Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Планарный анализ подвижности для оценки биомодулирующих свойств натуральных продуктов

5.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/61070

⸱

30 мая 2020 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State University of New York (SUNY) at Morrisville

В этой статье

Краткое содержание

Планарная подвижность используется для оценки стимуляторов и свойств вывода натуральных продуктов по сравнению с движением животных только в родниковой воде.

Аннотация

Простое, управляемое средство использования неаразитарных planarian, Dugesia tigrina, свободно живущих водных плоских червей, для изучения стимуляторов и вывода свойства натуральных продуктов описывается. Экспериментальные анализы, пользующиеся уникальными аспектами планарной физиологии, были применены к исследованиям по заживлению ран, регенерации и опухолевому анализу. Кроме того, поскольку планарианцы проявляют чувствительность к различным экологическим стимулам и способны изучать и развивать условные реакции, они могут быть использованы в поведенческих исследованиях изучения обучения и памяти. Планарианцы обладают базовой двусторонней симметрией и центральной нервной системой, которая использует нейромедиаторные системы, податливые к исследованиям, исследуя эффекты нейромышечных биомодуляторов. Следовательно, были разработаны экспериментальные системы мониторинга планарного движения и подвижности для изучения наркомании и вывода средств. Поскольку планарная подвижность открывает потенциал для чувствительной, легко стандартизированной системы анализа подвижности для мониторинга влияния стимулов, тест planarian locomotor velocity (pLmV) был адаптирован для мониторинга как стимуляции, так и поведения вывода планарами путем определения количества линий сетки, пересекаемых животными со временем. Здесь демонстрируется и объясняется техника и ее применение.

Введение

В описанном протоколе используется планарная подвижность для оценки биомодулирующего воздействия природных веществ. Он был специально адаптирован, чтобы определить, если эти вещества функционируют как стимуляторы, и если они затем были связаны с измеримым поведениемвывода 1. Этот анализ, известный как планарный тест скорости локомотива (pLmV), был впервые использован для тестирования известных фармакологическихагентов 2,3. Применение этого планарного анализа на основе подвижности с тех пор выросло в популярности и было принято различными лабораториями, заинтересованными в веществах, кроменатуральных продуктов 4,,5. Для этого анализа, планарианец помещается в чашку Петри, содержащую родниковую воду или родниковую воду, содержащую растворенный биомодулятор. Поскольку само блюдо помещается на графовую бумагу, количество линий сетки, пересекаемых животным со временем, когда оно перемещается по контейнеру, может быть использовано для определения скорости движения в каждом состоянии. Свет / темный тест, в противном случае называют условным тестом предпочтения места (CPP), является еще одним изменением на тему мониторинга планарной подвижности, и оценивает, как быстро животные реагируют и мигрируют в затемненнуюсреду 6,7. Видео слежение за планарными движениями также может быть проанализировано с помощью компьютерных программ и центра массы (COM)слежения 8,,9,,10,,11.

Использование planarian в качестве модели животных для таких исследований предлагает ряд преимуществ по сравнению с другими животными в том, что экспериментатор может легко контролировать анализ окружающей среды. В частности, голодающие планарианцы перед экспериментами могут предотвратить их воздействие на другие питательные или фармакологические агенты, которые в противном случае могли бы запутать результаты, и конкретный биомодулятор, на который ведется расследование, может быть представлен планарианам, просто добавив его непосредственно в культурную воду, тем самым стандартизируя воздействие. Так как планарианцы имеют нервную систему и нейротрансмиттеров, которые напоминают "высшего порядка" животных, физиологии и экспериментальной реакции этих животных на нервно-мышечные стимулы считаются биологическиактуальными для других организмов 12,13,14,15,16. Кроме того, поскольку планарианцы относительно недороги и просты в обслуживании в лаборатории, они предлагают доступную биологическую модель для многих исследователей.

