Method Article

التهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي: نموذج فأر التهابي داخل العين

DOI:

10.3791/61832

⸱

January 12th, 2022

 ,  ,  , 
1UCL Institute of Ophthalmology, University College London

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا التقرير نقدم بروتوكولا يسمح للمحقق بإنشاء نموذج فأر لالتهاب القزحية داخل العين. يشار إليه بشكل أكثر شيوعا باسم التهاب العنبية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) ، يلتقط هذا النموذج الثابت العديد من جوانب الأمراض البشرية. هنا ، سنصف كيفية تحفيز ومراقبة تطور المرض باستخدام العديد من القراءات.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التهاب العنبية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) مدفوع بالخلايا المناعية التي تستجيب للمستضدات الذاتية. تلخص العديد من ميزات هذا النموذج غير المعدي للمرض الالتهابي داخل العين النمط الظاهري السريري لالتهاب العنبية الخلفي الذي يصيب البشر. تم استخدام EAU بشكل موثوق لدراسة فعالية العلاجات الالتهابية الجديدة وطريقة عملها ولمزيد من التحقيق في الآليات التي تدعم تطور المرض لاضطرابات العين. هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا حول تحريض EAU في الماوس C57BL / 6J - الكائن النموذجي الأكثر استخداما مع قابلية لهذا المرض. سيتم إثبات التقييم السريري لشدة المرض وتطوره باستخدام تنظير قاع القاع والفحص النسيجي وتصوير الأوعية بالفلوريسين. يتضمن إجراء الحث الحقن تحت الجلد لمستحلب يحتوي على ببتيد (IRBP1-20) من بروتين ربط الريتينويد بين مستقبلات العين (المعروف أيضا باسم بروتين ربط الريتينول 3) ، مساعد فرويند الكامل (CFA) ومكمل مع المتفطرة السلية المقتولة. يتبع حقن هذا المستحلب اللزج على الجزء الخلفي من الرقبة حقنة واحدة داخل الصفاق من توكسين السعال الديكي Bordetella . في بداية الأعراض (اليوم 12-14) وتحت التخدير العام ، يتم التقاط صور تنظير القاع لتقييم تطور المرض من خلال الفحص السريري. يمكن مقارنة هذه البيانات مباشرة مع تلك الموجودة في نقاط زمنية لاحقة وذروة المرض (اليوم 20-22) مع تحليل الاختلافات. في الوقت نفسه ، يسمح هذا البروتوكول للمحقق بتقييم الاختلافات المحتملة في نفاذية السفينة وتلفها باستخدام تصوير الأوعية بالفلوريسين. يمكن تحفيز EAU في سلالات الفئران الأخرى - سواء من النوع البري أو المعدل وراثيا - ودمجها مع علاجات جديدة توفر المرونة لدراسة فعالية الدواء و / أو آليات المرض.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سيوضح هذا البروتوكول كيفية إحداث التهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) في الماوس C57BL / 6J عن طريق حقن واحد تحت الجلد لمستضد شبكية في مادة مساعدة مستحلبة. سيتم تفصيل طرق مراقبة وتقييم تطور المرض من خلال التصوير بالمنظار والفحص النسيجي ، مع تحديد معلمات القياس في الداخل. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم مناقشة تصوير الأوعية بالفلوريسئين ، وهي تقنية لفحص بنية الأوعية الدموية في شبكية العين ونفاذيتها.

يلخص نموذج EAU هذا السمات المركزية لالتهاب العنبية الخلفي غير المعدي لدى البشر فيما يتعلق بالخصائص السريرية المرضية والآليات الخلوية والجزيئية الأساسية التي تدفع المرض. يتم التوسط في EAU بواسطة مجموعات فرعية Th1 و / أو Th17 من الخلايا الليمفاوية C....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع التجارب وفقا لقانون الحيوانات في المملكة المتحدة (الإجراءات العلمية) لعام 1986 ، والمبادئ التوجيهية المؤسسية لهيئة رعاية الحيوان والمراجعة الأخلاقية (AWERB).

