فيبرين هو المسؤول عن تشكيل جلطة خلال الهباس والجلطات. يمكن استخدام المقايسات العكرة والجلطات (TEG) كأدوات تآزرية توفر تقييمًا تكميليًا للجلطة. يمكن لهذه التقنيات اثنين معا إعطاء مزيد من البصيرة في كيفية تأثير ظروف التخثر تشكيل جلطة الفيبرين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الاستفادة من التعكر والتصوير التخثري لتوصيف الجلطات التكميلية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الجلطة هو السبب الرئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم. فيبرين (ogen) هو البروتين المسؤول في المقام الأول عن تشكيل الجلطة أو تجلط الدم. ولذلك، وصف تشكيل جلطة الفيبرين مفيد لدراسة تجلط الدم. يتم استخدام العكرة والجلطات (TEG) على نطاق واسع في المختبرات لرصد تشكيل الجلطة. التعكر يقيس بشكل حيوي الإرسال الضوء من خلال هيكل جلطة الليفين عن طريق مطياف وغالبا ما تستخدم في مختبرات البحوث. TEG هي تقنية اللزجة المتخصصة التي تقيس قوة تجلط الدم مباشرة وتستخدم في المقام الأول في البيئات السريرية لتقييم الهزى المرضى. مع مساعدة من هاتين الادوات, هذه الدراسة يصف طريقة لتميز جلطة في المختبر في المختبر باستخدام نموذج مبسطة الجلطات الفيبرينوجين / ثرومبين. وقد تمت مقارنة اتجاهات البيانات عبر كلتا التقنيتين في ظل ظروف تخثر مختلفة. تشكلت جلطات الفينة البشرية والبفينة جنبًا إلى جنب في هذه الدراسة حيث تستخدم عوامل تخثر البقر غالبًا كبدائل لعوامل التخثر البشرية في البيئات السريرية والبحثية. تظهر النتائج أن TEG والعكارة تتبع تشكيل جلطة عبر طريقتين متميزتين وعندما تستخدم معا توفير قوة جلطة تكميلية والألياف المعلومات الهيكلية عبر ظروف تخثر متنوعة.
المقدمة
تجلط الدم هو التكوين المرضي لجلطات الدم في الجسم التي تمنع الدورة الدموية مما يؤدي إلى ارتفاع معدلات المراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم. هناك 1 إلى 2 حالات من الجلطات الدموية الوريدية و 2 إلى 3 حالات من أمراض الأوعية الدموية الناجمة عن الجلطات لكل 1000 شخص سنويا1،2. هنا هو طريقة الاستفادة من الجلطات (TEG) والعكر لرصد تشكيل جلطة تحت ظروف تخثر مختلفة. فيبرين (ogen) هو البروتين الأساسي المسؤول عن تشكيل الجلطة في الجسم. في الخطوات النهائية من تتالي التخثر ، يتم شقوق الفيبرينوبيتيدات من الفيبرينوجين عن طريق ثرومبين بدء البلمرة من مونومرات الفيبرين غير قابلة للذوبان كما تطور الجلطة3،<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الفوسفات المالحة العازلة (PBS)
ملاحظة: تم استخدام برنامج تلفزيوني طوال هذه الدراسة حيث أن الأقوال الموصوفة لا تتطلب إضافة الكالسيوم. من المهم أن نلاحظ أنه عند إضافة الكالسيوم، وغالبا ما تستخدم لإعادة الكالسية منتجات الدم سيتrated، وينبغي تجنب برنامج تلفزيوني كما هو معروف الكالسيوم للترسب في مخازن الفوسفات.
- جعل 0.01 م، درجة الH 7.4 PBS العازلة عن طريق خلط 137 mM كلوريد الصوديوم، 1.8 mm فوسفات البوتاسيوم أحادية الباب، 10 mM فوسفات الصوديوم ديباسيتش و 2.7 mM كلوريد البوتاسيوم في المياه DI.