Как экспериментальное животное, планарианцы подходят для широкого спектра исследований. Например, наша группа, а также другие исследователи используют планариев для изучения опухолевых17,,18,,19. Планарианцы также демонстрируют множество ответных действий на химические, тепловые, гравитационные, электрические, фото- и магнитные стимулы, которые легли в основу других систем анализа. Некоторые из этих эффектов были использованы для изучения обучения ипамяти у этих животных 20,21,22,23,24,25,26,27. Основное использование планарной модели в литературе в настоящее время фокусируется на активности планарных плюрипотентных стволовых клеток, называемых необластами, иих роли в регенерации 28,,29,,30. Таким образом, принятие описанной здесь модели позволяет продолжить изучение с использованием других планарных анализов, чтобы обеспечить более широкое понимание того, как натуральные продукты и другие биомодуляторы влияют на организм.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Планарное мужство

  1. Используйте planarians закупленные от биологической компании поставкы или одичал-уловлено if needed. Планарианцы, используемые в этом протоколе Dugesia tigrina, как у перечислены в списке поставок. Этот вид также называют Girardia tigrina31. Другие водные planarian видов также приемлемы2,3.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Описанный протокол ориентирован на животных, приобретенных у биологической компании-снабжения. Эта система анализа не была протестирована с дикими поймали planarians. Однако, если дикие пойманные планарии используются, рекомендуется, чтобы они привыкли к воде, используемой в экспериментах, а также лабораторной среде, по крайней мере за 1 неделю до использования.
  2. По прибытии, передача planarians пластиковых контейнеров для хранения продуктов питания, содержащих чистую родниковую воду и держать крышки приоткрытой.
  3. Поддерживайте планариев в затемненной среде.
  4. Кормите недавно поставленных planarians после 24-36 ч в их новой среде.
  5. Разрешить планариам акклиматизироваться в лаборатории по крайней мере за 1 неделю до экспериментов.
  6. Кормите планировщиков по регулярному расписанию два раза в неделю.
    1. Разрешить planarians кормить ad libitum на нарезанные органические вареные яйца или смешанной органической печени говядины в течение 1-2 ч.
    2. Поместите кормили planarians в чистый контейнер после кормления.
      1. Удалите загрязненную воду с планариев.
      2. Используйте небольшую плоскую акварею кисть (номер 3-6) для передачи пищевого мусора и слизи, прилипающих к контейнеру со всего planarians на бумажное полотенце.
      3. С пресной родниковой водой и нежным закрученным или волнением, выбить planarians и залить их в чистый контейнер.
      4. Любые планарианцы, оставшиеся в контейнере, могут быть переданы с помощью круглой акварелиной кисти (номер 3-6) или передачи пипетки с широким отверстием.
      5. Декант трансферной воды.
      6. Обложка planarians с чистой родниковой водой.
      7. После 24 ч, удалить planarians из любых изгнанных пищевых отходов, передавая их в чистый контейнер, как описано выше (шаги 1.6.2.1-1.6.2.6).
  7. Для очистки контейнеров и посуды, используемых для планарного мужа, не используйте мыло или моющее средство. Очистите эти предметы, очистив их хорошо с чистой водой (водопроводная вода является приемлемым) и сушки их с чистой тканью или бумажным полотенцем.

2. Подготовка планариев к экспериментам

  1. Разрешить вновь доставлены planarians акклиматизироваться к окружающей среде по крайней мере за 1 неделю до экспериментов.
  2. Голодают планарианцы в течение 5-10 дней до экспериментов.
  3. Изменение культуры воды по крайней мере 1x в период голодания.

