Kipembryo gebruiken als een krachtig hulpmiddel bij de beoordeling van ontwikkelingscarditoxiciteiten

Samenvatting

Kippenembryo's, als klassiek ontwikkelingsmodel, worden in ons lab gebruikt om ontwikkelingscarditoxiciteiten te beoordelen na blootstelling aan verschillende milieuverontreinigingen. Blootstellingsmethoden en vastgestelde morfologische/functionele beoordelingsmethoden worden in dit manuscript beschreven.

Samenvatting

Kippenembryo's zijn een klassiek model in ontwikkelingsstudies. Tijdens de ontwikkeling van kippenembryo's is het tijdvenster van hartontwikkeling goed gedefinieerd en is het relatief eenvoudig om nauwkeurige en tijdige blootstelling te bereiken via meerdere methoden. Bovendien is het proces van hartontwikkeling in kippenembryo's vergelijkbaar met zoogdieren, wat ook resulteert in een hart met vier kamers, waardoor het een waardevol alternatief model is bij de beoordeling van cardiotoxiciteiten in de ontwikkeling. In ons lab wordt het kippenembryomodel routinematig gebruikt bij de beoordeling van ontwikkelingscarditoxiciteiten na blootstelling aan verschillende milieuverontreinigende stoffen, waaronder per- en polyfluoroalkylstoffen (PFAS), deeltjes (PM's), dieseluitlaat (DE) en nanomaterialen. De belichtingstijd kan vrij worden geselecteerd op basis van de behoefte, vanaf het begin van de ontwikkeling (embryonale dag 0, ED0) tot de dag voorafgaand aan het uitkomen. De belangrijkste blootstellingsmethoden omvatten luchtcelinjectie, directe micro-inademing en luchtcelinhalatie (oorspronkelijk ontwikkeld in ons lab), en de momenteel beschikbare eindpunten omvatten hartfunctie (elektrocardiografie), morfologie (histologische beoordelingen) en moleculair biologische beoordelingen (immunohistochistry, qRT-PCR, western blotting, enz.). Natuurlijk heeft het kippenembryomodel zijn eigen beperkingen, zoals beperkte beschikbaarheid van antilichamen. Niettemin, met meer laboratoria die dit model beginnen te gebruiken, kan het worden gebruikt om aanzienlijke bijdragen te leveren aan de studie van ontwikkelingscarditoxiciteiten.

Inleiding

Het kippenembryo is een klassiek ontwikkelingsmodel, dat al meer dan tweehonderd jaar wordt gebruikt¹. Het kippenembryomodel heeft verschillende voordelen in vergelijking met traditionele modellen. Ten eerste was de normale ontwikkeling van het kippenembryo al meer dan 70 jaar geleden heel duidelijk geïllustreerd in de Hamburger-Hamilton ensceneringsgids², waarin in totaal 46 stadia tijdens de ontwikkeling van kippenembryo's werden gedefinieerd met nauwkeurige tijd- en morfologische kenmerken, waardoor detecties van abnormale ontwikkeling werden vergemakkelijkt. Bovendien heeft het kippenembryomodel andere kenmerken, zoa....

Protocol

Alle beschreven procedures zijn goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Qingdao University. In ons lab werden de eieren geïncubeerd in twee incubators. Eieren werden rechtop in de broedmachine gehouden en willekeurig op de planken geplaatst. De incubatieomstandigheden voor de eieren waren als volgt: de incubatietemperatuur begon bij 37,9 °C en daalde geleidelijk tot 37,1 °C naarmate de incubatie vorderde; de luchtvochtigheid begon bij 50% en nam geleidelijk toe tot 70%.

1. Blootstellingsmethoden

OPMERKING: Blootstelling van milieuverontreinigingen aan kippenembryo's kan op ve....

Resultaten

Blootstellingsresultaten
Luchtcelinjectie
Luchtcelinjectie kan zich ontwikkelende kippenembryo's effectief blootstellen aan verschillende agentia, die vervolgens kunnen worden gedetecteerd in de verzamelde monsters (serum, weefsel, enz.) van embryo's / broedkippen. Hier is een voorbeeld, waarin perfluoroctaanzuur (PFOA) werd geïnjecteerd in luchtcellen en serum PFOA-concentraties vervolgens werden bepaald met Ultra-performance vloeibare chromatografie-massaspectrometrie. De serumconcentraties komen overeen met de g.......

Discussie

Het kippenembryo is al 200 jaar een klassiek model in ontwikkelingsstudies¹. Onze methoden die in dit manuscript worden gepresenteerd, zijn gebruikt bij de beoordeling van verschillende milieuverontreinigingen, waaronder perfluoroctaanzuur, fijnstof en dieseluitlaat met succes^{5,7,8,9,10,11,}<.......

Materialen

```html

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
4% fosfaat gebufferd formaldehydefixatief	Biosharp, Hefei, China	REF: BL539A
75% ethanol	Guoyao,Shanghai,China	CAS:64-17-5
Biosignaling monitor BL-420E+	Taimeng, Chengdu, China	BL-420E+
Candling lamp	Zhenwei, Dezhou, China	WZ-001
Disponeerbare spuit	Zhiyu, Jiangsu, China
Ei-incubator	Keyu,Dezhou, China	KFX
Elektrische balans	OHAUS, Shanghai, China	AR 224CN
Elektro-thermische incubator	Shenxian, Shanghai, China	DHP-9022
Absolute ethanol	Guoyao,Shanghai,China	CAS:64-17-5
Fertiel kippenei	Jianuo, Jining, China
Hematoxyline en Eosine Staining Kit	Beyotime, Beijing, China	C0105
Histologie paraffine	Aladdin, Shanghai, China	P100928-500g	Smeltpunt 52~54°C
Histologie paraffine	Aladdin, Shanghai, China	P100936-500g	Smeltpunt 62~64°C
IV katheter	KDL, Zhejiang, China		De katheters moeten zachte, plastic zijn.
Lentivirus	Genechem, Shanghai, China		De lentivirussen werden individueel ontworpen/gesynthetiseerd door Genechem.
Masson's trichrome staining kit	Solarbio, Beijing, China	G1340
Metaal sonde	Jinuotai, Beijing, China
Microinjector (5 uL)	Anting,Shanghai, China
Microscoop	CAIKON, Shanghai, China	XSP-500
Microtoom	Leica, Duitsland	HistoCore BIOCUT
Microtoom mes	Leica,Duitsland	Leica 819
Pentobarbituaal natrium	Yitai Technology Co. Ltd.,  Wuhan, China	CAS: 57-33-0
Pipetter(10ul)	Sartorius, Duitsland
Povidonjodide	Longyuquan, Taian, China
Schaar	Anqisheng,Suzhou, China
Steriele zoutoplossing	Kelun,Chengdu, China
Zonnebloemolie	Mighty Jiage, Jiangsu, China		Elke commerciële zonnebloemolie voor menselijke consumptie zou moeten werken
Tape	M&G, Shanghai, China
Tedlar PVF Zak (5L)	Delin, Dalian, China
Vortex mixer	SCILOGEX, Rocky Hill, CT, VS	MX-F
XYleen	Guoyao,Shanghai,China	CAS:1330-20-7

```