يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

النغمة القاعدية القاعدية القاعدية والاختبار السلبي للجهاز التناسلي للمورين باستخدام جهاز قياس ضغط

8.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/60125

⸱

أغسطس 13, 2019

 ,  ,  ,  ,  , 

في هذه المقالة

ملخص

استخدم هذا البروتوكول نظام موغرافي للضغط متاح تجارياً لإجراء اختبار الضغط على المهبل وعنق الرحم. باستخدام وسائل الإعلام مع وبدون الكالسيوم، تم عزل مساهمات خلايا العضلات الملساء (SMC) لهجة القاعدية والمصفوفة السلبية خارج الخلية (ECM) للأعضاء في ظل الظروف الفسيولوجية المقدرة.

الملخص

وتتألف الأعضاء التناسلية الأنثوية، وعلى وجه التحديد المهبل وعنق الرحم،من مكونات خلوية مختلفة ومصفوفة فريدة من نوعها خارج الخلية (ECM). تظهر خلايا العضلات الملساء وظيفة تقلصداخل جدران المهبل وعنق الرحم. اعتمادا على البيئة البيوكيميائية والتفكك الميكانيكي لجدران الجهاز، وخلايا العضلات الملساء تغيير الظروف العقدية. يتم تصنيف مساهمة خلايا العضلات الملساء في ظل الظروف الفسيولوجية الأساسية كنغمة أساسية. وبشكل أكثر تحديدا، لهجة القاعدية هو انقباض جزئي خط الأساس من خلايا العضلات الملساء في غياب التحفيز الهرموني والعصبي. وعلاوة على ذلك، يوفر إدارة المحتوى في المؤسسة الدعم الهيكلي لجدران الأعضاء ووظائفها كمستودع للإشارات البيوكيميائية. هذه العظة البيوكيميائية حيوية لمختلف وظائف الأعضاء، مثل التحريض على النمو والحفاظ على التوازن. يتكون ECM من كل عضو في المقام الأول من ألياف الكولاجين (في الغالب أنواع الكولاجين الأول والثالث والخامس)، والألياف المرنة، وغليكوسامينوغليكانس / بروتيوغليكانس. تكوين وتنظيم ECM تملي الخصائص الميكانيكية لكل جهاز. قد يؤدي تغيير في تكوين ECM إلى تطوير الأمراض التناسلية، مثل تدلي أعضاء الحوض أو إعادة عرض عنق الرحم قبل الأوان. وعلاوة على ذلك، فإن التغيرات في البنية الدقيقة ECM وتصلب قد يغير نشاط خلايا العضلات الملساء والنمط الظاهري، مما يؤدي إلى فقدان القوة العقدية.

في هذا العمل، يتم استخدام البروتوكولات المبلغ عنها لتقييم لهجة القاعدية والخصائص الميكانيكية السلبية للمهبل غير الحامل وعنق الرحم في 4-6 أشهر من العمر في estrus. وقد تم تركيب الأعضاء في جهاز قياس ضغط متاح تجارياً، وأجريت اختبارات قطر الضغط وطول القوة على حد سواء. وتشمل نماذج البيانات وتقنيات تحليل البيانات للتوصيف الميكانيكي للأعضاء التناسلية. وقد تكون هذه المعلومات مفيدة في بناء نماذج رياضية وتصميم التدخلات العلاجية بعقلانية للأمراض الصحية للمرأة.

المقدمة

يتكون الجدار المهبلي من أربع طبقات، ظهارة، بروبريا لامينا، العضلات، وadventitia. يتكون الظهارة في المقام الأول من الخلايا الظهارية. اللامينا بروبريا لديه كمية كبيرة من ألياف الكولاجين المرنة والفيبريلار. ويتكون العضلات أيضا من ألياف الإيلاستين والكولاجين ولكن لديه كمية متزايدة من خلايا العضلات الملساء. ويتكون adventitia من الإيلاستين، الكولاجين، والخلايا الليفية، وإن كان في تركيزات مخفضة بالمقارنة مع الطبقات السابقة. خلايا العضلات الملساء هي ذات أهمية لمجموعات البحوث المحفزة بيولوجيا لأنها تلعب دورا في الطبيعة العقدية للأعضاء. على هذا النحو، وكمي جزء منطقة الخلية العضلات الملساء والتنظيم هو المفتاح لفهم وظيفة الميكانيكية. تشير التحقيقات السابقة إلى أن محتوى العضلات ال....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

Nulliparous 4-6 أشهر الإناث C57BL6J الفئران (29.4 ± 6.8 غرام) في estrus استخدمت لهذه الدراسة. وقد وافقت لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لمعهد رعاية الحيوانات في جامعة تولين على جميع الإجراءات. بعد الولادة، تكييف الفئران لمدة أسبوع واحد قبل القتل الرحيم، وكانت موجودة في ظل ظروف قياسية (12 ساعة ضوء / دورات مظلمة).

