בסיכון בשבי פרפר תוכניות התפשטות כדי לשפר את ההיסטוריה החיים ידע ויעיל לשעבר שימור באתרו טכניקות

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים 1) את התפשטות המעבדה בשבי של פרפר כחול בסכנת הכחדה פדרלי (Cyclargus תומאסיבת) ו-2) הערכת מידע בסיסי בהיסטוריה של החיים כגון זמן פיתוח בלתי מפותח ומספר של זחל. שתי השיטות ניתן להתאים לשימוש עם תוכניות אחרות שימור באתרו לשעבר.

Abstract

שיפור הידע של שיטות העבודה הטובות ביותר באתרו לפרפרים at-סיכון חשוב להפקת תוצאות תוכנית שימור ושחזור מוצלחת. מחקר על אוכלוסיות כאלה יכול גם להניב נתונים יקרי ערך כדי לטפל בפערים מידע מפתח על ההתנהגות, ההיסטוריה של החיים, ואקולוגיה של היעד. אנו מתארים פרוטוקול עבור התפשטות בשבי של Cyclargus בסכנת הכחדה בלתי מפדרלי שניתן להשתמש בהם כמודל עבור בסיכון אחר פרפר לשעבר באתרו תוכניות, במיוחד אלה במשפחה Lycaenidae. אנו עוד מספקים פרוטוקול פשוט וישיר עבור הקלטת מדדים שונים היסטוריה חיים שיכול להיות שימושי ליידע מתודולוגיות באתרו לשעבר, כמו גם מותאם למחקרים מעבדתיים של לאפידוטרהאחרים.

Introduction

רשימה ההולכת וגוברת של מחקרים מצביעה על ירידות עולמיות נרחבות וחמורות באוכלוסיית הפרפרים^1,2,3,4,5. זה כולל את הרוב המכריע של מינים בסיכון. תוכניות שימור המיועדות להפחתת ירידות כאלה מעסיקים לעתים קרובות שילוב של אסטרטגיות כולל ניטור אוכלוסין, ניהול בתי גידול ושיקום, מחקר מדעי, התפשטות בשבי והאורגניזם טרנסלוקציה⁶. בתוך ארה ב ושטחים שלה לבד, סך של 30 מטקא הפרפר מפורטים תחת חוק מינים בסכנת הכחדה (ESA) כמו איימו או בסכנת הכחדה, עם 21 אלה לאחר מאושר טיוטה או תוכניות התאוששות סופית. עבור מטקא כזה, יותר ממחצית אסטרטגיות ההתאוששות שזוהו ממליצים התפשטות בשבי או מדינה בשבי התפשטות צריך להיות מוערך⁷. השימוש של לשעבר מאמצי שימור באתרו של פרפרים גדל באופן משמעותי בשנים האחרונות^8,9, ויש לו את הפוטנציאל להיות כלי קריטי כדי לסייע למאמצים התאוששות¹⁰. מוסדות רבים, ארגונים, וסוכנויות מעורבים כיום עם מאמצים לשעבר באתרו לפחות 11 המפורטים ברשימה של הפרפר הרשום (כלומר, Cyclargus תומאסי בייקרי, אופילדריאס editha, אאופידריאס, החברה החופשית הרקלידס, הארידיאן דאקוטה, ליקיידס מליסה סמוליס, אוארימה פויבייסק, פיגוס רודליאס , וספרניה זרפה היפוליטה) ועוד כמה מטקאה בסיכון (למשל, קללודרים irus, אאופילדריס פייאטון, ספוליה דאליה, ו אומאיוס אטאלה)¹¹. למרות מספר המאמצים החזקים והמצליחים, קיים מחסור בתקשורת סדירה על פני תוכניות ובין מתרגלי שימור הכרוכים בחילופי רעיונות, נתונים, מתודולוגיות אפקטיביות ותוצאות. שיתוף ידע מסוג זה חיוני משום שהוא מסייע בהפחתת השכפול של מאמץ, משפר את השיטות המומלצות הכלליות ומגביר את ההשפעה השימורה. מעטים שפורסמו ראש, גידול, גידול בשבי, או פרוטוקולי הגידול זמינים עבור מטקא בסיכון הפרפר, ואלה שלעיתים קרובות חסר פרטים נרטיב ו/או איורים. אלה מספקים לעתים קרובות בעיקר פרטים תקציר עם מוגבל צעד אחר צעד הוראות ותמונות ליווי, הפיכת שכפול מאתגרת או יישום אחרים קשה להעריך^12,13,14,15. רבים מהפרוטוקולים הזמינים מוגבלים בדרך כלשהי: הם קיימים רק בספרות האפורה, או ברמות שונות של פרטים, גיל הפרסום, או כחלק מרכיבים בהליכי סימפוזיון, הסוכנות/הפונדר דוחות, או בתוך הבית מדריכים^{16,17,18,19,20,21,22,23,24}.

למרבית תוכניות השימור, התפשטות בשבי מתנהלת בעיקר כדי לתמוך בטרנסלוקציה שימורית, הכולל מבוא מחדש, חיזוק (כלומר, הגדלה) ומבוא^25,26. פעילויות כאלה נועדו להיות מיושם באופן אסטרטגי כמרכיב של אסטרטגיית ההתאוששות הכוללת כדי לסייע במניעת הכחדה של מינים, תת-מין או אוכלוסיות מפורטות. יש לציין, עם זאת, כי זהו אחד מכמה תפקידים פוטנציאליים אחרים שתוכניות כאלה באתרו לשעבר עשוי לשרת. אלה עשויים לכלול גם שמירה על אוכלוסיית הביטוח (קרי, תדלוק), הצלת האורגניזם הזמני, תמיכה במחקר ו/או הכשרה הקשורים לשימור, וקידום מאמצי החינוך והמודעות הקשורים ל^-27,28. בין אם לתוכניות באתרו לשעבר יש מטרה מוגדרת אחת או שילוב של כמה, מתרגלי שימור צריכים למקסם הזדמנויות עבור איסוף נתונים כדי למלא פערים מידע מפתח כאשר הדבר אפשרי. זה חשוב במיוחד כי הרוב המכריע של מטקא בסיכון בדרך כלל כבר למד גרוע לפני ירידות אוכלוסייה פראית משמעותית. הידע המשופר שהתקבל על היבטים שונים התנהגותיים, אקולוגית, או היסטוריה החיים של טקסון יכול לשמש כדי לסייע לקדם מינים יעילים שימור וניהול²⁹.

