Этот протокол описывает методы, используемые для подготовки голосовых складок крыс к гистохимическому нервно-мышечному исследованию.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Подготовка голосовой складки крысы к нервно-мышечному анализу
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Целью этого урока является описание подготовки голосовой складки крысы к гистохимическому нервно-мышечному исследованию. В этом протоколе описываются процедуры рассечения гортани крыс, мгновенного замораживания и криосекции голосовых складок. В этом исследовании описывается, как проводить криосекцию голосовых складок как в продольной, так и в поперечной плоскостях. Новинкой этого протокола является отслеживание гортани во время криосекции, что обеспечивает точную идентификацию внутренних мышц гортани и снижает вероятность потери тканей. Рисунки демонстрируют прогрессивную криосечение в обеих плоскостях. Двадцать девять крысиных геми-ларингов были криосекциированы и отслежены от появления щитовидного хряща до появления первой секции, которая включала полную голосовую складку. Полная голосовая складка была визуализирована для всех животных в обоих плоскостях. Отмечалась высокая вариабельность расстояния от появления щитовидного хряща до появления полной голосовой складки в обеих плоскостях. Вес не коррелировал с глубиной гортанных ориентиров, предполагая, что индивидуальная изменчивость и другие факторы, связанные с подготовкой тканей, могут быть ответственны за высокую изменчивость внешнего вида ориентиров во время секционирования. Это исследование детализирует методологию и представляет морфологические данные для подготовки голосовой складки крысы к гистохимическому нервно-мышечному исследованию. Из-за высокой индивидуальной вариабельности ориентиры гортани должны тщательно отслеживаться во время криосекции, чтобы предотвратить пересечение ткани и потерю тканей. Использование последовательной методологии, включая адекватную подготовку тканей и осведомленность о ориентирах в гортани крысы, поможет получить последовательные результаты во всех исследованиях и поможет новым исследователям, заинтересованным в использовании голосовой складки крысы в качестве модели для изучения нервно-мышечных механизмов гортани.
Введение
Крысиная гортань является хорошо зарекомендовавшей себя моделью для исследования структурных и функциональных нервно-мышечных адаптаций гортани к развитию, старению, болезням и фармакологическим агентам1,2,3,4,5. Согласованность гистологических методов имеет решающее значение для этого направления работы, поскольку существует множество тонкостей, связанных с подготовкой и анализом мышц, а также проблемы, связанные с размером гортани, формой и топографией мышц, инкапсулированных в гортанных хрящах1,6,7,8,9,1....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Это исследование было проведено в соответствии с Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Медицинской школы Нью-Йоркского университета.
1. Рассечение гортани крысы
- Усыпляйте крыс в соответствии с институционально утвержденным протоколом. Сбрить вентральную шейку от нижней челюсти до манубриума и тампона спиртом, чтобы предотвратить загрязнение меха в образцах тканей.
- Под рассекающим прицелом с 10-кратным увеличением иссейте всю гортань, создав разрез шеи средней линии скальпелем до тех пор, пока трахея не обнажится.
- Отделите вентральные наружные гортанные мышцы по средней линии, что....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Репрезентативные результаты были частью продолжающегося исследования влияния вокальных упражнений на нервно-мышечную систему гортани. Двадцать девять самцов крыс Fischer 344/brown Norway (12 9-месячных, 17 24-месячных) были взвешены и усыплены с вдыханием CO2 с последующей двусторонней торакотомией.
Процедуры следовали описанному протоколу для маркировки NMJ и размера волокон боковых и медиальных мышц TA. Расстояние между гортанными ориентирами отслеживалось как в продольной, так и .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Подготовка голосовых складок крыс к нервно-мышечному анализу может столкнуться с различными проблемами. Мало того, что гортанные мышцы малы и окружены хрящом, что затрудняет непосредственное извлечение мышц-мишеней, высокая изменчивость также была обнаружена между животными в глубине анатомических ориентиров гортани. Для протокола плоскости поперечного сечения мышц после первоначального появления вентрального тиреоидного хряща появились полные участки голосовой складки между 21−85 участками (10 мкм на сечение), что неско.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Это исследование было поддержано грантами F31DC017053-01A1 (Lenell, PI) и K23DC014517 (Johnson, PI) от Национального института глухоты и других коммуникативных расстройств Национальных институтов здравоохранения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 2-Метилбутан Сертифицированный | Fisher Chemical | 35514 | |
| Алюминиевая фольга | Fisherbrand | 1213101 | |
| Криощипцы SS | Thermo Scientific | 11679123 | |
| Криостат | Leica Biosystems | CM3050 | |
| Лезвия для криостата | C.L. Sturkey D554X50 | 22-210-045 | |
| Одноразовые формы основания 15мм x 15 мм | Thermo Scientific | 41-741 | |
| Одноразовые пеленки | Medline | 23-666-062 | |
| Набор для препарирования | Thermo Scientific | 9996969 | |
| DPBS - Dulbecco's Фосфатно-солевой буферный раствор | Gibco | 14190136 | |
| замороженной секции Medium | Fisher Healthcare | 23-730-571 | |
| Ведро для льда | Bel-Art | ||
| Увлажняющая камера с иммуноокрашиванием | Ted Pella Inc | NC9425474 | |
| иглодержатели | Assi | ASSI. B148 | |
| Губки нетканые, 4 слоя | Quick Medical | 9023 | |
| Орбитальный шейкер | Troemner | 02-217-987 | |
| Пап-ручка | |||
| Параформальдегид, 16% по мас., не содержит метанола | Alfa Aesar | 50-00-0 | |
| Микроцентрифужные пробирки премиум-класса | Fisherbrand | 5408129 | |
| хранения образцов Сумки | Fisherbrand | 19240093 | |
| Нержавеющая сталь Градуированная мера 32 унции/100 мл | Полярная посуда | 114231B | |
| Superfrost Plus Предметные стекла для микроскопа | Fisherbrand | 12-550-15 | |
| Стеклоочиститель | задач Kimberly-Clark Professional™ 34155 | 06666A | |
| Таймер | Fisherbrand | 2261840 | |
| шаблон ваннас Ножницы | Assi | ASSI. | |
| ПРИМЕЧАНИЕ: Для всех расходных материалов это примеры оборудования для покупки. Точная модель не является обязательной для завершения наших методов. |
Ссылки
- Connor, N. P., Suzuki, T., Lee, K., Sewall, G. K., Heisey, D. M. Neuromuscular junction changes in aged rat thyroarytenoid muscle. Annals of Otology, Rhinology and Laryngology. 111 (7), Pt 1 579-586 (2002).
- Suzuki, T., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