3. Планарная скорость локомотива (pLmV) тест: Стимулирующее поведение

  1. Перед экспериментами убедитесь, что голодающие планарианцы полностью сформированы, с полной и пигментированной головой и хвостом.
  2. Подготовка стекла или пластика 10 см Петри блюдо и контейнер для привыкания для теста pLmV до начала эксперимента.
    1. Поместите чистую чашку Петри диаметром 10 см, которая будет использоваться для теста pLmV на предварительной сетке бумаги (с 0,5 см квадратов).
    2. Добавьте 20 мл чистейщей родниковой воды для контроля, или родниковую воду, содержащую соответствующую концентрацию тестируемого природного продукта, к чашке Петри диаметром 10 см, которая будет использоваться для теста PLmV.
    3. Распоитите камеру (например, сотовый телефон или камеру высокого разрешения) над подготовленной чашкой Петри диаметром 10 см для записи планарной подвижности над сетчатой бумагой во время эксперимента. Кольцо стенд удобный способ распоить камеру на расстоянии, которое может записывать весь вид 10 см Петри блюдо и сетки линий.
    4. Подготовьте контейнер для привыкания с 5-10 мл чистейщей родниковой воды (контроля) или родниковой воды, содержащей соответствующую концентрацию тестированного природного продукта. Подходит контейнер, похожий на сцинтилляционный флакон или небольшую чашку Петри длиной 5 см.
  3. Используйте небольшую, чистую, плоскую или круглую акварельную кисть, чтобы аккуратно перенести планарную из контейнера с родниковой водой в контейнер для привыкания, содержащий 5-10 мл чистой родниковой воды или родниковой воды, содержащей натуральный продукт, который проходит испытания.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При манипулировании планарными для анализа pLmV используйте небольшую, чистую, плоскую или круглую акварельную кисть (номер 3-6). При перемещении планарных, кисть должна быть помещена под животное, чтобы поднять его осторожно. Чтобы планарианцы не пострадали при использовании кисти, щетина кисти не должна быть splayed под животным. Распространение из щетины может нанести вред планарианской, если он оказался между волокнами кисти.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Широкий родила передачи пипетки также могут быть использованы для передачи planarian в чистый и сухой контейнер для жилья.
    1. При использовании пипетки, удалить избыток воды переехал с planarian из контейнера привыкания с помощью передачи пипетки.
    2. Аккуратно добавьте раствор привыкания (т.е. родниковую воду для контроля или родниковую воду, содержащую концентрацию тестуемого природного продукта) в контейнер для привыкания, содержащий планар.
  4. Периоды привыкания будут зависеть от динамики стимуляции, оцениваемой для тестируют натуральный продукт. Время привыкания 2 мин оказалось приемлемым для обнаружения стимуляции в этой работе1.
  5. После 2 мин периода привыкания используйте акварельную кисть, чтобы аккуратно перенести планарную в центр подготовленной 10-сантиметровой чашки Петри для эксперимента по стимуляции pLmV.
  6. Запустите камеру, чтобы записать движение плана. Запись 10-11 мин видео.
  7. Подготовь контейнер для привыкания и 10-сантиметровую чашку Петри для эксперимента pLmV со свежими растворами для каждого плана.
  8. Используйте специальные пипетки, посуду, контейнеры и кисти для каждой экспериментальной концентрации натурального продукта, тестируются, чтобы избежать непреднамеренного подвергая planarians к неправильному решению во время экспериментов.
  9. Поскольку планарианцы проявляют изученное поведение, каждый планарианец (контроль или тест) должен использоваться толькоодин раз 21,22.