כאן, אנו מתארים בפרוטרוט את פרוטוקול התפשטות בשבי שפותחה עבור בסכנת הכחדה פדרלי במיאמי פרפר כחול (Cyclargus תומאסיבת) (איור משלים 1) כחלק תוכנית שימור ושחזור גדול. במקרה זה, תוכנית ההפצה השבויה משרתת שלושה תפקידים מזוהים ספציפיים: 1) אוכלוסיית הביטוח צריכה להיות אבודה, 2) אוכלוסיית מחקר המיועדת למלא את מרווחי הידע האקולוגיים והחיים הקיימים, שעשויים לסייע ליידע את ההחלמה ו/או הניהול, ו-3) כדי לייצר אורגניזמים קיימא עבור שימור הטרנסלו הפרוטוקול שהתקבל נבדק והוכח היטב, לאחר שנוצל והשתפר כבר למעלה מעשור. כתוצאה מכך, אנו חשים שהטכניקות והמתודולוגיות המתוארות מייצגות מודל בר קיימא הניתן להחלה או מותאם באופן מתאים לתוכניות פרפר אחרות הנמצאות בסכנה לשעבר, במיוחד לאלה הכרוכות בליקוניים או בטקא הקשורים. למרות שאנו לא מציעים שהפרוטוקול המתואר נעלה על אחרים, אנו חשים כי קיימות הזדמנויות ליישום חלק מהשיטות באופן רחב יותר כדי לסייע בשיפור הפרודוקטיביות, הטיפול או היעילות. זה נכון במיוחד כפי שרוב ההתרבות שלנו נעשית בתנאי מעבדה מקורה עם מרחב מוגבל, בדומה לתוכניות שימור מעורבים Euphydryas editha טאילורי ו speryeria zerene היפוליטה^17,23. פרוטוקולים רבים אחרים לעתים קרובות לנצל חומר של פוטאד לתנוחת ההטלה או לגידול זחל, אשר יכול לפעמים להוביל למורכבות מוגברת הקשורה לבקרת טורף, בקרת איכות הסביבה (כלומר, לחות, טמפרטורה), ניטור בעלי חיים, איסוף נתונים, הדברה צמחים בעיות, ומרחב שם כמה^21,22. לבסוף, הפרוטוקול המוצג מתאר את השיטות להתרבות השבויה. תוכניות רבות אחרות לשימור פרפרים כרוכות בגידול בראש או בשבי עם הפרוטוקולים הנציגים המשקפים את ההבדלים הללו. לעתים קרובות מינורי, אנו חשים כי זה עוזר להרחיב את המאגר הקיים של מידע זמין עבור תוכניות אחרות לסקור. זה קריטי, כי רוב התוכניות לשעבר באתרו מייצגים מאמצים חלוצי כדי לסייע להקל על התאוששות נדירה ולעתים קרובות לחקור מיסים. פרוטוקולים זמינים יכולים לשמש נקודת התחלה מצוינת כדי לספק תובנה רבת ערך, להפחית את השכפול של מאמץ, ולקדם חדשנות. בשל "המגוון היחסי הייחודי של התנהגויות פרפר, תכונות היסטוריה של החיים, ודרישות אקולוגיות בשילוב עם הבדלים מסומנים לעתים קרובות במתקני התוכנית, תקציבים, מומחיות המטפל" והבדלים הטבועות אחרים, הסתמכות על מתודולוגיה אחת, אפילו עבור הקשורות הקשר הדוק, לעתים קרובות מגביל ו מוצדק³⁰. גמישות לחדד או לפתח פרוטוקולים חדשים המותאמים לצרכים של מטקא או תוכניות מסוימות חיונית להצלחה ולכן יש להדגיש. אנו מתארים בנוסף טכניקות מעבדה לאיסוף מדדים על פיתוח אורגניזם בתנאים שבויים, כולל מספר התפתחות הזחל, משך שלבים התפתחותיים בודדים, הפיתוח הכולל זמן, זחל ו גולמי אורך. טכניקות אלה יש ישימות רחבה ללימודי היסטוריה של החיים של לפידוס כי ניתן להשתמש כדי לחדד פרוטוקולים באתרו לשעבר או ליידע את נתוני השדה.

Protocol

1. אבטחת חיזור מבוגר מוצלח והזדווגות

1. לאחר eclosion מוצלחת, לשחרר פרפרים מבוגרים קיימא לתוך מאובטח, להיכנס, כלוב הטיסה הוקרן הממוקם בחממה מבוקרת טמפרטורה (המשלים איור 2).
   הערה: ניתן לסמן מבוגרים על המשטח הגחוני של הכנפיים עם סמני דיו קבועים אם זיהוי של אנשים ספציפיים רצוי להפרדת הקווים הגנטיים, מקור המניה, או לאיסוף נתונים ספציפיים הקשורים לאריכות ימים של אורגניזם, התנהגות, וכו '.
   1. בעוד שממדי הכלוב המדויקים יכולים להשתנות, יש לוודא שקיים מקום רב כדי להתאים את החומר לצמח הנקטר הדרוש כדי לתמוך בצפיפות של פרפרים למבוגרים שוכנו ולספק מקום לעמוד באופן חופשי ולסובב סביב.
   2. מעבר לרגולציה בטמפרטורה, ודא כי החממה מאובטחת כך שהיא יכולה לספק שכבת בלימה שנייה יחד עם הגנה מפני מזג אוויר (למשל, גשם כבד, רוח).
2. העלה את חומר הצמח נקטר בעציץ כך שאין יותר מ -30 ס מ של שטח מחלקו הפנימי של הכלוב לפרחים הפורחים הגבוהים ביותר (איור משלים 2). הדבר מספק גישה אופטימלית למשאבי הצוף הזמינים, ומצמצם בשפע את פעילות הטיסה.
3. מניחים מפעל אחד מארח של פוטאד בכלוב הטיסה. זה מבטיח כי גם אם זוג מזדווג החמיץ כל ביצים כתוצאה מניח ניתן לאסוף.
4. ספק זרימת אוויר עקבית. זה מגביר את פעילות החיזור ואת הצלחת ההזדווגות. בסביבה החממה, מפוחים וקבוע התנועה מאווררים המשמשים הטובים ביותר כדי לסייע לשפר את האוויר ואת תנועת האוורור. ניתן להשתמש גם באוורור נייד קטן יותר, כגון מאווררים בתיבה או בשולחן העבודה.
5. שמרו על טמפרטורת החממה הפנימית בין 27 ° צ' לבין 32 ° c כדי לקדם פעילות מבוגרים אופטימלית והצלחה בהזדווגות. הטמפרטורה בתוך הכלוב מפוקחת באמצעות מדחום ניטור זיכרון במעקב.
6. ערפל את כלוב הטיסה הוקרן באופן קבוע (בערך פעם בכל 2 h) עם מים באמצעות משאבת יד, מרסס מיכל פלסטיק, או צינור הגינה.
7. בעדינות לאסוף זוגות ההזדווגות בודדים מן כלוב הטיסה הוקרן באמצעות 50 דראם ברור פלסטיק הצמד בקבוקון הפקק (טבלת חומרים), הצבת אחד לשני זוגות לבקבוקון, והובלה לחדר גידול מקורה או מעבדה (איור משלים 3).