1. الماوس التضحية في estrus

  1. تحديد دورة الإثارة: تم رصد دورة الإثارة من خلال التقييم البصري وفقا للدراسات السابقة15،33،34. تتكون الدورة الإستثارية من أربع مراحل: بروستروس، إستروس، ميستروس، وديستروس. خلال مرحلة proestrus الأ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

التحليل الناجح للخصائص الميكانيكية للأعضاء التناسلية الأنثوية يتوقف على تشريح الأعضاء المناسبة، وتراكم التعليب، والاختبار. لا بد من استئصال قرون الرحم إلى المهبل دونأي عيوب (الشكل 1). اعتمادا على نوع الجهاز، فإن حجم قنية تختلف (الشكل2). يجب أن يتم التعليب بحيث لا يمكن للجهاز التحرك أثناء التجربةولكن أيضا لا يضر جدار الجهاز أثناء الإجراء (الشكل 3). وسيؤدي فشل أي خطوتين إلى عدم قدرة السفينة على تحمل الضغط. إن توحيد إجراءات الاختبار أمر حيوي لنجاح البروتوكو.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يقدم البروتوكول المنصوص عليه في هذه المقالة طريقة لتحديد الخصائص الميكانيكية للمهبل وعنق الرحم. وتشمل الخصائص الميكانيكية التي تم تحليلها في هذا البروتوكول كل من ظروف النغمة السلبية والقاعدية للأعضاء. يتم المستحثة الظروف السلبية والقاعدية عن طريق تغيير البيئة البيوكيميائية التي يتم غمر الجهاز. لهذا البروتوكول، وسائل الإعلام المشاركة في اختبار القاعدية يحتوي على الكالسيوم. اختبار حالة لهجة القاعدية يسمح العزلة من الخلايا العضلية الملساء المساهمة الميكانيكية داخل الأعضاء التناسلية الأنثوية54،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل من #1751050 منحة المؤسسة الوطنية للتوظيف المهنية.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قسطرة 2Fقسطرة ميلارSPR-320لقياس ضغط عنق
الرحم 6-0أدوات العلوم الدقيقةللخياطة 18020-60روابط خياطة أكبر
CaCl2 (اللامائية)VWR97062-590تركيز HBSS: 140 مجم / مل
CaCl2-2H20فيشر كيميائيBDH9224-1KG
تركيز KRB: 3.68 جم / لتر
سكر العنب (D-glucose)VWR101172-434تركيز HBSS: 1000 مجم / مل
تركيز KRB: 19.8 جم / لتر
Dumont # 5/45 ملقطأدوات العلوم الدقيقة11251-35ملقط منحني
Dumont SS ملقطالعلوم الدقيقة11203-25ملقط مستقيم
EclipseNikonE200مجهر يستخدم للتصوير
مقياس التدفقMyoTechnologies الدنماركي161FMداخل جهاز الاختبار
محول القوة - 110Pالدنماركي MyoTechnologies100079محول القوة
ImageJSciJavaImageJ1المستخدم لقياس الحجم
حالات الأدواتأدوات العلوم الدقيقة20830-00غلاف لعقد أدوات التشريح
KClFisher Chemical97061-566تركيز HBSS: 400 مجم / مل
تركيز KRB: 3.5 جم / لتر
KH2PO4G-Biosciences71003-454تركيز HBSS: 60 مجم / مل
MgCl2VWR97064-150
تركيز KRB: 1.14 جم / لتر
MgCl2-6H2OVWRBDH9244-500Gتركيز HBSS: 100 مجم / مل
MgSO4-7H20VWR97062-134تركيز HBSS: 48 مجم / مل
برنامج Mircosoft excelMicrosoft6278402المستخدم في جدول البيانات
Na2HPO4 (ثنائي القاعدة اللامائية)VWR97061-588تركيز HBSS: 48 مجم / مل
تركيز KRB: 1.44 جم / لتر
كلوريد الصوديومVWR97061-274تركيز HBSS: 8000 مجم / مل
تركيز KRB: 70.1 جم / لتر
NaHCO3VWR97062-460تركيز HBSS: 350 مجم / مل
تركيز KRB: 21.0 جم / لتر
أنظمة عضل الضغطMyoTechnologies الدنماركية110P و 120CPنظام عضل الضغط:
prorgram ، جهاز القنية ،
ووحدة التحكم
محول الضغطالدنماركي MyoTechnologies100106محول الضغط
الطالب دومون # 5 ملقطأدوات العلوم الدقيقة91150-20ملقط مستقيم
طالب Vannas الربيع مقصأدوات العلومالدقيقة 91500-09مقص صغير
صبغ الأنسجةمنتجات برادلي1101-3حبر لقياس في الجسم الحي تمتد
محول الموجات فوق الصوتيةFujiFilm Visual SonicsLZ-550محول الموجات فوق الصوتية المستخدم ؛ 256 عنصرا ، تردد مركز 40 ميجا هرتز
VEVO2100FujiFilm Visual SonicsVS-20035الموجات فوق الصوتية المستخدمة للتصوير
مقص فاغنرأدوات العلوم الدقيقة14069-12مقص أكبر
أدوات مقياس التدفق

المراجع

  1. Capone, D., et al. Evaluating Residual Strain Throughout the Murine Female Reproductive System. Journal of Biomechanics. 82, 299-306 (2019).
  2. Danforth, D. The fibrous nature of th....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الاختبار الميكانيكي الخاملخلايا العضلات الملساءالمصفوفة خارج الخلويةعنق الرحم المهبلياختبار القوة والطولاختبار الضغط والقطرتثبيت العضو