내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

Margherita Zamboni; Giuseppe Santopolo; Jonas Frisén

doi:10.3791/61009

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방법 논문

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

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DOI:

10.3791/61009

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2020년 5월 7일

Margherita Zamboni¹ , Giuseppe Santopolo¹ , Jonas Frisén¹

¹Department of Cell and Molecular Biology, Karolinska Institute

이 논문에서

요약

우리는 두개골에 안정될 수 있는 끝에 바늘을 구부린, 따라서 근본적인 자렌치에 손상의 리스크를 제거하는 intracisternal 주입을 기술합니다. 이 접근법은 렙토메닝 세포의 유전적 운명 매핑 및 조작및 뇌척수액 이동 추적에 사용될 수 있습니다.

초록

여기에 설명된 프로토콜은 기본 자렌치마에 손상을 줄 위험을 제거하면서 시스터나 마그나를 통해 솔루션을 안전하고 수동으로 주입하는 방법을 설명합니다. 이전에 게시된 프로토콜은 경면에서 최대 1-2mm로 낮혀야 하는 직선 바늘을 사용하는 것이 좋습니다. 경막이 뚫리면 저항이 급격히 떨어지면 바늘을 일정한 위치에 유지하기가 어려워집니다. 우리의 방법은 대신, 두개골의 후두 뼈에 대해 안정화 될 수있는 끝에 바늘구부러진 바늘을 사용하여 주사기가 경막 의 천공 후 조직으로 침투하는 것을 방지합니다. 이 절차는 간단하고 재현 가능하며 수술 된 동물에게 오래 지속되는 불편 함을 일으키지 않습니다. 우리는 혈관 렙토메닝 세포의 유전 운명 매핑의 맥락에서 내분비증 주입 전략을 기술합니다. 동일한 기술은, 또한, 신경 발달에 있는 leptomeninges의 역할을 탐구하고 세균성 뇌막염의 퍼짐과 같은 광범위한 연구 질문을, 이러한 현상에 연루된 유전자의 유전 절제를 통해 이용될 수 있습니다. 또한, 절차는 일정한 납품을 위한 자동화된 주입 시스템과 결합되고 형광표지된 분자의 주입을 통해 뇌척수액 운동을 추적하는 데 이용될 수 있습니다.

서론

렙토메닝 세포는 뇌를 오버레이하고 콜라겐 가교(예를 들어, Dcn 및 Lum)에연루된 유전자를 표현하는 얇은 층으로 구성된 섬유아세포와 같은 세포 집단이며, 뇌-수막 장벽(예를 들어, Cldn11)^1,^,^2. 렙토메닝 세포는 뇌척수액^배수에 대한 엄격한 통제로부터 뇌의 발달 뇌에서 신경 전구체의 지도에 이르기까지 광범위한 생리 기능에 연루되어^4,^,^5. 최근 연구는 또한 신생아에 있는 leptomeninges 두뇌 자영으로 이동하고 기능적인 피질 신경으로 발전하는 방사형 glia 같이 세포를 항구할 수 있다는 것을 제안했습니다^6.

렙토메닝 세포는 표면 성상 세포에 근접하여 위치하며, 그들과 공유하며, 다른 실치형 천체, 코넥신-30(Cx30)의 발현도^7. 아래에 설명된 외과 적 절차는 Cx30⁺ 세포에서 tdTomato를 조건부로 발현하는 형질전환....