Эта статья описывает как выполнить сексуальные испытания поведения в мышах мышей мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Эта статья описывает как выполнить сексуальные испытания поведения в мышах мышей мышей.
Сексуальное поведение в полнейось специфическим для видов. Хотя грызуны имеют несколько иное сексуальное поведение, мыши и крысы имеют сходную сексуальную поведенческую модель. Целью данной статьи является описание индуцированной гормонами эструса ovarieactomized женской модели и экспериментальной процедуры для оценки сексуального поведения мышей мужского пола. Наиболее важные элементы сексуального поведения показаны в видео и иллюстрациях. Также объясняются критические шаги, преимущества и ограничения теста на сексуальное поведение. Наконец, представлены параметры поведения, и различаются процессы монтажа, интромиссии и эякуляции при спаривании. Поведенческие параметры оцениваются с точки зрения происшения и количества в течение испытательного периода.
Сексуальное поведение у зрелых мышей мужского пола является результатом взаимодействия ряда связанных и взаимозависимых гормональных систем и нейронных систем в различных схемах мозга1. Она также требует опыта развития, обучения, контекста и соответствующего партнера. Поведенческий анализ является важным отражением на нервной или нейрокриной функции. Таким образом, сексуальное поведение исследование на животных моделей широко используется в поведенческой неврологии и других связанных исследований2. Этаграмма сексуального поведения у грызунов была объяснена во многих статьях и книгах1,3,4. Например, описание Scahs и Barfield сексуального поведения в крысе5 помогло понять подобную поведенческую картину в мышах5. Мышь является одним из наиболее часто используемых предметов для поведенческих исследований. Hull et al.6 дали детальное введение мыжской мыши сексуального поведения: Когда мыжская мышь встречает женщину, она начинает исследовать аногенитную область женщины. Затем самец прижимает передние лапы к женским флангам, чтобы смонтировать самку с тыла. Самка проявляет характерную сексуально восприимчивую осанку, сгибая позвоночник вниз в лук и перемещая хвост в одну сторону тела, подвергая открытие интроита для сексуального проникновения самца (т.е. лордоза). После монтажа самец делает быстрые, мелкие тазовые тяги, а затем медленные и глубокие вагинальные тяги. После многочисленных интрумиссий, длительная тяга приводит к эякуляции спермы, во время которой мышь мужского пола может замерзнуть около 25 с до демонтажа или падения с самки6. При эякуляции мужской мыши аксессуар желез ы может производить смесь, содержащую сперму, которая затвердевает, чтобы сформировать совокупляющуюшти. Наконец, после эякуляции, мужчина начинает генитальный уход и проявляет отсутствие интереса к женщине. Короче говоря, основная последовательность мужского сексуального поведения состоит из нюхать, после, монтаж, введение, эякуляция, и после эякуляции ухода. Мышь сексуального поведения экспонатов деформации различия. Например, семяизвержение колеблется от 594 до 6943 с, а число интромиссий колеблется от 5 до более чем 100. После эякуляции в диапазоне от 17 до 60 мин. Тем не менее, введение романа женщина может уменьшить этот промежуток времени. В некоторых случаях самец эякулирует на первом интромиссии с новой женщиной7.
Основными событиями для оценки сексуального поведения являются монтаж, введение и эякуляция. Поведенческие ученые рекомендовали измерять не только частоту каждого действия, но и его задержку и временной интервал5,8. Некоторые основные показатели измерения в прошлых исследованиях включают в себя: количество креплений, количество интромиссий, задержку крепления, задержку эякуляции, задержку после эякуляции (или постэякуляционные интервалы), задержку после эякуляции, количество серий копуляций и продолжительность копуляторных серий. Park et al.8 и Sachs et al.5 описали, как определить каждое действие монтажа, интромиссии и эякуляции грызунов. Монтаж определяется как самец монтажа самки с тыла, пальпирования ее фланги с его передних конечностей, и толкая его пенис быстро и неоднократно без полового члена вставки. Введение, также известный как полового члена вставки, определяется одним или более из следующих актов: длинная, глубокая тяга после быстрого мелкого толчки, быстрый удар с одной задней стороны, и отмеченный боковой вывод самца от женщины. Эякуляция определяется терминальной тягой таза, которая медленнее и глубже, чем у интромиссии и снижение высоты задней ноги. Совокупляемые серии определяется каждой последовательности от монтажа до эякуляции. Определения поведенческих параметров, используемые в настоящем исследовании, перечислены следующим образом: 1) Монтаж задержки: время от введения женщины до первого монтажа мужчины; 2) Задержка ввода: время от введения женщины до первой интромиссии; 3) задержка эякуляции: время от первого интромиссии до первой эякуляции (как правило, после последней тазовой тяги); 4) Постэякуляционная задержка крепления: время от эякуляции до следующего монтажа; 5) Постэякуляционная задержка вступительной миссии: время от эякуляции и следующего интромиссии; 6) Количество креплений: количество времени монтажа до первой эякуляции; 7) Количество интромиссий: количество интромиссий до первой эякуляции; 8) Количество копулирующих серий: количество серий копулаторов в период наблюдения; 9) Продолжительность копуляторных серий: время всех копуляторных серий в период наблюдения.
