Этот протокол представляет собой надежную, воспроизводимую модель васкуляризированного композитного аллотрансплантататата (VCA), направленную на одновременное изучение иммунологии и функционального восстановления. Время, вложенное в дотошную технику в правой задней конечности задняя ортопедическая трансплантация с сшитыми сосудистой анастомозой и нервной коапптации дает возможность изучения функционального восстановления.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Принимая следующий шаг: Нейронная коаптация ортопедической модели трансплантации задних конечностей для максимального функционального восстановления в Крыса
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Пересадка конечностей, в частности, и васкуляризированные композитные аллотрансплантации (VCA) в целом имеют широкие терапевтические перспективы, которые были загнаны в тупик нынешних ограничений в иммуносупрессии и функционального нейромоторного восстановления. Многие модели животных были разработаны для изучения уникальных особенностей VCA, но здесь мы представляем надежную воспроизводимую модель ортопедической пересадки задних конечностей у крыс, предназначенных для одновременного исследования обоих аспектов текущего ограничения VCA: стратегии иммуносупрессии и функционального нейромоторного восстановления. В основе модели лежит приверженность тщательной, проверенной временем микрохирургических методов, таких как сшитые вручную сосудистые анастомозы и сшитые вручную нейронные коапптации бедренного нерва и седалищного нерва. Такой подход дает прочные реконструкции конечностей, которые позволяют дольше жить животных, способных реабилитации, возобновление повседневной деятельности, и функциональное тестирование. При кратковременном лечении обычных иммуносупрессивных средств, аллотрансплантированные животные выжили до 70 дней после трансплантации, и изотрансплантированные животные обеспечивают длительный контроль за 200 дней после оперативного. Доказательства неврологического функционального восстановления присутствуют через 30 дней после оперативного. Эта модель не только предоставляет полезную платформу для допроса иммунологических вопросов, уникальных для VCA и регенерации нервов, но и позволяет in vivo тестирования новых терапевтических стратегий, специально предназначенных для VCA.
Введение
Пересадка конечностей в более широкой категории васкуляризированного композитного аллотрансплантатата (VCA) или композитного аллотрансплантатата (CTA) до сих пор не выполнила свои терапевтические перспективы. С момента первой успешной пересадки рук человека в Лионе, Франция и Луисвилле, штат Кентукки в 1998 и 1999 годах, более 100 верхних конечностей трансплантации были выполнены во всем мире в тщательно отобранных пациентов1. Более широкая применимость была загнана в тупик из-за существенного иммуносупрессии и ограниченного функционального нейромотора восстановления. Текущие стратегии иммуносупрессии приводят к 85% заболеваемости острым отторж....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты проводились в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения (NIH) и были одобрены Северо-Западным университетом по уходу и использованию животных. Конкретные процедуры выполнялись в соответствии с протоколом IS00001663.
ПРИМЕЧАНИЕ: Два штамма крыс были использованы, Льюис крыс и август Копенгаген х ирландский (ACI) крыс. Звери были разделены на три группы лечения: аллотрансплант без подавления иммунитета (ACI Льюис), аллотрансплант с обычным подавлением иммунной системы (ACI к Льюису), и изотрансплант (Льюис Льюис или ACI к ACI). Льюис является инбредным ш....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Выживание и восстановление зависят от тщательной хирургической техники. Внимание к сосудистым анастомозы и нервных анастомозов, а также костной коапптации, как описано выше, имеет решающее значение для максимизации успеха этой модели. Оперативный дизайн и репрезентативные анастомотические результаты показаны на рисунке 1.
Общая смертность зависела от стратегии иммуносупрессии, при этом большинство изотрансплантированных животных достигали конечной точки исследован.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Трансплантация конечностей, под более широкой категорией сосудистого компонента аллотрансплантации (VCA), широко применяется терапевтические перспективы до сих пор невыполненными. Основные препятствия лежат в нерешенных иммунологических вопросов, уникальных для VCA и нейромоторных методов восстановления, используемых в настоящее время. Разработка новых методов будет зависеть от моделирования животных, которое является гибким, надежным и воспроизводимым.
