يصف هذا البروتوكول تقييمًا شاملًا للتوافق المنقم لأجهزة ملامسة الدم باستخدام غرسات الأعصاب الوعائية المقطوعة بالليزر. يتم تطبيق نموذج حلقة التدفق مع الدم البشري الطازج ة المندفعة لمحاكاة تدفق الدم. بعد التروية ، يتم تحليل مختلف علامات الدم ومقارنتها بالقيم المكتسبة مباشرة بعد جمع الدم لتقييم توافق الخلايا الدموية للأجهزة المختبرة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
اختبار توافق الدم من زرع الدم الاتصال في نموذج حلقة تدفق محاكاة تدفق الدم البشري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يتطلب الاستخدام المتزايد للأجهزة الطبية (مثل الطعوم الوعائية والدعامات والقسطرة القلبية) لأغراض مؤقتة أو دائمة تبقى في الدورة الدموية في الجسم اتباع نهج موثوق به ومتعدد البارامترية الذي يقيم المضاعفات الدموية المحتملة التي تسببها هذه الأجهزة (أي تنشيط وتدمير مكونات الدم). اختبار شامل في المختبر الانحلال يلامس الدم يزرع هو الخطوة الأولى نحو النجاح في تنفيذ vivo. ولذلك، فإن التحليل الشامل وفقا للمنظمة الدولية للتوحيد القياسي 10993-4 (ISO 10993-4) إلزامي قبل التطبيق السريري. تصف حلقة التدفق المقدمة نموذجًا حساسًا لتحليل الأداء المنخر للدعامات (في هذه الحالة ، الأعصاب الوعائية) وتكشف عن الآثار الضارة. استخدام الدم البشري الطازج الكامل وأخذ عينات الدم لطيف ضرورية لتجنب PREACTIVATION من الدم. يتم غرس الدم من خلال أنابيب مُهَمَلة تحتوي على عينة الاختبار باستخدام مضخة معتمية بمعدل 150 مل/دقيقة عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. قبل وبعد التروية ، وعلامات الدم (أي ، عدد خلايا الدم, الهيموغلوبين, الهيماتوكريت, وعلامات البلازما) تشير إلى تنشيط الكريات البيض (متعدد الأشكال النووية [PMN]-elastase), الصفائح الدموية (α-تجلطة الجلجلوبولين [α-TG]), يتم تحليل نظام التخثر (thombin-antithrombin III [TAT]), وسلسلة مكملة (SC5b-9). في الختام، نقدم نموذجًا أساسيًا وموثوقًا به لاختبار توافق الإنتماؤس الواسع النطاق للدعامات وغيرها من أجهزة ملامسة الدم قبل التطبيق السريري.
المقدمة
يتطلب تطبيق الغرسات والمواد الحيوية في الجسم الحي ، والتي تتفاعل مع دم الإنسان ، إجراء اختبارات مكثفة قبل السريرية مع التركيز على التحقيق في علامات مختلفة من نظام الهيموستاتيكي. تحدد المنظمة الدولية للتوحيد القياسي 10993-4 (ISO 10993-4) المبادئ المركزية لتقييم أجهزة الاتصال بالدم (أي الدعامات والطعوم الوعائية) وتنظر في تصميم الجهاز والمنفعة السريرية والمواد اللازمة1.
الدم البشري هو السائل الذي يحتوي على مختلف بروتينات البلازما والخلايا، بما في ذلك الكريات البيض (خلايا الدم البيضاء [WBCs])، كريات الدم الحمراء (خلايا الدم الحمراء [RBCs])، والصفائح الدموية، والتي تقوم بمهام معقدة في جسم الإنسان2.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على إجراء أخذ عينات الدم من قبل لجنة الأخلاقيات في كلية الطب في جامعة توبينغن (رمز تحديد المشروع: 270/2010BO1). وقدمت جميع المواضيع موافقة خطية ومستنيرة على الإدراج قبل المشاركة.
1. إعداد الهيبارين محملة مونوفيت
- اخلط الهيبارين غير المخفف (5000 وحدة دولية/مل) مع كلوريد الصوديوم (NaCl، 0.9%) حل وإعداد حل مع تركيز الناتج من 15 وحدة دولية / مل من الهيبارين.
- أضف 900 ميكرولتر من محلول الهيبارين المخفف إلى كل مونوفيت محايدة (9 مل) للحصول على تركيز الهيبارين النهائي من 1.5 وحدة دولية / مل بعد أخذ عينات الدم. إعداد ثلاث مونوفيت لكل متبرع بالإضافة إلى ثلاث مونوفيت احتياطي وتخزين مونوفيت محملة بالهيبارين عند 4 درجات مئ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ملخصا بإيجاز، تم جمع الدم البشري كله في مونوفيت محملة بالهيبارين ثم تم تجميعها واستخدامها لتقييم مستويات خط الأساس لعدد الخلايا، فضلا عن علامات التوافق الانحلالي البلازمي.
