Method Article

Анализ врожденных пороков сердца в эмбрионах маусов с использованием квалификационных и количественных гистологических методов

DOI:

10.3791/60926

⸱

March 10th, 2020

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Michigan State University, 2Institute for Quantitative Health Sciences and Engineering, Michigan State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе мы описываем процедуры качественного и количественного анализа фенотипов развития у мышей, связанных с врожденными пороками сердца.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Врожденные пороки сердца (ИБС) являются наиболее распространенным типом врожденных дефектов у людей, затрагивающих до 1% всех живорождений. Тем не менее, основные причины ИКД по-прежнему плохо изучены. Развивающаяся мышь представляет собой ценную модель для изучения ИКД, потому что сердечные программы развития между мышами и людьми очень сохраняются. Протокол подробно описывает, как производить эмбрионы мыши желаемой гестационной стадии, методы изоляции и сохранения сердца для обработки ниже по течению, количественные методы выявления распространенных типов ИБС по гистологии (например, желудочковая перепдал дефекты, дефекты межпредсердной перегородки, патентный артериоз протока и количественные методы гистоморфометрии для измерения общих фенотипов мышечного уплотнения. Эти методы сформулировать все шаги, связанные с подготовкой образца, сбор омывании и анализа, что позволяет ученым правильно и воспроизводимо измерять ИБС.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ИБС являются наиболее распространенным типом врожденных дефектов у людей и являются основной причиной смерти, связанной с врожденными дефектами1,2,3,4,5,6. Хотя около 90% новорожденных детей выживают ИБС, это часто связано со значительной заболеваемости и медицинских вмешательств на протяжении многих лет, налагая тяжелое бремя на жизнь пациентов и системы здравоохранения7,8,9....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все животные, используемые в экспериментах, упомянутых в настоящем документе, лечились с использованием руководящих принципов по уходу за животными Комитета по уходу и использованию животных Мичиганского государственного университета (IACUC).

1. Приуроченное спаривание мышей C57BL6/J для производства эмбрионов

  1. После того, как мыши достигли возраста размножения (6-8 недель), положить их вместе в формате разведения гарема (т.е. две женщины на одного мужчину). Установите их для разведения где-то во второй половине дня или вечером.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши часто размножаются в течение 1 ч после того, как огни были выключены в их жилищном у....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Индекс уплотнения мышц был сравнен между сердцами, развивающимися в двух различных средах, контрольной и экспериментальной группой. Эти протоколы использовались для количественного анализа уплотнения мышечной ткани, что позволяло статистический анализ. Было показано, что мышечное уплотнение значительно снижается в экспериментальных сердцах по сравнению с эмбрионами, которые развивались в неэкспериментальных условиях.

Эмбрионы бы.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол исследует методы, связанные с анализом сердечного развития в эмбриональных сердцах. Некоторые ограничения этого метода являются необходимой физической ловкости для подготовительных методов, которые могут потребовать практики, и мастерство с микроскопом изображения. Если ломтики, полученные на криостате, грязные, гематоксилин и эозиновые окрашивания не будет ясно, или если изображения, сделанные на микроскоп имеют плохое освещение, то метод, используемый с ImageJ не будет работать. Ограничение пороговой функ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют раскрытия информации, чтобы сообщить.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Лаборатория Агирре поддерживается Национальным институтом сердца, легких и крови Национальных институтов здравоохранения под номером премии K01HL135464 и Американской ассоциацией сердца под номером 19IPLOI34660342.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Коническая трубка (трубки) 15 млFisher Scientific# 1495970C
C57BL/6J МышиJackson LabsC57BL/6J - стоковые 000664
Банки для окрашивания коплина (x6)VWR Scientific# 25457-006
Покровные стекла 24X50MM #1.5VWR Scientific# 48393-241
Cryostat - Leica CM3050SLeicaN/A
Препарирующая тарелка(ы)Fisher Scientific# 50930381
Dumont #5 - Тонкие щипцы (x2)Fine Science Tools# 11254-20
Эозин Y растворMillipore Sigma# HT110116-500ML
Этиловый спирт (чистый, 200 proof)Fisher Scientific# BP2818-500
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)Millipore Sigma# E9884-100G
EukittMillipore Sigma# 03989-100ML
Тонкие ножницыFine Science Tools# 14060-10
Флуоресцентный стереомикроскоп Leica M165 FCLeicaN/A
ГлицинМиллипор Sigma# 410225-250G
Щипцы GraefeFine Science Tools# 11052-10
Программное обеспечение Graphpad Prism 8Graphpad
ImageJ Программное обеспечениеImageJ
KimwipesFisher Scientific# 06666A
Раствор гематоксилина МайераMillipore Sigma# MHS16-500ML
Наконечник(и) для микропипеток - p200Fisher Scientific# 02707448
Программное обеспечениеMicrosoft ExcelMicrosoft
OCT CompoundVWR Scientific# 102094-106
Olympus CkX53Микроскоп Olympus
(не менее 2)
ПараформальдегидVWR Scientific# 0215014601Превратить в 4% раствор (растворенный в PBS)
Пипетка Пастера(ы)Fisher Scientific# 13-711-7M
Пенициллин-стрептомицинThermoFisher Scientific# 15140122
Фосфатный буферный раствор (PBS)ThermoFisher Scientific# 70011044Разбавьте от 10x до 1x перед использованием
ScaleMettler Toledo# MS1602TS
ScaleMettler Toledo# MS105
Ручка для скальпеля #3VWR Scientific# 10161-918
Лезвия скальпеляVWR Scientific# 21909-612
Квадратная формаVWR Scientific# 100500-224Для форм OCT
СахарозаMillipore Sigma# S9378-500G
Superfrost Plus SlidesFisher Scientific# 1255015
Хирургические ножницыFine Science Tools# 14002-14
Tissue-Tek Accu-Edge Одноразовые микротомные лезвияVWR Scientific# 25608-964
Дорожные весыAcculabVIC 5101
ксилолМиллипоры Sigma214736-1L
Кисти для рисования Olympus

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kathiresan, S., Srivastava, D. Genetics of human cardiovascular disease. Cell. 148 (6), 1242-1257 (2012).
  2. Sun, R., Liu, M., Lu, L., Zheng, Y., Zhang, P. Congenital Heart Disease: Causes, Diagnosis, Symptoms, and Treatments. Cell Biochemistry and Biophysics. 72

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Congenital Heart DefectsMouse EmbryosHistological MethodsTissue AnalysisHeart IsolationCryosectioningMuscle CompactionParaformaldehyde FixationImage AnalysisQuantitative Histomorphometry

Related Articles