1. إسكان الفئران C57BL / 6J

  1. الفئران المنزلية في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض ، في دورة الضوء والظلام لمدة 12 ساعة والغذاء والماء المتاحة حسب الطلب.
  2. إجراء جميع التجارب على الإناث البالغات C57BL / 6J (يتم اختيار الإناث بشكل تفضيلي حيث يوجد معدل من النساء إلى الرجال 1.4 إلى 1 في مرضى التهاب القزحية). اختيار إناث الفئران C57BL / 6J بشكل عشوائي بين 6-8 أسابيع حسب الوزن والعمر. ضع الفئران في أقفاص جيدة التهوية (IVC) في مجموعات من 5-6 فئران لكل....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول ، نصف طريقة خطوة بخطوة لإحداث نموذج لالتهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) عن طريق تحصين الفئران بببتيد شبكية عنبي مشتق من IRBP. يتم تغطية تقييم المرض باستخدام مناهج مستخدمة على نطاق واسع ويمكن الوصول إليها بسهولة على الرغم من أنها ليست حصرية ويمكن إضافتها أو استبدالها جزئيا بتقنيات تصوير أخرى. يمكن اكتشاف العلامات الأولى ل EAU في الفئران C57BL / 6J بعد أسبوعين من التحصين والوصول إلى ذروة المرض في غضون ثلاثة أسابيع كما هو موضح في الشكل 1. تصنف التغيرات القاعية أثناء .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النماذج الحيوانية التجريبية هي أدوات ضرورية لدراسة التسبب في المرض والاختبارات قبل السريرية للنماذج العلاجية الجديدة. في البروتوكول الحالي ، ناقشنا منهجية لتحفيز ومراقبة وتسجيل EAU ، وهو نموذج تجريبي لالتهاب القزحية الالتهابي داخل العين. يحتوي نموذج EAU هذا على أكثر من 95٪ من حالات المرض عندما يتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للبروتوكول الموضح هنا ، ويؤدي إلى تطوير EAU مزمن أحادي الطور. لتحقيق مستوى الإصابة هذا ، نؤكد على أهمية تحضير المستضد وحقن المستحلب ، وكلاهما مفصل أعلاه. السمات الرئيسية ل EAU في الحيوانات هي التهاب ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عن هذا العمل.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حصلت JG على منحة UCL Impact الدراسية وتمويل Rosetrees Trust لدعم CB. تلقت VC منحة تعاونية بحثية من شركة Akari Therapeutics Inc. نود أن نشكر معهد UCL لطب العيون ، وحدة الخدمات البيولوجية وخاصة السيدة أليسون أوهارا وفريقها على دعمهم الفني.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
antisedanZOETIS ، الولايات المتحدة الأمريكيةللاستيقاظ
Freund الكامل ق مساعد. CFASigma, UKF5881للتحصين 
DomitorOrion Pharma ، فنلنداللتخدير
FlouresceinSigma ، المملكة المتحدةF2456لتصوير الأوعية
الدموية IRBP1-20< / sub>ببتيد Chamberidge ، ببتيد المملكة المتحدة؛ مستضد 
KetamineOrion Pharma ، فنلنداللتخدير
Micron IIIPhoenix Research ، الولايات المتحدة الأمريكيةلتنظير قاع
الأساس مصل الفأرسيجما ، المملكة المتحدةM5905للتحصين   ؛
المتفطرة تيربركلوسيسسيجما ، المملكة المتحدة344289للتحصين 
للسعال الديكيسيجما ، المملكة المتحدةP2980للتحصين   ؛
فينيليفرين هيدروكلوريد 2.5٪ Bausch & أمبير Lomb UK PHEN25للتوسع  
تروبيكاميد 1٪SANDOZللتوسع  
ViscotearsWELDRICKS ، المملكة المتحدة2082642لتزييت العين
على السموم صيدلية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
  2. Klaska, I. P., Forrester, J. V.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Experimental Autoimmune UveitisIRBP 1 20 PeptideComplete Freunds AdjuvantBordetella Pertussis ToxinFundoscopic ImagingFluorescein AngiographyHistological AnalysisC57BL 6J MouseIntraocular InflammationDisease Progression

Related Articles