وفي وقت لاحق، تم ملء الأنابيب التي تحتوي على عينات زرع الأعصاب الوعائية، وتم تخثر الدم لمدة 60 دقيقة عند 150 مل/دقيقة و37 درجة مئوية باستخدام مضخة تمعية. مرة أخرى ، تم تحليل عدد الخلايا في جميع المجموعات ، وتم إعداد عينات البلازما لتحليل ELISA(الشكل 1). تم إجراء القياس الكمي لخلايا الدم ومعلمات .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يصف البروتوكول المقدم طريقة شاملة وموثوقة لاختبار توافق الدم للغرسات التي تلامس الدم وفقًا لمعيار ISO 10993-4 في نموذج تدفق القص الذي يقلد تدفق الدم البشري. وتستند هذه الدراسة على اختبار يزرع بالليزر والأوعية الدموية العصبية ولكن يمكن أن يتم ذلك مع مجموعة متنوعة من العينات. وتبين النتائج أن هذه الطريقة تمكن من إجراء تحليل واسع النطاق لمختلف البارامترات مثل عدد خلايا الدم، وانتشار العديد من علامات التوافق المنافي، والتصور المجهري لسطح الجهاز بعد ملامسة الدم. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن الكشف عن الاختلافات المحتملة فيما .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
لأداء المجهر الإلكتروني المسح الضوئي، ونحن نشكر ارنست Schweizer من قسم علوم وتكنولوجيا المواد الطبية من مستشفى جامعة Tuebingen. وقد تم دعم البحث من قبل وزارة التعليم والشباب والرياضة في CR في إطار البرنامج الوطني للاستدامة الثاني (مشروع BIOCEV-FAR LQ1604) ومشروع مؤسسة العلوم التشيكية رقم 18-01163S.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| aqua ad iniectabilia | Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Germany | 1088813 | |
| beta-TG ELISA | Diagnostica Stago, Duesseldorf, Germany | 00950 | |
| Centrifuge Rotana 460 R | Andreas Hettich, Tuttlingen, | Germany-Citrat | |
| monovettes (1.4 mL) | Sarstedt, Nü mbrecht ، ألمانيا | 6،16،68،001 | |
| CTAD monovettes (2.7 مل) BD | Biosciences ، هايدلبرغ ، ألمانيا | 367562 | |
| EDTA monovettes (1.2 مل) | Sarstedt ، N & uuml. mbrecht ، ألمانيا | 6،16،62،001 | |
| الإيثانول سنويا (1000 مل) | AppliChem ، دارمشتات ، ألمانيا | 1،31،08،61،611 | |
| Glutaraldehyde (25٪ في الماء) | SERVA Electrophoresis ، هايدلبرغ ، ألمانيا | 23114.01 | |
| طلاء الهيبارين للأنابيب | Ension ، بيتسبرغ ، الولايات المتحدة الأمريكية | - | |
| الهيبارين - Natrium (25.000 IE / 5 مل) LEO | Pharma ، Neu-Isenburg ، ألمانيا | PZN 15261203 | |
| قارئ متعدد الألواح Mithras LB 940 | Berthold ، Bad Wildbad ، | ألمانيا-NaCl | |
| 0,9٪ | Fresenius-Kabi ، Bad-Homburg ، ألمانيا | 1312813 | |
| monovettes محايدة (9 مل) | Sarstedt ، N & uuml ؛ mbrecht ، ألمانيا | 2،10،63،001 | |
| PBS buffer (بدون Ca2 + / Mg2 +) | Thermo Fisher Scientific ، دارمشتات ، ألمانيا | 70011044 | |
| المضخة التمعجية ISM444B | كول بارمر ، فيرثيم ، ألمانيا | 3475 | |
| ماصة (100 & micro ؛ L) | Eppendorf ، Wesseling-Berzdorf ، ألمانيا | 3124000075 | |
| Pipette (1000 & micro ؛ L) | Eppendorf ، Wesseling-Berzdorf ، ألمانيا | 3123000063 | |
| حاوية بلاستيكية (100 مل) | Sarstedt ، N & uuml ؛ mbrecht ، ألمانيا | 7،55،62،300 | |
| PMN-Elastase ELISA | Demeditec Diagnostics ، كيل ألمانيا | DEH3311 | |
| أنبوب البولي فينيل كلوريد | Saint-Gobain Performance Plastics Inc. ، Courbevoie | France-Reaction | |
| Tubes (1.5 مل) | Eppendorf ، Wesseling-Berzdorf ، ألمانيا | 30123328 | |
| غرسات قطع الليزر العصبية الوعائية | Acandis GmbH ، Pforzheim | 01-0011x | |
| SC5b-9 ELISA | TECOmedical ، Buende ، ألمانيا | A029 | |
| مسح المجهر الإلكتروني | Cambridge Instruments ، كامبريدج ، المملكة المتحدة | - | |
| شريط مانع للتسرب (96 لوحة بئر) | Thermo Fisher Scientific ، دارمشتات ، ألمانيا | 15036 | |
| حقنة 10/12 مل Norm-Ject | Henke-Sass-Wolf ، Tuttlingen ، ألمانيا | 10080010 | |
| مجموعة TAT الصغيرة | Siemens Healthcare ، ماربورغ ، ألمانيا | OWMG15 | |
| حمام مائي نوع 1083 | Gesellschaft f & uuml ؛ r Labortechnik, Burgwedel, Germany | - |
المراجع
- ISO. Biological evaluation of medical devices. , ISO 10993-4 (2002).
- Weber, M., et al. Blood-Contacting Biomaterials: In Vitro Evaluation of the Hemocompatibility. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 6, 99(2018).
- Li, Y., Boraschi, D.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