4. Планарная скорость локомотива (pLmV) тест: Поведение вывода

  1. Перед экспериментами убедитесь, что голодающие планарианцы полностью сформированы, с полной и пигментированной головой и хвостом.
  2. Подготовка 10 см Петри блюдо (стекло или пластик) для эксперимента pLmV, 5 см Петри блюдо (стекло или пластик) для полоскания planarian после привыкания, и привыкание контейнер до начала эксперимента.
    1. Поместите чистую чашку Петри диаметром 10 см, которая будет использоваться для эксперимента pLmV на преобладаемой сетке бумаги с 0,5 см квадратов).
    2. Добавьте 20 мл чистейной родниковой воды в чашку Петри диаметром 10 см, которая будет использоваться для эксперимента pLmV.
    3. Распоитите камеру над подготовленной чашкой Петри диаметром 10 см, как в шаге 3.2.3, чтобы зафиксировать планарную подвижность над сетчатой бумагой во время эксперимента.
    4. Подготовьте планарианский контейнер для полоскания, добавив только 5 мл родниковой воды в чашку Петри длиной 5 см.
    5. Подготовьте контейнер для привыкания с 5-10 мл чистейщей родниковой воды (контроля) или родниковой воды, содержащей натуральный продукт, который проходит испытания. Подходит контейнер, похожий на сцинтилляционный флакон или небольшую 5-сантиметровую чашку Петри (стеклянную или пластиковую).
  3. Используйте небольшую, чистую, плоскую или круглую акварельную кисть для переноса планарной из родниковой воды в подготовленный контейнер для привыкания, содержащий 5-10 мл чистейщей родниковой воды (контроля) или родниковой воды, содержащей натуральный продукт, который проходит испытания. Аккуратно переместите животное из контейнера для складов в контейнер для привыкания. Убедитесь, что планарий не поврежден кистью.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При манипулировании планарными для анализа pLmV используйте небольшую, чистую, плоскую или круглую акварельную кисть (номер 3-6). При перемещении планарных, кисть должна быть помещена под животное, чтобы поднять его осторожно. Чтобы планарианцы не пострадали при использовании кисти, щетина кисти не должна быть splayed под животным. Распространение из щетины может нанести вред планарианской, если он оказался между волокнами кисти.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Широкий родила передачи пипетки также могут быть использованы для передачи planarian в чистый и сухой контейнер привыкания.
    1. При использовании пипетки, избыток воды переехал с planarian должны быть удалены из контейнера привыкания с помощью передачи пипетки.
    2. Аккуратно добавьте раствор привыкания (т.е. чистую родниковую воду для контроля или родниковую воду, содержащую тестируется натуральный продукт) в контейнер для привыкания, содержащий планар.
  4. Периоды привыкания к изъятию будут зависеть от динамики стимуляции, оцениваемой для тестируются на натуральный продукт; 2-5 мин оказались достаточными.
  5. После периода привыкания используйте акварелию кисть, чтобы аккуратно перенести планарную в подготовленную 5-сантиметровую чашку Петри, содержащую родниковую воду, чтобы смыть любой натуральный продукт из контейнера для привыкания. Убедитесь, что планарий не поврежден кистью.
  6. Немедленно перенесите планар в центр подготовленной 10-сантиметровой чашки Петри, содержащей родниковую воду для эксперимента по выводу PLmV. Убедитесь, что планарий не поврежден кистью.
  7. Запустите камеру, чтобы записать движение плана. Запись 10-11 мин видео.
  8. Подготовьте контейнер для привыкания, контейнер для полоскания и 10-сантиметровую чашку Петри для эксперимента pLmV со свежими растворами для каждого плана.
  9. Используйте специальные пипетки, посуду, контейнеры и кисти для каждой экспериментальной концентрации натурального продукта, тестируются, чтобы избежать непреднамеренного подвергая planarians к неправильному решению во время экспериментов.
  10. Потому что planarians exhibit выученное поведение, используйте каждое planarian (контроль или испытание)только раз 26,27.

