A amputação de membros inferiores pode ocorrer mesmo após a angioplastia de vasos obstruídos em Isquemia de Membros Críticos (CLI). Células Progenitoras Mononucleares (MPCs) refletem o reparo vascular. O presente protocolo descreve a quantificação de CMS de circulação próxima à angioplastia, e sua relação com disfunção endotelial e previsão de amputação de membros inferiores.
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Artigo de método
Prever amputação usando células progenitoras mononucleares circulantes locais em pacientes tratados com angioplastia com isquemia de membros críticos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Isquemia de membros críticos (CLI) representa um estágio avançado da doença arterial periférica. A angioplastia melhora o fluxo sanguíneo para o membro inferior; no entanto, alguns pacientes irreversivelmente progredir para amputação de membros. A extensão dos danos vasculares e os mecanismos de reparação vascular são fatores que afetam o desfecho pós-angioplastia. As Células Progenitoras Mononucleares (MPCs) são reativas a danos vasculares e reparos, com a capacidade de refletir doenças vasculares. O presente protocolo descreve a quantificação de CMS obtidos a partir da circulação sanguínea de um vaso próximo ao local da angioplastia, bem como sua relação com a disfunção endotelial e sua capacidade preditiva para amputação de membros nos próximos 30 dias após a angioplastia em pacientes com CLI.
Introdução
A Doença Arterial Periférica (PAD) é caracterizada por obstrução vascular crônica e progressiva com limitação do fornecimento de sangue1. Em escala global, o PAD dos membros inferiores afeta cerca de 10% da população idosa, enquanto até 7% desses casos são submetidos à amputação de membros2,3.
Isquemia de Membros Críticos (CLI) representa a apresentação mais séria do PAD1. Os pacientes geralmente sentem dor em repouso, úlceras ou gangrena atribuíveis a artérias ocluídas; enquanto o prognóstico clínico é desfavorável e marcado por um ri....
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Protocolo
O comitê de ética em pesquisa institucional do Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" issste aprovou este protocolo prospectivo, todos os pacientes inscritos forneceram consentimento por escrito informado.
1. Avaliação de bloco vascular de membro inferior, amostragem de sangue e angioplastia de balão
NOTA: A amostra utilizada para este experimento foi composta por 20 pacientes diabéticos, com idade entre 68 anos e 10 em 20 homens. Metade da amostra era de fumantes e as co-morbidades mais prevalentes eram diabetes mellitus tipo 2, hipertensão arterial sistêmica e/ou dislipidemia. A amostra destinava-se a ser padro....
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Resultados
Amostras de sangue de artérias bloqueadas, no local abordado para angioplastia, foram coletadas de 20 pacientes diabéticos, com idade entre 68 anos e 10 em 20 homens. Metade da população amostral era fumante. As lesões vasculares foram pontuadas principalmente como Rutherford classe VI; enquanto os pacientes apresentaram maior prevalência de Diabetes Mellitus tipo 2 (100%), hipertensão (70%) e dislipidemia (55%).
Um acompanhamento clínico de 30 dias após a angioplastia dos membros inferiores f.......
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Discussão
A coleta de sangue no local exato do bloco vascular pode apresentar dificuldades técnicas; por isso, realizamos coleta de sangue nas proximidades do bloco vascular. Da mesma forma, a quantidade de MPCs próximos à placa vascular parece ser altamente dinâmica e pode originar variações antes e depois da angioplastia. De acordo com nossas observações, recomenda-se avaliar as alterações de linha de base e 30min pós-angioplastia no número de MPCs, uma vez que podem refletir diversos processos fisiofisiológicos que ocorrem dent.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores agradecem o apoio do Programa Institucional E015 pelo projeto ID 356.2015.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| A BSA | Roche | 10735086001 | a albumina de soro bovino (BSA) como agente tampão, estabilizador, padrão e para mistura. |
| Grânulos de calibração | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | Os grânulos de calibração MACQuant são fornecidos em solução aquosa contendo 0,05% de azida sódica. 3,5 ml para até 100 testes |
| CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Anticorpo conjugado à R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA |
| CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, IgG1 humano recombinante de isotipo, CD309 conjugado |
| (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Anticorpo conjugado a R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA |
| CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | O clone de anticorpo monoclonal AC136 detecta um epítopo de classe III do CD34 |
| CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Anticorpo CD45 monoclonal, |
| tubos cônicos | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | Tubos de centrífuga cônicos de 15ml |
| Tubos de citometria | FALCON Corning Marca | #352052 | Tubo de fundo redondo de poliestireno de 5 mL. Estilo 12x75. Estéril. |
| EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Metais pesados, (como Pb) < 10ppm, Fe< 0,01%, As< 1ppm, Insolúveis< 0,005% |
| Neubauer melhorado | Sem marca | Sem número de catálogo | Hemocitômetro para contagem de células. (faixa 0,1000 mm, 0,0025 mm2) |
| Tubos de coleta de sangue K2 EDTA | BD Vacutainer | #367863 | Tubo vacutainer de plástico lilás (K2E) 10,8mg, 6 mL. |
| Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Estéril e verificado quanto à presença de endotoxinas. Densidade: 1.077± 0,001g/mL |
| Paraformaldeído | SIGMA-ALDRICH | Fixação de amostras biológicas, (pó, 95%)Transferência de | |
| pipeta 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | A pipeta de transferência é uma ferramenta que facilita a transferência de líquidos com maior precisão. |
| Tubos de ensaio | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Tubos de ensaio resistentes ao calor. TAMANHO/TAMPA 13 x 100 mm |
Referências
- Serrano-Hernando, F. J., Martín-Conejero, A. Peripheral artery disease: Pathophysiology, diagnosis and treatment. Revista Española de Cardiología. 60 (9), 969-982 (2007).
- Agarwal, S., et al. Burden of re-admis....
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Reimpressões e permissões
