 용량, 자체 재생 및 구 투영 영역은 CSC 기능적 특성을 설정합니다. 부가적으로, 특성화는 ALDH를 고려한 CD44+/CD24-및 CD133 및 웨스턴 블롯으로 표현된 마커의 유세포분석 평가를 포함한다. 제시된 프로토콜은 또한 번역 연구에 유용한 샘플 소화 절차에 따라 1 차적인 종양 견본을 위해 최적화되었습니다.

서론

암 인구는 이질적인, 다른 형태를 제시 하는 세포, 증식 및 침략 능력, 차등 유전자 발현으로 인해. 이들 세포 들 중, 소수 집단은 암 줄기 세포 (CSC)^1이라는이름의 존재, 이는 자기 갱신을위한 능력을 가지고, 1 차 종양 틈새의 이질성을 재차화하고 동압 조절에 적절하게 반응하지 않는 비정상적인 분화 선전자를 생산^2. CSC 특성은 화학요법에 대한 종양발생성 또는 내성과 같은 사건과의 연관성을 감안할 때 임상 실습에서 직접 번역될 수^{있다 3.} CSC의 식별은 표면 마커의 막힘, CSC 분화의 촉진, CSC 신호 경로 구성 요소의 차단, 틈새 파괴 및 후성 유전학 적 메커니즘을 포함 할 수있는 표적 치료의 개발로 이어질 수 있습니다^4.

CSC의 분리는 세포 선및 1 차적인 종양의 견본에서^5,^6,^7,^8에서수행되었습니다. CSC에 대해 기재된 기능....