5. Анализ данных

  1. Подготовь таблицу сбора данных для документирования поведения и подвижности планариев по мере пересечения количества линий сетки за каждую минуту во время запуска pLmV. Таблица должна позволить задокументировать также накопленное количество строк в минуту, пересекаемое планарианом. Включите строки для заметок и таблицу определений, чтобы подсчитать наблюдение за поведением в течение экспериментального периода, такие как «блуждание» и «остановка» (см. Обсуждение).
  2. Используя видео, подсчитайте количество полных линий сетки, пересекаемых planarian в минуту в течение 10 минут, и замечите это число в таблице данных. Типичное планарное поведение состоит из непрерывной скорости, направленного вперед, горизонтального движения, с периодическими поворотами и без остановок.
    1. Начните приукрашивать эксперимент в тот момент, когда планарианка отошла от кисти, используемой для передачи ее в 10-сантиметровую чашку Петри. Завехай это время старта.
    2. Чтобы определить, когда животное пересекает полный квадрат сетки, сосредоточьтесь на голове и оценка одной линии, когда голова полностью пересекает квадрат.
    3. Чтобы выбить полную сетку, когда червь перемещается по краю блюда, визуализировать расстояние 0,5 см, ссылаясь на линии, как они простираются от края блюда. Если планарианец пересекает угол коробки, обратитесь ко второй линии пересекли забить одну линию сетки. Опять же, сосредоточиться на голове, чтобы сделать эти определения.
    4. Остановите видео после каждой минуты, чтобы записать данные.
    5. При перезапуске видео, чтобы подсчитать в следующую минуту, если голова червя была между линиями сетки, когда видео было остановлено, заведать первую строку перешли как полный ящик.
    6. Оценка количество линий сетки пересекли в течение 10 минут.
  3. Если животное перестает двигаться во время теста pLmV и больше не пересекает линии сетки в течение 10 минут времени записи, документируйте поведение планарианского в поведенческой диаграмме (например, 'wander' или 'stop'). Вместо этого следует принимать к сведению животных, которые прекращают свою перемотку вперед во время анализа PLmV, и данные, представленные в качестве частоты общего числа животных, подвергшихся воздействию этой концентрации реагентов. Спиральное или судорожное поведение (известное как поведение C), предотвращая любое движение вперед в период привыкания, указывает на то, что концентрация натурального продукта не подходит для использования в анализе pLmV, потому что анализ pLmV основан на подвижности. Поведение C-типа может быть проанализировано с помощью другого типа анализа (см. Обсуждение).
  4. Если возможно, проверьте несколько экспериментальных концентраций природного продукта с использованием по крайней мере 9-12 червей в разные дни и разное время суток, если определить общее влияние реагента на планарную физиологию. Однако, если исследователи стремятся уменьшить циркадную ритм-индуцированной изменчивости, эксперименты могут быть проведены с постоянным освещением в установленное время суток с использованием червей, которые культурируются с приутупляется свет / темные циклы и установить время кормления. Иметь по крайней мере двух экспериментаторов, участвующих в проекте, чтобы позволить возможность иметь один отдельный данный записи, в то время как второй человек подсчитывает линии сетки "слепой" к условиям, используемым для сбора данных. Участие различных лиц в сборе данных, а также статистических расчетах и анализе также уменьшает возможную предвзятость.
  5. Рассчитайте линию сетки для каждого естественного продукта концентрации на каждый день по отношению к контрольу рассчитывает на каждую минуту, так что данные из разных дней, времени и экспериментаторов могут быть объединены. Эти данные можно усредить, а затем проанализировать с помощью T-тестов студента. P-значения для каждого теста могут быть оценены в минуту по сравнению с контролем и между концентрациями реагентов. Оценки ANOVA с использованием наборов данных, полученных на основе различных экспериментальных концентраций, являются еще одним методом анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Лаборатория, созданная и подготовка рабочего пространства для проведения анализа pLmV, должна быть завершена до начала экспериментов. Это включает в себя подготовку контейнера для привыкания, промыть контейнер, если это необходимо (для вывода экспериментов), Петри блюдо над ламинированной сетки бумаги, и правильно размещены камеры (Рисунок 1). После того, как все видео приняты, желательно использовать общий лист данных для стандартизации сбора данных и представления между следователями