- تحقق من درجة الحموضة العازلة باستخدام مسبار درجة الحموضة وضبط درجة الحموضة باستخدام هيدروكسيد الصوديوم أو حمض الهيدروكلوريك حسب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التجارب الموضحة في الشكل 1 هي منحنيات تتبع التعكر التمثيلية لجلطات الـ فيبرين الإنسان والسفينية على مستويات مختلفة من الفيبرينوجين. تظهر منحنيات التتبع التمثيلي TEG لتشكيل جلطة الفيبرين على مستويات مختلفة من الفيبرينوجين في الشكل 2. كل من منحنيات التتبع تثبت أنه بعد فترة تأخر بعد بدء الجلطة، تجلط أو زيادة سعة الجلطة مع مرور الوقت ومستويات قبالة في نهاية تشكيل جلطة. يتم استخدام قيمة نقطة النهاية لتكوين الجلطة الأقصى والوقت الذي يتم فيه تكوين الجلطة الأقصى من كل م.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يوضح هذا البروتوكول استخدام أداتين توصيفي جلطات مميزة اختبار نموذج مبسط لتخثر الفيبرينوجين/الجلطات باستخدام المكونات المتاحة تجارياً. كل من TEG وتكدر من السهل إجراء. أنها لا توفر فقط فحص نقطة النهاية جلطة مثل تشكيل الحد الأقصى جلطة (ماكسTurb و TEGماكس)وأوقات تشكيل جلطة(وقت Turb والوقتTEG)ولكن أيضا تقييم عملية تشكيل جلطة ديناميكية. وهذا يجعل TEG والعكارة أدوات قيمة لتوصيف جلطة لإضافة إلى طرق بديلة مثل: SEM، PT، aPTT، أو جلطة الريولوجيا، والتي يمكن أن يكون إجراءات تجريبية معقدة أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 96-Well Clear Clear Flat Bottom UV-Transparent | Microplate Corning | 3635 | كوبوليمر أكريليك غير معالج ، |
| ألبومين غير معقم من مصل الدم البشري | Millipore Sigma | A1653 | & ge ؛ 96٪ ، مسحوق مجفف بالتجميد |
| Arium Mini Plus نظام المياه عالي النقاء | Sartorius | NA | DI مصدر المياه |
| الألبومين الأبقار في مصل الألبومين | Millipore Sigma | A2153 | & ge ؛ 96٪ ، أكواب ودبابيس مسحوق مجفف |
| بالتجميد ل TEG 5000 (واضح) | Haemonetics | REF 6211 | |
| Fibrinogen ، يحتوي 341573 على | أكثر من 95٪ بروتين قابل للتخثر | ||
| فيبرينوجين ، مستنفد البلازمينجين ، البلازما البشرية | Millipore Sigma | 341578 | يحتوي على 95٪ بروتينات قابلة للتخثر. |
| مسحوق ملحي مخزن بالفوسفات | Millipore Sigma | P3813 | ، درجة الحموضة 7.4 ، لتحضير محاليل 1 لتر |
| كلوريد البوتاسيوم | Millipore Sigma | 60130 | & ge ؛ 99.5٪ نقاء |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة | Millipore Sigma | P9791 | & ge ؛ 98٪ نقاء |
| SevenEasy درجة الحموضة متر | Mettler Toledo | S20 | |
| كلوريد الصوديوم | Millipore Sigma | 71378 | & ge ؛ 99.5٪ نقاء |
| فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة | Millipore Sigma | 71636 | & ge ؛ 99.5٪ نقاء |
| SpectraMax M5 نظام قارئ الألواح الدقيقة متعدد الكشف | الأجهزة الجزيئية | M5 | |
| TEG 5000 نظام محلل إرقاء Thrombelastograph | Haemonetics | 07-022 | |
| Thrombin ، البقر | Millipore Sigma | 605157 | |
| Thrombin ، البلازما البشرية ، نشاط عالي | Millipore Sigma | 605195 |
المراجع
- Beckman, M. G., Hooper, W. C., Critchley, S. E., Ortel, T. L. Venous Thromboembolism. A Public Health Concern. American Journal of Preventive Medicine. 38, 4 Suppl 495-501 (2010).
- Goldhaber, S. Z., Bounameaux, H. Pulmonary embolism and deep vein thrombosis. The Lancet. 379
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