2. למקסם את הייצור ביצים

1. . הכנס את תא ההטלה
   1. קח את הספל של 12 גרם הנייר הלבן הרגיל ובאמצעות סכין השירות הצמד להב, לעשות שני חתכים אופקיים בכל צד של הספל מעבר אחד את השני. כל חתך צריך להיות בערך 1 ס מ מתחת לשפה.
   2. חותכים מודד כותנה אחת במחצית ולהכניס את קצה המוט של כל אחד לתוך שני חתכים אופקיים בכל צד של גביע הנייר כך החלק ספוגית כותנה מרחיב כ 2 ס מ לכיוון הפנים של הספל.
   3. באמצעות סכין שירות הצמד להב, לעשות שני חתכים "X" בתחתית של גביע הנייר. כל חתך אלכסוני צריך להיות בערך 1 ס מ ארוך.
   4. לקחת 9 אונקיה גביע פלסטיק ולמלא את התחתון עם כ 2 ס מ של מי ברז.
   5. מניחים חיתוך טרי, בערך 15 ס"מ, של הגידול המסוף זחל הצמח בספל הנייר על ידי החדרת הגבעול דרך אחד" X "חתכים בתחתית. לדחוף את הגבעול דרך החתך כך כ 4-5 ס מ בולט החוצה בתחתית.
   6. מניחים את גביע הנייר בחומר מארח לתוך גביע הפלסטיק, ומבטיחים שגבעול הצמח יהיה במים.
   7. מלא מזרק משנה 1 ml (0.45 מ"מ x 16 מ"מ) עם משקה ספורט בטעם ורוויה שתי מטליות כותנה בספל הנייר. . אלה מתנהגים כפרחים מלאכותיים
      הערה: מלון ופונץ ' פירות בטעמים משקה ספורט מספקים את החלופה הטובה ביותר לצוף.
   8. פעם אחת כל זוג ההזדווגות מפריד, מניחים 2-3 gravid הנקבות לתוך הגדרה גביע התאספו (כלומר, חדר ההטלה).
   9. מכסים את הספל בחתך מרובע של טול שחור, (כ 15 ס מ x 15 ס מ) ומאובטחים עם רצועת גומי סביב המכסה (איור משלים 4). שחור טול מספק את הניראות הטובה ביותר לתוך הספל וזיהוי קל של כל הביצים כי עשוי לפעמים להיות הניח על טול.
2. לעורר פעילות פרפר למבוגרים ומיקום ההטלה.
   1. מניחים כל חדר מיקום ההטלה על ספסל או שולחן מעבדה כ 19 ס מ מתחת 8.5 אינץ ' (21.59 ס מ) האור עם מחזירת אלומיניום הדיור a 40 W ליבון נורת (המשלים איור 5).
      הערה: אור הלהט מספק את החום הקורן הדרוש כדי לעורר פעילות מבוגרת ומיקום ההטלה.
   2. מניחים מדחום ניטור הזיכרון בסמוך לאורות ולהפעיל את חיישן הטמפרטורה, כך שהוא נח על גבי חדר ההטלה הממוקם ישירות מתחת לאור מהדק.
      הערה: טווח טמפרטורת היעד הוא בין 27.5 ° c -29 ° c.
   3. הוסף נוריות קלאמפ משלימות לפי הצורך, בהתאם למספר הכולל של תאי ההטלה שנפרסו.
   4. הכנס את נוריות התפס לתוך תכנות של 15 אמפר 24 שעות שעון עצר מכני מקורה עם שתי שקעים (ניתן לתיכנות ב -30 דקות במרווחי זמן מתוזמנים).
   5. קבע שעון עצר כדי להפעיל את הנורית הדולקת במשך 30 דקות במרווחי זמן (כלומר, מחזור הפעלה של 30 דקות, 30 דקות כבוי).
      הערה: מחזור אור זה מסייע למקסם את הפקת הביציות על ידי הענקת תקופות של תאורה מחזורית לעירור הפעילות של הפרפר המבוגר ומיקום ההטלה ואחריו בתקופות מנוחה כהות קצרות.
   6. לרענן את הכותנה בכל ספל עם משקה ספורט בטעם באמצעות מזרק sub-Q ו אובך באופן קבוע עם מים באמצעות בקבוק ספריי פלסטיק בערך כל 2-3 h או לפי הצורך.
      הערה: זה מספק נקטר מלאכותי נאותה ולחות כדי לאפשר לפרפרים לאכול חופשי כרצונך. היא מגבירה את אריכות החיים הבוגרת והן את פריון העבודה בתנאי מעבדה בהם חיים, חומר צמחי פורח לא יכול בקלות להיות מנוצל.
   7. הצג ספלים באופן קבוע ולהחליף את המפעל מארח עם גזרי טרי לפי הצורך.
   8. כאשר הביצים מתחילות לבקוע או צפיפות של ביצים הופך גבוה, להעביר את הנקבה (עם) לספל חדש עם מארח טרי ולהתחיל בפרוטוקול הזחלים עם neonates.

3. טיפול בזחל ואחזקה

1. חזור על שלבים 2.3-2.6 כדי להרכיב כוסות לזחלים.
2. כאשר הביצים מתחילות לבקוע, להעביר חומר מארח הצמח עם ביצים הזחלים neonate לתוך הספל החדש התאספו, הצבת גבעול דרך השני "X" בתחתית להבטיח כי גזע הצמח הוא במים ומשאיר מגע מארח טרי הסמוך חיתוך.
3. כאשר הזחלים צעירים (neonate-2 instar), לבדוק כוסות זחל מדי יום עבור רעננות של חומר הצמח המארח ונוכחות של עובש או frass מוגזם.
   הערה: ההסרה היומית של חומר מארח אינה מומלצת כאשר הזחלים צעירים משום שהדבר עלול לגרום לפגיעה באורגניזם עקב טיפול ו/או בזבוז מיותר של חומר מארח טרי.
4. אם החומר המארח הוא הופך להיות במצב גרוע אחרת, מניחים עוד חיתוך של חומר מארח טרי לתוך הספל, כך שהוא נוגע עלווה קיים ולאפשר הזחלים לעבור למארח החדש בעצמם.
5. ברגע שהזחלים מגיעים למקום^{השלישי,} החליפו את גביע הנייר והוסיפו חומר מארח טרי מדי יום.
6. השתמש בצבעי שיער הגמל הקטנים מברשת צבע כדי להעביר בעדינות את הזחלים מן החומר המארח הישן או משטח הספל לחומר מארח טרי בספל החדש.
7. מניחים את החומר המארח הישן לתוך מיכל אחסון ריק מלבני מזון פלסטיק.
8. חזור על שלבים 3.5-3.7 מדי יום ועד שכל הכוסות עם הזחלים עובדו.
9. בסיום, הוסיפו כמות קטנה של חומר מארח טרי על גבי פסולת הצמח במיכל אחסון המזון והניחו את המכסה למעלה.
   הערה: הדבר משמש כאמצעי הגנה במקרה שהזחלים מתעלמים במהלך העיבוד היומי, משום שהם מסוגלים לזחול על החומר המארח החדש על גבי פסולת הצמח וניתן להסירו למחרת.
10. שמירה על כוסות בטמפרטורת מעבדה בין 25 ° c -28 ° צ' לפעילות הזחל והפיתוח האופטימלי (איור משלים 6).
    הערה: כדי להגיע לטמפרטורות הגידול אופטימלית בתנאים מקורים, זה לעתים קרובות הכרחי כדי למקם כוסות תחת אורות מלחציים עם מחזירי אור אלומיניום 40 W נורות ליבון. לאחר מכן ניתן לעקוב באופן פעיל על-ידי שימוש במדחום ניטור זיכרון ובגובה האור המותאם כדי להגיע לתנאי גידול אופטימליים.