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Простой и доступный планарный анализ подвижности описывается для определения стимулирующих и абстиненции эффектов натуральных продуктов. В качестве поведенческой модели необходимо иметь строгие протоколы для скоринга движения и четкие определения любого поведения для стандартизации наблюдений между различными экспериментаторами. Представленные идеи дают представление о том, как этого можно достичь. Каждая лаборатория, используя этот протокол, должна адаптировать представленную информацию в соответствии с эффектами конкре...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторов нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы хотели бы отметить, офис институционального развития, и Моррисвилл колледж Фонда для публикации гранта для поддержки этой работы, а также SUNY Моррисвилл коллегиальной научно-технической программы входа (CSTEP) за их постоянную помощь и поддержку студентов исследований в SUNY Morrisville. Мы также хотели бы поблагодарить Софию Хатченс за полезные комментарии по описанной технике.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Бутилированная вода - 1 галл.Poland SpringN/AРодниковая вода для выращивания планарий и для приготовления растворов
Brown Planaria (Dugesia tigrina)Carolina Biological Supply Company132954Brown planaria living (другие виды приемлемы)
Flat PaintbrushCrafter's Choice9159Плоские акварельные кисти для чистки емкостей для планарийных культур
Стеклянная чашка Петри - 10 смKimaxН/ДДиаметр 10 см (стекло) Чашки Петри для анализа pLmV
Стеклянная чашка Петри - 5 смKimaxN/A5 см и чашки Петри для промывки планарий во время экспериментов по отмене и для привыкания стимуляторов
Сетчатая бумагаAnyN/AСтандартная сетка 0,5 см для анализа pLmV
iPEVO Visualizer (программное обеспечение)iPEVOhttps://www.ipevo.com/software/visualizerПрограммное обеспечение для документ-камеры для видеосъемки и записи
Набор металлоконструкций с опорной подставкой и ретортным кольцомЛюбойН/ДСтандартная химическая лабораторная подставка для удержания камеры мобильного телефона, если она используется
Органическое яйцоЛюбоеН/ДОрганическое яйцо или говяжья печень для кормления планаринов
Поликарбонатная бутылка с завинчивающейся крышкой - 10 млBeckman Н/ДПластиковые флаконы для емкости от 5 до 10 мл для привыкания стимуляторов
Круглый контейнер для хранения - 10 смZiplocN/A10 см Круглые контейнеры для хранения продуктов примерно для 90 планарий или менее
Круглая кисть для водяной краскиLOEW-CornellN/AМаленькие круглые акварельные кисти для рисования (номера от 3 до 6) - мягкая
Переводная пипеткаЛюбая Н/ДПластиковые трансферные пипетки с широким отверстием (5 мл) для перемещения планарий
Документ-камераiPEVOCDVU-06IPДокумент-камера (или другая камера или камера мобильного телефона)
Royal USB