Многие модели животных были созданы в VC.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была профинансирована Фондом Франкеля и Северо-Западной мемориальной больницей Маккормик Грант (Операция RESTORE). Исследования, представленные в этой публикации, были поддержаны Национальным институтом общих медицинских наук Национальных институтов здравоохранения под номером T32GM008152. Эта работа была поддержана Северо-Западного университета микрохирургии ядро и поведенческие фенотипирования ядра.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Наркозный аппарат | Vet Equip | 911103 | |
| шприц 0,5 мл | Exel | 26018 | |
| игла 18 калибра | BD | 305196 | |
| шприц 1 мл | BD | 309659 | |
| игла 22 калибра | BD | 305156 | |
| ангиокатетер 24 калибра | Sur-Vet | ||
| 25- игла для манометра | Exel | 26403 | |
| шприц 3 мл | BD | 309657 | |
| шприц 5 мл | Exel | 26230 | |
| Alcohol | Fisher Scientific | HC-600-1GAL | |
| Индукционная камера для анестезии | Vet Equip | 941443 | |
| Система поглотителя анестезирующего газа | Vet Equip | 931401 | |
| Биполярный электрокоагуляция | Aura | 26-500 | |
| Горький спрей Спрей | Henry Schein | 5553 | |
| Костный воск | CP Medical | CPB31A | |
| Дыхательный контур | Vet Equip | 921413 | |
| бупренофином | Reckitt Benckiser | 12496075705 | |
| Castro-Viejos игольчатые водки | Roboz | RS-6416 | |
| Аккумуляторная ротационная пила | Dremel | 8050-N/18 | |
| Ватная палочка для тампона | Fisher Scientific | 23-400-101 | Для гемостаза |
| DigiGait Appparatus и программная | мышь Особенности | MSI-DIG, DIG-SOFT | |
| Dumont щипцы (#4) | Roboz | RS-4972 | |
| Dumont щипцы (#5) | Roboz | RS-5035 | |
| Энрофлоксацин | Norbrook | ANADA 200-495 | |
| FK-506 | Astellas | 301601 | |
| Марля | Kendall | 1903 | |
| Марля | Covidien | 8044 | |
| Перчатки | Microflex | DGP-350-M | |
| Машинки для стрижки волос | Oster | 078005-010-003 | |
| Ручная монополярная электрокаутерия | Bovie | AA00 | |
| Аппарат Hargreaves | Ugo Basile S.R.L. Gemonio, Италия | 37370 | |
| Грелка | Walgreens | 126987 | |
| гепарином | Fresenius Kabi | 42592K | |
| Нагревательная пластина | Corning | PC-351 | Для подогрева реанимационной жидкости |
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| Lactated ringers | Baxter | 2B2074 | |
| Большая чашка Петри | Fisher Scientific | FB0875713 | Для донорского трансплантата в охлажденном физрастворе |
| Meloxicam | Henry Schein | 49755 | |
| микро Collin Hartmann ретрактор | |||
| Микро рассекающие ножницы | Roboz | RS-5841 | |
| Microfibrillar collagen powder | BD | 1010590 | Для гемостаза |
| Микрососудистые клипсы | Roboz | RS-5420 | |
| Обычный физиологический раствор | Baxter | 2F7124 | |
| Офтальмологическая | смазка Dechra | IS4398 | |
| Рапмицин | MedChem Express | HY-10219 | |
| Маленькая чашка Петри | Fisher Scientific | FB0875713A | Для подогретой реанимационной жидкости |
| Стерильные простыни | ProAdvantage | N207100 | |
| Хирургический халат | Cardinal Health | 9511 | |
| Хирургическая маска | 3M | 1805 | |
| Хирургический микроскоп, оптическая модель OPMIMD | Zeiss | 169756 | |
| Хирургический микроскоп, Универсальный S3 | Zeiss | 243188 | |
| Шовный материал 10-0 нейлон | Covidien | N2512 | |
| Шов 5-0 викрил | Ethicon | J213H Шов | |
| 7-0 шелковый галстук | Teleflex | 103-S | |
| Лента | 3M | 1530-1 | |
| Ультразвуковой очиститель инструментов | Roboz | RS-9911 | |
| Щипцы для расширения сосудов | Roboz | RS-5047 |
Ссылки
- Elliott, R. M., Tintle, S. M., Levin, L. S. Upper extremity transplantation: current concepts and challenges in an emerging field. Current Reviews in Musculoskeletal Medicine. 7 (1), 83-88 (2014).
- Petruzzo, P., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Больше статей
Васкуляризированный композитный аллотрансплантаттехника нейральной коаптациисшивание сосудистых анастомозов вручнуювосстановление бедренного нерваанастомоз седалищного нервамикрохирургическая трансплантация конечностимодель задней конечности крысыстратегии иммуносупрессиифункциональное нейромоторное восстановление