4. בניית תא התגלמות

1. חותכים את הנייר הפנים היחיד גלי לתוך שווה בגודל 3.8 ס"מ x 3.8 אינץ ' ס מ ריבועים.
2. מניחים ריבוע אחד לתוך 2 גרם מפלסטיק ברור בחלק הספל.
3. מניחים את הספל על מגש של כוסות פלסטיק ברורות (איור משלים 7).

5. הכנת הזחלים לתגלמות

1. לזהות זחלים בוגרים מוכנים לוקעים מהלך עיבוד המושבה היומית.
   הערה: הזחלים האלה הופכים למדים חומים משעממים, מאבדים את הסוגריים הזוויתיים שלהם ולעיתים קרובות נודדים מהפונדקאי.
2. להסיר בעדינות כל זחל בוגר עם צבעי מים שיער הגמל מברשת או מלקחיים ומקום אחד בכל תא תגלמות.
3. הצמד בחוזקה את מכסה הפלסטיק הברור בחדר התגלמות
4. חזור על הצעדים 5.1-5.3 עד שכל הזחלים מוכנים וקעים הועברו לתאי הוקעים וספת מגשי פלסטיק חדשים לפי הצורך (איור משלים 8).

6. שמירה על הגלמים

1. עבור כל מגש של תאים תגלמות, להקליט את התאריך של התגלמות ראשון וכל מידע רלוונטי אחר הדרוש (כלומר, קו גנטי, ניסוי ניסיוני, וכו ').
2. ארגן מגשים לפי תאריך ומקום במיקום מאובטח בתוך המעבדה (איור משלים 8).
3. הצג מגשים מדי יום לקבלת מבוגרים.
   הערה: תנאי המעבדה כגון טמפרטורה ישפיעו מאוד על זמן הפיתוח.
4. לפני eclosion מבוגרים (בדרך כלל בתוך 10 ימים של התגלמות ראשונה), להסיר את העפעפיים מתאי תגלמות בודדים ולמקם את המגש ב 34.29 ס"מ x 34.29 ס"מ x 60.96 ס"מ שינוי מוקפץ של כלוב הגידול (איור משלים 9).
   הערה: הגלמים המחוברים באופן מאובטח בתוך החריצים של משבצות הנייר הגלי מקלות על מבוגרים מצליחים (איור משלים 10).
5. חזור על הפרוטוקול כולו משלב 1.1 עבור הדור הבא שבשבי.

7. הערכת זמן פיתוח של שלבים בלתי מפותחים ומספר הסטדיה

1. מניחים זחל בודד תחת. מיקרוסקופ מבתר השתמש בצבעי שיער הגמל הקטן מברשת צבע כדי להעביר בזהירות הזחלים כדי למנוע פציעה של האורגניזם.
2. טובלים שיער יחיד של מכחול בצבע זוהר לא רעיל (שולחן חומרים), ובזהירות לשים טיפה קטנה אחת של צבע על הגב (dorsum) של הזחל. השתמש בצבע צבע הבולט מצבע הרקע ומצבע התבנית של הזחל (איור משלים 11). הקפידו להימנע מהצבת צבע על ראש הזחל.
3. ברגע שהצבע מתייבש (כ -30 בערך), מניחים כל זחל בודד בתוכו שתי מנות פלסטיק ברורות מכוסות המכילות כ-1 – 3 עלים קטנים של חומר מארח מסוף טרי וכותבים מזהה ייחודי על הספל והמכסה (איור משלים 12).
4. בדקו בזהירות כל אחד מהזחל מדי יום. הסרת עלים והגדר על משטח לבן. לבדוק את הספל, לנקות את המכסה, ולבחון את העלים תחת מיקרוסקופ מבתר לנוכחות מעטפת זחל (עורות יצוק) ו/או קפסולות ראש.
5. אם נמצא זחל החוצה, להסיר אותו מן הספל ולמקם אותו בצינור מיקרוצנטריפוגה מתויג עם מספר הספל המתאים ואת התאריך (ראה שלבים 8.1-8.6. להלן).
6. הזחלים מצביעה מצבוע אחרי כל מולוט ולהקליט תאריכים נשירה.
7. למדוד את אורך הגוף הכולל (ראש לקטע הבטן האחרונה) של כל זחל מדי יום באמצעות מחוגות דיגיטליות. קח שלוש מדידות ותעד את ממוצע השלושה, יחד עם התאריך והשעה. לצורך הזחלים המוקדמים, יש להשתמש בזכוכית מגדלת או בהיקף מדידה בעת מדידת המידות כדי להבטיח מדידות מדויקות.
8. החזר זחל אל הספל המקביל הפלסטיק החלק שלה.
9. הוסף חומר מארח טרי לפי הצורך ולהסיר את כל הפסולת מארח הישן. אם העובש נמצא בספל, היפטר והשתמש בספל חדש. כתוב את מספר המזהה הייחודי הנכון בספל החדש.
10. חזור על שלבים 7.5-7.9 עד שכל הזחלים יגיעו לשלב הסופי שלהם ולהתחיל את הבמה prepupal. כאשר הזחלים מפסיקים לאכול, להפוך צבע ירקרק-חום עמום, לאבד את הסוגרים הזוויתיים שלהם, ולעתים קרובות לשוטט מהפונדקאי, למזער את ההפרעה להם.
11. מניחים פיסת נייר מצומצמת בספל (ראו שלב 4.1).
12. לאחר כל זחל יש התגלמות מלאה, למדוד את האורך הכולל שלה כמו בשלב 7.8 לעיל ולהקליט את התאריך של pupated. . זה יהיה המולה האחרונה של כל אחד
13. בדקו את הגלמים מדי יום והקליטו תאריך eclosion וסקס של כל פרפר מבוגר וכתוצאה מכך.
14. מדוד את אורך אקורד כנף של כל פרפר באמצעות מחוגות דיגיטליות. פרפרים ניתן להחזיק בעדינות עם מלקחיים למדידה. אם הפרפר פעיל מדי כדי למדוד בקלות, למקם אותו באופן זמני במקרר עבור 30 או פחות ונסה שוב.