Ссылки

  1. Moustakas, D. Guarana provides additional stimulation over caffeine alone in the planarian model. PloS One. 10 (4), 0123310(2015).
  2. Raffa, R. B., Valdez, J. M. Cocaine withdrawal in Planaria. European Journal of Pharmacology. 430 (1), 143-145 (2001).
  3. Raffa, R. B., Holland, L. J., Schulingkamp, R. J. Quantitative assessment of dopamine D2 antagonist activity using invertebrate (Planaria) locomotion as a functional endpoint. Journal of Pharmacology and Toxicological Methods. 45 (3), 223-226 (2001).
  4. Thumé, I. S., Frizzo, M. E. Sertraline induces toxicity and behavioral alternations in planarians. Biomedical Research International. 2017, 5792621(2017).
  5. Aggarwal, S., et al. Identification of a novel allosteric modulator of the human dopamine transporter. ACS Chemical Neuroscience. 10 (8), 3718-3730 (2019).
  6. Zhang, C., Tallarida, C. S., Raffa, R. B., Rawls, S. M. Sucrose produces withdrawal and dompamine-sensitive reinforcing effects in planarians. Physiology & Behavior. 0, 8-13 (2013).
  7. Zewde, A. M., et al. PLDT (planarian light/dark test): an invertebrate assay to quantify defensive responding and study anxiety-like effects. Journal of Neuroscience Methods. 293, 284-288 (2018).
  8. Risse, B., Otto, N., Berh, D., Jiang, X., Klämbt, C. FIM Imaging and FIMtrack: two new tools allowing high-throughput and cost effective locomotion analysis. Journal of Visualized Experiments. (94), e52207(2014).
  9. Inoue, T., Hoshino, H., Yamashita, T., Shimoyama, S., Agata, K. Planarian shows decision-making behavior in response to multiple stimuli by integrative brain function. Zoological Letters. 1, 7(2015).
  10. Hastrom, D., Cochet-Escartin, O., Zhang, S., Khuu, C., Collins, E. M. S. Freshwater planarians as an alternative animal model for neurotoxicology. Toxicological Sciences. 147 (1), 270-285 (2015).
  11. Risse, B., Berh, D., Otto, N., Klämbt, C., Jiang, X. FIMtrack: an open source tracking and locomotion analysis software for small animals. PLoS One Computational Biology. 13 (5), 100553(2017).
  12. Pagán, O. R. Planaria: an animal model that integrates development, regeneration and pharmacology. International Journal of Developmental Biology. 61, 519-529 (2017).
  13. Palladini, G. A pharmacological study of cocaine activity in planaria. Comparative Biochemistry and Physiology. 115 (1), 41-45 (1996).
  14. Buttarelli, F. R., Pellicano, C., Pontieri, F. E. Neuropharmacology and behavior in planarians: translation to mammals. Comparative Biochemistry and Physiology Part C. Toxicology & Pharmacology. 147 (4), 399-408 (2008).
  15. Nishimura, K., et al. Identification of glutamic acid decarboxylase gene and distribution of GABAergeric nervous system in the planarian Dugesia japonica. Neuroscience. 153 (4), 1103-1114 (2008).
  16. Raffa, R. B., Rawls, S. M. A model for drug action and abuse. , Landes Bioscience. Austin, TX. (2008).
  17. Hall, F., Morita, M., Best, J. B. neoplastic transformation in the planarian: I cocarcinogenesis and histopathology. The Journal of Experimental Zoology. 240 (2), 211-227 (1986).
  18. Voura, E. B., et al. Planarians as models of cadmium-induced neoplasia provide measurable benchmarks for mechanistic studies. Ecotoxicology and Environmental Safety. 142, 544-554 (2017).
  19. Van Roten, A., et al. A carcinogenic trigger to study the function of tumor suppressor genes in Schmedtea mediterranea. Disease Models and Mechanisms. 11 (9), 032573(2018).
  20. Mason, P. R. Chemo-klino-kinesis in planarian food location. Animal Behaviour. 23 (2), 460-469 (1975).
  21. Van Huizen, A. V., et al. Weak magnetic fields alter stem cell-mediated growth. Science Advances. 5 (1), 7201(2019).
  22. Brown, H. M., Ogden, T. E. The electrical response of the planarian ocellus. Journal of General Physiology. 51 (2), 255-260 (1968).
  23. Inoue, T., Yamashita, T., Agata, K. Thermosensory signaling by TRPM is processed by brain serotonergic neurons to produce planarian thermotaxis. The Journal of Neuroscience. 34 (47), 15701-15714 (2014).