Сексуальное поведение и связанное с ним поведение может быть проведено либо в домашней клетке мужчины или в закрытой арене, среди которых аппарат под названием Rissman в "Нет секретов" зеркальное поле вводится для наблюдения брачного поведения3. Перед окном находится видеокамера, чтобы одновременно записывать действие мышей с бокового зрения и через наклонное зеркало с брюшного вида. Однако этот метод требует ярких огней, что неизбежно приводит к более длительному уживанию, чтобы устранить стресс окружающей среды у мышей. Что касается метода измерения, видео-поведенческий анализ рекомендуется для записи и количественной оценки поведения4. Видеомагнитофон, который имеет кадр за кадром видео заранее вариант с рекомендуемой скоростью затвора больше, чем 1/1000 s может быть использован для записи быстрых движений мыши. Инфракрасная камера высокого разрешения необходима при записи в темной среде. Для анализа фильма необходим компьютер с захватом кадров, позволяющий фиксировать отдельные кадры поведения для компьютерных манипуляций. Мыши чрезвычайно универсальны и могут отображать компенсационное поведение после почти любого лечения. Неоднозначность может существовать о каждой движущейся части тела4. Таким образом, анализ некоторых моделей поведения может потребовать еще большего разрешения и более высокой скорости камер.
Мужское сексуальное поведение у мышей зависит от многих факторов, в том числе деформации, гормональные изменения, и генные мутантионы1,3,9,10. McGill и Blight11 иллюстрировали различия напряжения в поведении спаривания мыши. Например, C57BL/6 мужчины обычно получают интромиссии быстро и эякулята примерно в 20 мин11. DBA/2 мужчины медленно, чтобы получить введение, но эякулята быстро. BALB/c мужчины медленно достичь эякуляции (средняя задержка 1 ч) из-за длительного периода ухаживания11. Тестостерон облегчает и поддерживает мужское сексуальное поведение2, и изменения в уровнях тестостерона может изменить сексуальное поведение производительности12. Как хирургическая кастрация и антиандрогенное лечение может снизить уровень тестостерона и привести к быстрому снижению сексуального поведения и даже сексуальной мотивации и сексуального возбуждения13. Управляемый тестостерон может восстановить прекопуляторное и совокупляющее поведение у кастрированных мышей. Наконец, нокаут и нокдаун мышей отображать различия в аспектах сексуального поведения по сравнению с дикими мышами типа. Например, мышей мужского пола с целевыми мутациями Adcy3, Cnga2 и Gnao демонстрируют пониженную способность обнаруживать феромоны, в то время как мыши trpc2 нокаутом показывают измененные предпочтения партнеров14,15,16. Другие эффекты трансгении и нокаутов на сексуальное поведение мышей объясняются Кроули3.
Здесь описывается одна из наиболее распространенных процедур для оценки сексуального поведения в спаривании мужской мыши с овариэктомизированной самкой, которая была гормонально загрунтована для восприимчивости. Представлен экспериментальный протокол для проведения экспериментов на мышах в сексуальном поведении. Кроме того, показан пример изменения моделей сексуального поведения в результате социальной изоляции у мышей CD-1.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все эксперименты проводились в соответствии с принципами "Принципов лабораторного ухода за животными" (публикация No 80-23, пересмотренный 1996 год) и под руководством Академии экспериментального центра для животных Института медицины Развитие завода (Китай).
1. Животноводство
2. Обариэктомия у самок мышей
3. Гормон-индуцированный эструс у женщин
4. Подготовка к тесту на сексуальное поведение
5. Привычка
6. Поведенческие анализы
7. Экспоненция данных
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Показано сравнение сексуального поведения между мышами CD-1, выращенными в изоляции, и групповыми мышами CD-1. Мыши-мужчины CD-1 были случайным образом отнесены в изоляционистую группу (IS, одна мышь на клетку, n - 30) и группу (GH, пять мышей на клетку, n no 15). Мыши прошли изоляцию воспитания от послеродового дня 23 до дня 93. Затем обе группы мышей были оценены на сексуальное поведение. Наше исследование показало, что показатель успеха совокупления, как правило, ниже в группе ИГ, чем в группе GH (IS: 80,0%, GH: 86,7%...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В представленном протоколе есть несколько важных шагов. Что касается овариэктомии самок, то отверстие разреза со спины менее вредно, чем от живота. Учитывая, что положение яичника глубокое, потянув других органов, когда разрез разрез разрезать из живота часто приводит к кровотечению и приводит к неясным хирургического зрения20. Мы выполнили разрез на спине, чтобы легко добраться до яичника и сократить хирургическое время, а также обеспечить безопасность операции.
Поддер...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторам нечего раскрывать.
Мы благодарим Лу Конга, Чжан Хунся, Чжан Бейюэ и Ху Ми за их предложения по экспериментам.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Гидрат хорала | Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. | ||
| Покрытие VICRYL Plus шовные материалы | Ethicon, Inc. | ||
| отсутствует эстрадиола бензоат | J& К Научный, ООО | ||
| Абсолютный этанол | Beijing Chemical Works Co., Ltd. | ||
| Ибупрофен (детская мотрин) | Shanghai Johnson & Джонсон Ко., Лтд. | ||
| Изофлуран | RWD Life Science Co., Ltd. | ||
| Лидокаин | HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. | ||
| Самцы и самки мышей CD-1 | Vital River Beijing | SCXK( )2013-0023 | |
| Оливковое масло | |||
| Пенициллин натрия | North China Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| Прогестерон | J& К Научный, ООО | ||
| Цифровая камера Sony | Sony Corporation | HDR-CX290E | |
| Тестовая коробка | DIY | ||
| ThinkStation Computer | Lenovo | S/N PCOGLQKG | |
| Испаритель для изофлурана | RWD Life Science Co., Ltd. | Э05904-009М |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.