8. איסוף הזחל

1. ממלאים צינורית מיקרוצנטריפוגה. עם 0.2 μl של גליצרין סמן את החלק העליון של המכסה ואת הצד עם מספר הזחל, התאריך של molt, ואת כמוסת הראש (H.C.).
   הערה: הזחלים של זחלים מסוימים צורכים בקביעות את האקסושן שלהם, אבל כמוסת הראש צריכים להישאר.
2. הניחו את הזחל החוצה ואת כמוסת הראש המשויכת במכסה של כוסות פלסטיק ברורות והכניסו בו כמה טיפות אתנול.
3. בחנו את הזחל החוצה מתחת למיקרוסקופ מבתר על ידי הצבת אותו במכסה הספל מפלסטיק ברור ולשים כמה טיפות של אתנול על זה. אם כמוסת ראש הזחל כבר מופרדת מהאקסוויה, הנח טיפת גליצרין על קצה המלקחיים המחודדות, וגע בעדינות בקפסולה הראש לגליצרין. הצב את כמוסת הראש בשפופרת המיקרוצנטריפוגה המשויכת.
4. אם כמוסת הראש עדיין מחוברת לזחל החוצה, השתמשו במלקחיים מחודדים ובסיכת חרק כדי להפריד את כמוסת הראש מהזחל החוצה.
5. ברגע שהוא מופרד, השתמש בטכניקת הגליצרין כדי להרים את כמוסת הראש. אם יש יותר מדי אתנול, אתה יכול להשתמש מגבת נייר קטן כדי להסיר חלק, אבל להיזהר לא להסיר בטעות את קפסולת הראש.
6. הניחו את כמוסת הראש במבחנה ממולאת בגליצרין וסגרו את המכסה בחוזקה.

Results

במהלך שתי יוזמות שימור נפרדות מיקוד ההתאוששות של Cyclargus תומאסי בייאבייקר מ פברואר 2003 עד דצמבר 2010 ומנובמבר 2016 להווה, פרוטוקול זה שימש בהצלחה לייצר עודף 51,052 של אורגניזמים קיימא. מבוסס על תמונת סיכום של שנה אחת של פרודוקטיביות האוכלוסייה הכללית בשבי מיוני 2018 עד יוני 2019, סך של 10,166 אורגניזמים קיימא יוצרו, המייצגים 782.00 ± 118.93 אורגניזמים בחודש על 13 דורות. באופן דומה, משמעות הייצור ביצים לכל נקבה תחת תנאי מעבדה היה 114.00 ± 26.12 (n = 12)³¹. כתוצאה מכך האורגניזם משמעותי הפרודוקטיביות מדרג את התוכנית הזאת בין המאמצים הגדולים ביותר לשעבר באתרו בארה ב, יחד עם אלה של Euphydryas editha טיילורי, Speyeria היפוליטה, ו Lycaeides מליסה סמואליס²⁴. חלק מפרודוקטיביות זו ניתן לייחס לעובדה כי הפרפר הוא ברציפות ברועודד, הפקת דור אחד בקירוב כל 4-6 שבועות בשבי. רוב התוכניות האחרות להתרבות השימור כרוכות בטקא הינן יוניבולטין או ביובולטין. עם זאת, גם עבור תוכניות הקשורות מאוד פוריות מאוד כגון Speyeria spp., המספר הכולל של אורגניזמים קיימא המיוצרים עבור טרנסלוקציה שימורית על בסיס שנתי לעתים רחוקות עולה על כמה אלפי³². בהתאם לכך, אוכלוסיית השבויה שלנו אפשרה מחקר מונחה ואיסוף נתונים נרחב על פערי נתונים מרכזיים רבים חשוב לשפר את הטיפול הטוב ביותר במעבדה ושיטות הגידול (איור 1) כמו גם לסייע להודיע על החלטות התאוששות וניהול.

ממוצע זמן הפיתוח הכולל של זחל neonate למבוגר היה 28.63 ימים (שולחן 1). רוב הזחלים היו ארבעה מולטים (איור 2, איור 3), למרות ששניים היו חמישה מולטים, ואחד היו שישה מולטים. האורך הממוצע הכולל של כל מכלול הזחל היה 5.97 מ"מ, והזחלים היו הגדולים ביותר בשלבי החיים הרביעי והprepupal (שולחן 1). כאשר רק כולל משתנים עם יותר מ -30 תצפיות, הזמן הקצר ביותר הושקע בשלבי ההתחלה והprepupal הראשונים, והארוך ביותר בילה כגלמים (שולחן 1, איור 2). נקבות בדרך כלל פותחו מהר יותר בכל השלבים הילדותיים לעומת זכרים, למרות זאת לא היה השפעה משמעותית (p = 0.625). ניתוחים סטטיסטיים נערכו באמצעות RStudio גירסה 1.1.463 (R Core Team 2016)³³. אורך האקורד הממוצע של האגף המבוגר היה 12.64 מ"מ (שולחן 2), והיה הבדל משמעותי בין המינים (p = 0.047). המבחן הדו הדו-צדדי הופעל כדי להעריך את ההפרש של אקורד הכנף בין המינים. מודל רגרסיה לינארית ורגרסיה החורגת לאורך הממוצע של כל שלב בחיים הראו כי גולמי אורך היה הנבא הטוב ביותר עבור האורך אקורד מבוגרים (שולחן 3, טבלה 4). מודלים רגרסיה לזמן הפיתוח הראו כי מספר הימים שהושקע בשלב השני והרביעי והמספר הכולל של הימים היו הפרדיפרטורים הטובים ביותר לאורך אקורד האגף המבוגר, אבל רק מספר הימים במהלך ההרחבה הרביעית היה משמעותי (שולחן 5, טבלה 6). מכיוון שמשתנים היו רציפים, שני מודלים של רגרסיה לינארית הוסמו לזמן הפיתוח של כל שלב חיים, כמו גם אורך כל שלב חיים, עם אורך אקורד האגף המבוגר כמו המשתנה התלוי. בשני מודלים של הרגרסיה, היתה הפעלה של הקיגרות החורגות, כדי לקבוע את הצורה הטובה ביותר של אורך אקורד מבוגר.