  24. Byrne, T. Effects of ethanol on negative phototaxis and motility in brown planarians (Dugesia tigrina). Neuroscience Letters. 685, 102-108 (2018).
  25. de Sousa, N., et al. Transcriptomic analysis of planarians under simulated microgravity or 8g demonstrates that alteration of gravity induces genomic and cellular alterations that could facilitate tumoral transformation. International Journal of Molecular Sciences. 20 (3), 720(2019).
  26. Best, J. B., Rubinstein, I. Maze learning and associated behavior in planaria. Journal of Comparative and Physiological Psychology. 55, 560-566 (1962).
  27. Shomrat, T., Levin, M. An automated training paradigm reveals long-term memory in planarians and its persistence through head regeneration. The Journal Experimental Biology. 216, Pt 20 3799-3810 (2013).
  28. Robarts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. On the organ trail: insights into organ regeneration in the planarian. Current Opinion in Genetics & Development. 32, 37-46 (2015).
  29. Ivancovic, M., et al. Model systems for regeneration: planarians. Development. 146 (17), 167684(2019).
  30. Herath, S., Lobo, D. Cross-inhibition of Turing patterns explains the self-organized regulatory mechanism of planarian fission. Journal of Theoretical Biology. 485, 110042(2019).
  31. Animal Diversity. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Dugesia_tigrina/ (2019).
  32. Itoh, M. T., Shinozawa, T., Sumi, Y. Circadian rhythms of melatonin-synthesizing enzyme activities and melatonin levels in planarians. Brain Research. 830 (1), 165-173 (1999).
  33. Itoh, M. T., Igarashi, J. Circadian rhythm of serotonin levels in planarians. Neuroreports. 11 (3), 473-476 (2000).
  34. Hinrichsen, R. D., et al. Photosensitivity and motility in planarian Schmedtea mediterranea vary diurnally. Chronobiology International. 36 (12), 1789-1793 (2019).
  35. Raffa, R. B., Desai, P. Description and quantification of cocaine withdrawal signs in planaria. Brain Research. 1032 (1-2), 200-202 (2005).
  36. Pagán, O. R., et al. A cembranoid from tobacco prevents the expression of induced withdrawal behavior in planarian worms. European Journal of Pharmacology. 615 (1-3), 118-124 (2009).
  37. Rawls, S. M., Patil, T., Yuvasheva, E., Raffa, R. B. First evidence that drugs of abuse produce behavioral sensitization and cross-sensitization in planarians. Behavioural Pharmacology. 21 (4), 301-313 (2010).
  38. Venturini, G., et al. A pharmacological study of dopaminergic receptors in planaria. Neuropharmacology. 28 (12), 1377-1382 (1989).
  39. Ouyang, K., et al. Behavioral effects of Spenda, Equal and sucrose: Clues from planarians on sweeteners. Neuroscience Letters. 636, 213-217 (2017).
  40. Pagán, O. R., Montgomery, E., Deats, S., Bach, D., Baker, D. Evidence of nicotine-induced, curare-sensitive, behavior in planarians. Neurochemical Research. 40 (10), 2087-2090 (2015).
  41. Shibata, N., Agata, K. RNA interference in planarians: feeding and injection of synthetic dsRNA. Methods in Molecular Biology. 1774, 455-466 (2018).
  42. Pagán, O. R., et al. Reversal of cocaine-induced planarian behavior by parthenolide and related sesquiterpene lactones. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 89 (2), 160-170 (2008).
  43. Vouga, A., et al. Stereochemistry and neuropharmacology of a 'bath salt' cathinone: S-enantiomer of mephedrone reduces cocaine-induced reward and withdrawal in invertebrates. Neuropharmacology. 91, 109-116 (2015).
  44. Chan, J. D., Marchant, J. S. Pharmacological and functional genetic assays to manipulate regeneration of the planarian Dugesia japonica. Journal of Visualized Experiments. (54), e3058(2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Тест локомоторной активности планарийтестирование натуральных продуктовDugesia tigrinaповеденческие исследованияанализ линий сеткиэффекты отмены стимуляторовнейромышечные биомодуляторыкультура планарийконтрольная группа на родниковой воде
Планарный анализ подвижности для оценки биомодулирующих свойств натуральных продуктов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.