Слияние клеток генома Отредактированные клеточные линии для возмущения клеточной структуры и функции

Robert Mahen; Reiner Schulte

doi:10.3791/60550

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Слияние клеток генома Отредактированные клеточные линии для возмущения клеточной структуры и функции

8.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/60550

⸱

7 декабря 2019 г.

Robert Mahen¹^,² , Reiner Schulte³

¹Photonics Group, Department of Physics, Imperial College London, ²The Medical Research Council Cancer Unit, Hutchison/MRC Research Centre, Cambridge Biomedical Campus, University of Cambridge, ³Cambridge Institute for Medical Research, Cambridge Biomedical Campus, University of Cambridge

В этой статье

Краткое содержание

Цель юаней протокола состоит в том, чтобы сплавить два различных типа клеток для создания гибридных ячеек. Флуоресценция микроскопии анализ сросшиеся клетки используется для отслеживания клетки происхождения клеточных органелл. Этот асссможно использовать для изучения того, как клеточная структура и функция реагируют на возмущение путем слияния клеток.

Аннотация

В липидных мембранах жизнь пространственно разделена, чтобы позволить изолированное образование различных молекулярных состояний внутри клеток и органелл. Слияние клеток представляет собой слияние двух или более клеток для формирования одной клетки. Здесь мы предоставляем протокол для слияния клеток двух различных типов клеток. Сросые гибридные клетки обогащаются сортировкой на основе цитометрии потока, за которой следует флуоресцентная микроскопия структуры и функции гибридных клеток. Флуоресцентно помеченные белки, генерируемые при редактировании генома, образуются внутри сброшенных клеток, что позволяет идентифицировать клеточные структуры на основе выбросов флуоресценции и ссылаться на тип клеточного происхождения. Этот надежный и общий метод может быть применен к различным типам клеток или органеллам, представляющим интерес, чтобы понять клеточную структуру и функции по целому ряду фундаментальных биологических вопросов.

Введение

Гомеостасическое поддержание клеточной структуры имеет решающее значение для жизни. Клетки имеют характерные морфологии, субклеточные числа органелл и внутренний биохимический состав. Понимание того, как эти фундаментальные свойства генерируются и как они идут наперекосяк во время болезни, требуют лабораторных инструментов, чтобы возмутить их.

Слияние клеток представляет собой слияние двух или более отдельных клеток. Слияние клеток, возможно, имеет решающее значение для появления эукариотической жизни¹. В организме человека, слияние клеток является относительно редким, происходящих во время ограниченных условий разви....