هنا، نقدم بروتوكولا لفصل الخلايا الانفية القرنية (CEC) من غشاء Descemet (DM) باستخدام النيوديميوم: YAG (Nd:YAG) ليزر كنموذج مرض الجسم الحي السابق لاعتلال القرنية المغرور (BK).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تطوير نموذج تجريبي غير باضع بمساعدة الليزر لفقدان الخلايا الانهوفية القرنية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد استخدمت ليزر YAG لإجراء جراحة داخل العين غير الغازية، مثل قطع المناظير لعدة عقود حتى الآن. يعتمد التأثير القاطع على الأعطال البصرية في التركيز بالليزر. يتم إنشاء موجات الصدمة الصوتية وفقاعات التجويف ، مما تسبب في تمزق الأنسجة. أحجام فقاعة ووسعة الضغط تختلف مع طاقة النبض وموقف النقطة المحورية. في هذه الدراسة، تم وضع عيون porcine enucleated أمام ليزر Nd:YAG المتاحة تجاريا. تم اختبار طاقات النبض المتغيرة وكذلك المواقف المختلفة للبقع البؤرية الخلفية للقرنية. تم تقييم الآفات الناتجة عن ذلك بواسطة المجهر الفوتون ين وعلم الأنسجة لتحديد أفضل المعلمات لمفرزة حصرية من الخلايا الانفية القرنية (CEC) مع الحد الأدنى من الأضرار الجانبية. مزايا هذه الطريقة هي الاستئصال الدقيق لCEC ، وتقليل الأضرار الجانبية ، وقبل كل شيء ، العلاج غير المتصل.
المقدمة
شفافية القرنية أمر ضروري لنقل الضوء إلى شبكية العين ومستقبلاتها الضوئية1. في هذا الصدد ، فإن الحالة النسبية للجفاف أمر بالغ الأهمية للحفاظ على ألياف الكولاجين داخل ستروما القرنية محاذاة بشكل صحيح. يتم الحفاظ على هذا التوازن بواسطة خلايا بطانة القرنية (CEC) الموجودة على غشاء Descemet (DM)2. الإندوثيوليوم هو طبقة القرنية الأعمق. لديها حاجز مهم وظيفة مضخة، وهو أمر حاسم لشفافية القرنية3. على النقيض من ظهارة ، البطانة ليست قادرة على تجديد الذات4. لذلك ، فإن أي تلف في الخلايا يسببه المرض أو الصدمة يحفز الخلايا الانهوفية المتبقية على التكبير والهجرة ، لتغطية العيوب الناتجة والحفاظ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وتتبع جميع الإجراءات المتعلقة بالأنسجة الحيوانية المبادئ التوجيهية للجنة المحلية لرعاية الحيوان وأخلاقياته.
1. إعداد ثقافة الجهاز والعلاج بالليزر
- الحصول على عيون porcine المهول ة الطازجة من المسلخ المحلي. الاحتفاظ بها باردة (4 درجات مئوية) في جلوج جلكو المعدلة المتوسطة (DMEM) مع ارتفاع الجلوكوز, تستكمل مع L-الجلوتامين, بيروفات الصوديوم, البنسلين / streptomycin (1%), ومصل بورسين (10%), ومن الآن فصاعدا يشار إليها في هذه المقالة بأنها متوسطة كاملة.
- إزالة الأنسجة خارج الخلية مع مقص ونقع العينين في 5٪ محلول العيون اليود povidone اليود لمدة 5 دقائق قبل وضعها في محلول محلول ملافي معقم الفوسفات المخزنة (PBS) حتى الاستخدام. ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام الإجراء المعروض هنا، عالجنا العينين بليزر Nd:YAG، وتقييم طاقات النبض المختلفة (1.0-4.6 مليون جول) ومواقف النقاط المحورية (المسافة من السطح الخلفي للقرنية: 0.0-0.2 مم) للعثور على المعلمات المثلى. تم تقييم النسخ المتماثلة المتعددة (n = 3) لكل كوكبة من معلمات الليزر (12 × 21).
بالإضافة إلى البروتوكول المذكور أعلاه ، تم تحليل العينة بمجهر اثنين من الفوتون قبل التثبيت وتلطيخ H & E. استخدم المجهر ذو الفوتوفوتين ليزر ًا من نوع 80 ميغاهرتز Ti:MHz 80 مع حالة صلبة ومغلقًا مع نطاق ضبط 690-1b.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تشير نتائج هذه الدراسة التجريبية إلى أنه يمكن استخدام ليزر Nd:YAG لإزالة الخلايا الانهوائية القرنية بشكل انتقائي عند اختيار المعلمات المناسبة لجرعة الطاقة ووضع نقطة التركيز.
بما أن وظيفة الانهوبيليال مهمة لشفافية القرنية وحماية القرنية من الوذمة سترومال ، تلعب نماذج الخلل الانظوي دورًا مهمًا في تطوير الأدوية المضادة للوذمة أو العمليات الجراحية. هناك العديد من النماذج المنشأة في المختبر لمحاكاة في حالة في الجسم الحي10،14،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نشكر كريستين أورين ويان أ. م. سوشوريك على مساعدتهما في الأساليب التجريبية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بارون فراغ تريفين | كاتينا | K20-2058 | |
| Cryostat | Leica | CM 3050S | |
| Dulbecco s النسر المعدل s متوسط - ارتفاع الجلوكوز | PAA | E-15009 | |
| حامل العين | الذاتي | غير / A | |
| مجهر مقلوب | Leica | DMI 6000 B | |
| KH2< / sub>PO4< / sub> | Merck | 529568 | |
| Na2< / sub>HPO4< / sub> | Merck | 1065860500 | |
| Nd: ليزر YAG | Zeiss Meditec | visuLAS YAG II plus | |
| OCT Tissue Tek | Sakura Finetechnical | 4583 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | Gibco | 10010056 | |
| مصل الخنازير | Sigma-Aldrich | 12736C | |
| التصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي | هايدلبرغ الهندسية | Spectralis | |
| لوحة ثقافة الأنسجة 12 بئر | Sarstedt | 833921 | |
| مجهر ثنائي الفوتون | JenLab | DermaInspect | |
| Viscoelastic | OmniVision | Methocel |
المراجع
- DelMonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. Journal of Cataract and Refractive Surgery. 37 (3), 588-598 (2011).
- Edelhauser, H. F. The balance between corneal transparency and edema: the Proctor Lecture. Investigative ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