איור משלים 1: דגימות מוצמדות של Cyclargus תומאסיבוגרים. (א) זכר בוגר, משמאל (שמאל), וגחוני (מימין). (ב) אישה בוגרת, משמאל (שמאל), מימין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 2: כלוב הטיסה הוקרן שוכן בחממה מבוקרת טמפרטורה. (א) הפנים מראה פוטאד צמחים נקטר למבוגרים וצמח מארח זחל העציץ יחיד. (ב) מתכת מדפים מסייע לרומם את הצמחים נקטר הפוטאד, כך שאין יותר מ 30 ס מ של שטח מן החלק הפנימי של הכלוב לפרחים הפורחים הגבוה ביותר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 3: הליך איסוף זוגות למבוגרים בקופולה. (א) זוג הזדווגות של למבוגרים בלבד בתוך כלוב הטיסות הוקרן (נקבה, ימין ושמאל ). (ב) זוגות הזדווגות שנאספו מכלוב הטיסה בבקבוקונים כובעי הצמד והכניסו לתוך המעבדה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 4: נוהל הרכבת חדר ההטלה. (א) שתי כוסות מערכת עם חומר מארח מסוף ומטליות כותנה. (ב) מזרק Sub-Q 1 ml (0.45 מ"מ x 16 מ"מ) עם משקה ספורט בטעם כותנה בספל נייר. (ג) כוסות מגורים הנקבות מאובטח עם טול שחור. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 5: מעבדה למקסם את הייצור ביצים. (א) חדרי ההטלה ממוקמים על ספסל מעבדה תחת אור מהדק עם נורת ליבון 40 W. (ב) מד חום ניטור הזיכרון ממוקם בסמוך לאורות עם חיישן הטמפרטורה נח על גבי חדר ההטלה הממוקם ישירות מתחת לאור מהדק. (ג) מזרק Sub-Q משני מ"ל ומיכל קטן המחזיק משקה ספורט בטעם הממוקם בסמוך לתאי ההטלה כדי להקל על הרענונים הכותנה באופן סדיר לאורך כל היום. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 6: הגדרת מעבדה לטיפול בזחל ותחזוקה. (A) שתי כוסות מערכת עם כל המכיל חומר מארח מסוף טרי וזחלים. (ב) הטמפרטורה בכוסות נשמרת בין 25 ° c -28 ° צ' לפעילות זחל אופטימלית ופיתוח על ידי נורות קלאמפ תקורה עם נורות ליבון 40 W. (ג) ניטור הזיכרון מעקב מדחום עם חיישן הטמפרטורה ממוקם ישירות בספל משמש לניטור טמפרטורה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 7: מוכנים לחדרי התגלמות (א) כוסותבודדות של פלסטיק שוכנו על מגשי הכוסות הפלסטיק הברורים. (ב) ריבוע נייר גלי מוצב בכל ספל של חלק מפלסטיק. (ג) זחל בוגר אחד ימוקם בכל מוכנות מפלסטיק בחלק הספל כדי pupate. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 8: הכנת הזחלים עבור התגלמות ותחזוקה גולמי. (א) זחל בוגר מוכן לוקעים נייר גלי. זה מדים חומים משעממים ואיבד כל סוגריים זוויתיים. (ב) מוכן לקבל הזחלים הבוגרים הסמוכים כוסות עם הזחלים האכלה. עם הזחלים מעפעפיו. שמתכוננים לקצב (ג) הpupation עם הגלמים. (ד) גדות הגלמים עם הגלמים המאורגנים לפי תאריך ומתוחזקים בתנאי מעבדה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 9: מעבדה הופעתה כלוב. (א) כלוב מוקפץ של רשת שינוי מתקפל המשכן את תאי התגלמות כבושים. (ב) עפעפיו של כל תאי התגלמות וסרים כדי להקל על מבוגרים מצליחים. (ג) כל הפרפרים למבוגרים קיימא ישוחרר לתוך כלוב הטיסה הוקרן כדי לאבטח הזדווגות מוצלחת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 10: פרפר זכר בוגר בהצלחה לאבד מגולם על ריבוע נייר גלי. (א) מבוגרהמפסידבגולם. (ב) מבוגר הוסר במלואו מן המעטפת גולמי. (ג) מבוגר מוצב כדי להרחיב את כנפיו. (ד) מבוגר מרחיב את כנפיו. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 11: זחל הנער החמישי מסומן בצבע זוהר לא רעיל. (א) טיפה קטנה של צבע אדום מנוגד, שאינו רעיל, מונחת על הדורסום באמצעות מברשת צבע כדי לסמן בהצלחה את הזחל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 12: הגדרת גידול לחקר ההיסטוריה של החיים. (א) מתויג באופןייחודי 2 אונקיית כוסות פלסטיק ברורות. (ב) זחל אחד מבודד בכל ספל. (ג) כל הזחלים מסומנים באופן אינדיבידואלי באמצעות כל השלבים ההתפתחותיים מ-neonate לפרפר מבוגר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 1: מספר הצמדים הנרשמים בקופולה על בסיס טמפרטורה (° צ') בתוך הליכה, כלוב הטיסה הוקרן שוכן בחממה בשליטת טמפרטורה. הטמפרטורה הוקלטה בתוך 2 הדקות הראשונות של אירוע זיווג מוצלח (n = 411). הנתונים המתקבלים שימשו כדי לסייע למקד את התנאים הסביבתיים מבוקרת כדי למקסם את ההצלחה ההזדווגות ובסופו של דבר התפשטות בשבי הפרודוקטיביות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: זמן ההתפתחות הממוצע (מספר הימים) של כל שלב חיים ילדותי. (א) בארים מציגים את הממוצע של כל קבוצה, וקווי שגיאה מייצגים את ערכי סטיית התקן העליונים והתחתונים עבור כל קבוצה. (ב) ברים כחולים כהים מייצגים נקבות, וכחול בהיר מייצגים זכרים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: קפסולות ראש שנאספו מ#25 בודדים באמצעות פרוטוקול היסטוריית חיים. כמוסות ראש צולמו על ידי יונתן ברמר באמצעות מערכת אוטומטית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

משלב החיים	אורך גוף מרושע (mm)	שגיאת Std (אורך)	זמן התפתחות ממוצע (num. days)	שגיאת Std (dev. time)
מופע האני	1.69478261 (n = 23)	0.02152643	2.90625 (n = 32)	0.08229783
מופע השני	2.77248958 (n = 32)	0.04302826	3.375 (n = 32)	0.16649857
היכל השלישי	5.45751042 (n = 32)	0.12120829	3.5 (n = 32)	0.20080483
מיכל הרביעי	10.2369688 (n = 32)	0.23653991	3.875 (n = 32)	0.18917265
מצפה המבקרים	8.7625 (n = 2)	2.6125	1.5 (n = 2)	0.5
מופע השישי	10.2666667 (n = 1)	נה	3 (n = 1)	נה
פרה-גולם	11.0858333 (n = 24)	0.23948251	2.9375 (n = 32)	0.21504641
גולם	9.0316129 (n = 31)	0.12106792	11.6578947 מ מ (n = 38)	0.3272288

טבלה 1: משך זמן ופיתוח ממוצע של כל שלב חיים. שגיאה סטנדרטית הכלולה עבור כל משתנה וגודל דגימה בסוגריים.

משלב החיים	כלומר אורך מיתר כנף (mm)	שגיאה מחלת מין
בוגר	12.63895 מ מ (n = 38)	0.1365516
נקבה	12.960 (n = 13)	0.1465588
זכר	12.472 (n = 25)	0.1863205

שולחן 2: מתכוון האגף הקדמי של הכנף עבור פרפרים למבוגרים. כולל אמצעים לנקבות, זכרים וכל מבוגרים (שני המינים משולבים).

מודל לחיקוי 1	שגיאת מחלת הערכה	ערך t	ערך פי
יירט	1.9179	3.128	0.0046 *
ממוצע אורך הזמן השני	0.6822	-1.11	0.278
אורך ממוצע שלישי	0.2928	0.476	0.6381
ממוצע אורך הרביעי	0.1373	-0.57	0.5739
גלמים ממוצע אורך	0.246	3.957	0.0005 * * *
p < 0.001; * * p < 0.01; * p < 0.05.

טבלה 3: טבלת מקדמים עבור מודל רגרסיה ליניארית (LM model 1) כדי להעריך את הקשר בין האורך הממוצע של כל שלב חיים (n > 30 כלולים בניתוח) ואורך אקורד האגף המבוגר. משתנה תלוי: אורך אקורד מבוגר האגף (mm).

קדמים	שגיאת מחלת הערכה	ערך t	Pr (> | t |)
יירט	1.7091	3.031	0.0053 *
גלמים ממוצע אורך	0.1878	4.414	0.0002 * * *

שולחן 4: רגרסיה סטפנסקי (סטפני 1). משתנה תלוי: אורך אקורד מבוגר האגף (mm).

המודל השני	שגיאת מחלת הערכה	ערך t	ערך פי
יירט	1.1888	12.643	4.21 e-12 * * *
מספר ימי הראשון	0.3486	0.937	0.3583
Num. ימים הזמן הראשון	0.2603	-0.686	0.4993
Num. ימים המהלך השלישי	0.2281	1.028	0.3141
Num. ימים הזמן הרביעי	0.2048	2.378	0.0257 *
מספר ימים לפני הגלמים	0.222	1.133	0.2686
מספר ימי הגלמים	0.2495	0.616	0.5435
סה ' ' כ לימים	0.1913	-1.454	0.1589
p < 0.001; * * p < 0.01; * p < 0.05.

טבלה 5: טבלת מקדמים עבור מודל רגרסיה ליניארית (LM model 2) כדי להעריך את הקשר בין זמן פיתוח לבין אורך אקורד של אגף מבוגר. משתנה תלוי: אורך אקורד מבוגר האגף (mm).

קדמים	שגיאת מחלת הערכה	ערך t	ערך פי
יירט	0.89304	16.314	7.86 e-16 * * *
Num. ימים הזמן הראשון	0.17974	-1.809	0.0811 •
Num. ימים הזמן הרביעי	0.16917	2.075	0.0473 *
סה ' ' כ לימים	0.04184	-1.787	0.0848 •
p < 0.001; * * p < 0.01; * p < 0.05; • p < 0.1

שולחן 6: רגרסיה חורגת (סטפ wise 2) לזמן פיתוח. משתנה תלוי: אורך אקורד מבוגר האגף (mm).

Discussion

כאן, אנו ממחישים את האפקטיביות של פרוטוקול הרבייה לשעבר זה מוכח ex לייצור המוני של פרפרים בסיכון, ואיך זה יכול להיות מותאם למחקר מדעי לעזור לטפל מפתח התנהגות, היסטוריה של החיים, או פערים נתונים אקולוגיים. הבנה מוגברת של זמן פיתוח ממוצע (ביצה למבוגר), משך ממוצע בכל שלב חיים, וטמפרטורה אופטימלית להזדווגות, למשל, שימשו כדי לסייע למקד את הפרוטוקול ולשפר את הצלחת התוכנית הכוללת. הרוב המכריע של הפרוטוקולים הקיימים פירוט רק שיטות הגידול אורגניזם ולא לדון איסוף נתונים, מחקר מדעי, או שימוש בתוצאות כאלה כדי לעזור ליידע ולהתאים שיטות לשעבר באתרו.

פרוטוקול זה דורש טיפול יומיומי באורגניזם. האורגניזם בריאות ופרודוקטיביות הם הוגדל על ידי תנאי הגידול נקי, חוסר צפיפות יתר של אורגניזם, ואת הזמינות של חומר הצמח מארח זחל באיכות גבוהה. ברוב המקרים, אנו מנצלים אספקה ומכולות חד פעמיות (כגון כוסות נייר ופלסטיק), ובדרך כלל מחליפים אותם בקביעות, לעתים קרובות מדי יום, ואף פעם לא עושים שימוש חוזר בחומר. זה גם חסכוני וממזער את הצורך לתברואה אינטנסיבית יותר של העבודה של חומרים. כלים בשימוש נפוץ, עם זאת, כגון מלקחיים אנלוגיים, צבע בצבעי מים מברשות, ומוקפץ קטן כלובי הטיסה, כמו גם כל משטחי הגידול כגון שולחנות שולחן וצמרות ספסל מעבדה מחוטא באופן קבוע באמצעות 5% תמיסת אקונומיקה. לוח הזמנים המדויק של התברואה הוא תלוי מאוד בתדירות של שימוש, אורגניזם פנולוגיה, ומשתנים אחרים, ויש להתאים לצרכים הספציפיים של כל תוכנית לשעבר באתרו. אנו מוצאים בנוסף כי נייר קצבים לבנים שימושי כדי לכסות את כל משטחי הגידול. הוא מספק המצע נקי זול, ניתן לפריסה בקלות, ואת צבע הרקע הלבן מקלה על האיתור של אורגניזמים תועים. לטיפול יומיומי, כל אנשי המעבדה צריכים תמיד ללבוש כפפות חד פעמיות במעבדה כדי למזער את הזיהום ואת ההגנה על העובדים מכל גירוי העור הפוטנציאלי כתוצאה מהמפעל או מטפל האורגניזם. זה קריטי במיוחד אם לאנשי מעבדה יש חיות מחמד הדורשות טיפולי פרעושים אקטואליים. אפילו כמות קטנה של שאריות מרכיבים פעילים יכולה להיות מסוכנת לצאן בשבי.

בנוסף, יש לנקוט בטיפול כדי למזער את צפיפות היתר של האורגניזם. צפיפות יתר של הזחלים יכול במהירות להוביל בריאות האורגניזם מופחת ואפילו קניבליזם בטקא מסוימים, במיוחד ליקוביתיים. הפרדת הזחלים באופן סדיר להפחתת מספרים בתוך מיכלי גידול ו/או אפילו בידוד זחלים בודדים כפי שמתואר בחלק היסטוריית החיים של הפרוטוקול עשוי להיות הכרחי. המספרים האידיאליים לכל גורם מכיל עשויים להשתנות באופן משמעותי על ידי מפרט טקסון ושונים לשעבר באתרו אילוצים התוכנית כגון תקציב זמין, מעבדה מתקנים, מספר כולל של אנשי הגידול. כמו כן, אנו ממליצים להשאיר מרחב הולם בין כוסות הזחלים הדיור כדי למזער את הפוטנציאל של תנועת האורגניזם בין מכולות. לבסוף, לאוכלוסיות בשבי גדולות יותר, מומלץ מאוד להפריד בין מתקני מעבדה אחד או יותר. אסטרטגיית שמירה זו יכולה לסייע בהפחתת אובדן קטסטרופלי של האוכלוסיה כולה עקב מחלות או השפעות לא צפויות אחרות.

הצמח מארח זחל באיכות וזמינות כוננים ייצור בעלי חיים ומשפיע מאוד על שיעורי התפתחות הזחל ובריאות האוכלוסייה הכוללת. עם זאת, מעטים שפורסמו דוחות או מחקרים להדגיש זה הדרישה מאחורי הקלעים או לדון בשיטות הפעוטון הטובים ביותר תכנון תוכנית באתרו לשעבר מוצלחת חייב לחשבון עבור כמויות הצמח הולם, הייצור, ותחזוקה. כמו הזחלים רבים גם דורשים או מעדיפים חלקי צמחים מסוימים (למשל, צמיחה חדשה מסוף, ניצנים פרח ותפרחות, פרי, וכו '), יעיל ההיערכות כדי להבטיח המתאים הצמח פנולוגיה נדרש.

שיקולים נוספים כוללים ניהול דמוגרפי וגנטי מתאים, ואת המזעור של כל השפעות שליליות פוטנציאליות של השבי. אנו ממליצים על פיתוח תוכנית ניהול גנטית. זה עשוי לכלול אסטרטגיות לכלול את העירוי של חומר גנטי חדש על בסיס קבוע, למקסם את הגיוון ולמנוע סגירת הרבייה, מדי פעם להעריך אורגניזם מפתח משתני כושר, ולנטר גנטיקה ברמה מסוימת כדי לאפשר השוואה לאוכלוסיות הזמינות ולבדוק בריאות מניות בשבי. השוואה תקופתית של מאפייני האנשים השבויה ליחידים מהאוכלוסיות המייסדות מוצדקת גם^34,35.

פרוטוקולים אלה מייצגים את השיטות המומלצות המוכחות. הם צריכים להיות מועילים למגוון של חוקרים ושימור שיכולים ליישם במישרין או להתאים את השיטות שלנו למחקרים שלהם ולשעבר פרפר בסיכון או שימור חרקים ותוכניות שחזור. סביר להניח שפרוטוקול הרבייה הנמצא בשבי מיתאר ישים ביותר על תוכניות המתמקדות ב-Lycaenidae הקשורים בטקאו או בגודל קטן יותר. ובכל זאת, מרכיבים רבים כגון אלה הכרוכים באבטחת חיזור והזדווגות מוצלחים, תחזוקת מבוגרים עם נקטר מלאכותי, הגדלת מיקום ההטלה וטיפול בזחל כללי ניתן ליישם בהרחבה או להתאים למערך רחב יותר של מיסים. כפי שהוזכר קודם לכן, בעוד שגמישות הפרוטוקול צריכה להיות מודגשת, הגישה למתודולוגיות מבוססות אחרות יכולה לסייע לספק תובנה רבת-ערך ונקודת מוצא בת קיימא להסתגלות ולחדשנות. השיטות המוצגות להערכת מאפיינים שונים של היסטוריית החיים, כגון זמן פיתוח הזחל, ומספר הזחל הטעון, ללא ספק, מהווה ישימות רחבה לתוכניות רבייה שימורית אחרות ולטיפול בטקא בסיכון. אנו מעודדים אחרים כדי לסייע בהתמודדות פערים מפתח נתונים אקולוגי כאשר הדבר אפשרי וכדי לפרסם פרוטוקולים נבדק ותוצאות התוכנית.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
12 גרם כוסות נייר לבן רגיל (קאראט)	Lollicup	C-KC16
15 אמפר 2 שקעים מכני מגורים פלאג-אין ספירה לאחור תאורת טיימר	Lowes	UTTNI2423
1 מ"ל מזרקי sub-Q (0.45 מ"מ x 16 מ"מ)	פישר סיינטיפיק	14-829-10F
2 אונקיות מכסי חלק מפלסטיק שקוף Party	City	#791091
2 oz כוסות חלק מפלסטיק שקוף	עיר המסיבות	#791088
34.29 ס"מ x 34.29 ס"מ x 60.96 ס"מ כלוב גידול רשת קופצת מתקפלת	Bioquip	1466BV
8.5 אינץ' 1 וואט ליבון מהודק מנורת עבודה	נמוכה	PTC301L Amazon.com
קליפר דיגיטלי אלקטרוני אדורי		B07QX2SK2F
Big Kid's Choice Arts & סט מברשות מלאכת יד-12/חבילה, גדלים שונים	Walmart	#10965135
מגש כוסות פלסטיק שקוף	Frontier Scientific Services	AG_9040
Fisher Scientific מדחום ניטור זיכרון הניתן למעקב	Fisher Scientific	15-077-8D
מלקחיים, נקודות ישרות, סגנון שוויצרי #4, נירוסטה	BioQuip	4531
Humco גליצרין 6 אונקיות	Walmart	#303951037966
ערכת צבע זוהר, כחול, אדום, צהוב, 4 Dram	Bioquip	1166A
בטעם מלון Gatorade Fierce Thirst Quencher או משקה ספורט Gatorade Thirst Quencher בטעם פונץ' פירות	Walmart	#568456137
Neoteck Digital 2 ב-1 Amazon.com מדחום-מדחום		NTK026
Olympus 0.6 מ"ל מיקרו-צינורות, שקוף, פוליפרופילן, Nonsterile	Amazon.com	24-272C
מרסס מיכל פלסטיק	Lowes	#5318
Q-tips צמר גפן	Walmart	#551398298
מיכל טאפרוור מפלסטיק מלבני עם מכסה (Rubbermaid)	Walmart	#554320171
Showgard 903 מלקחיים בולים, 4 5/8 אינץ' קצה כף	Amazon.com	#787793151378
גליל נייר גלי חד פנים	Amazon.com	BXSF12
סכין שירות להב הצמד	OLFA	#5023
סולו 9 אונקיות כוסות פלסטיק	סולו	SQ950
Thorton פלסטיק 50 דראם בקבוקון כובע הצמד מפלסטיק שקוף (6.25 אונקיות)	Thorton Plastics	#50
סליל טול 9 אינץ' x 150 רגל - בדים שחורים	של ג'ו אן	#16029696
Zep 32 oz בקבוק ספריי פלסטיק	נמוך	HDPRO36