يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تنميط المركبات المتطايرة في فاكهة الكشمش الأسود باستخدام الاستخراج المجهري للمرحلة الصلبة في مساحة الرأس إلى جانب كروماتوغرافيا الغاز - قياس الطيف الكتلي

3.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62421

⸱

يونيو 9, 2021

 ,  , 

في هذه المقالة

ملخص

يتم وصف منصة استخراج الغاز والكروماتوغرافيا ذات الطور الصلب في مساحة الرأس هنا لتحديد وقياس كمية متطايرة سريعة وموثوقة وشبه آلية في ثمار الكشمش الأسود الناضجة. يمكن استخدام هذه التقنية لزيادة المعرفة حول رائحة الفاكهة واختيار الأصناف ذات النكهة المحسنة لغرض التربية.

الملخص

هناك اهتمام متزايد بقياس المركبات العضوية المتطايرة (VOCs) المنبعثة من الثمار الناضجة لغرض تربية الأصناف أو الأصناف ذات الخصائص الحسية المحسنة وبالتالي زيادة قبول المستهلك. تم مؤخرا تطوير منصات استقلابية عالية الإنتاجية لتحديد مجموعة واسعة من المستقلبات في الأنسجة النباتية المختلفة ، بما في ذلك المركبات الرئيسية المسؤولة عن طعم الفاكهة وجودة الرائحة (volatilomics). يتم وصف طريقة تستخدم الاستخراج المجهري للطور الصلب (HS-SPME) إلى جانب كروماتوغرافيا الغاز - قياس الطيف الكتلي (GC-MS) هنا لتحديد وقياس كمية المركبات العضوية المتطايرة المنبعثة من ثمار الكشمش الأسود الناضجة ، وهو توت يحظى بتقدير كبير لنكهته وفوائده الصحية.

تم حصاد الثمار الناضجة لنباتات الكشمش الأسود (Ribes nigrum) وتجميدها مباشرة في النيتروجين السائل. بعد تجانس الأنسجة لإنتاج مسحوق ناعم ، تم إذابة العينات وخلطها على الفور بمحلول كلوريد الصوديوم. بعد الطرد المركزي ، تم نقل المادة الفائقة إلى قارورة زجاجية في مساحة الرأس تحتوي على كلوريد الصوديوم. ثم تم استخراج المركبات العضوية المتطايرة باستخدام ألياف الاستخراج المجهري للطور الصلب (SPME) وكروماتوغراف الغاز إلى جانب مطياف كتلة مصيدة الأيونات. تم إجراء القياس الكمي المتطاير على الكروماتوجرامات الأيونية الناتجة عن طريق دمج منطقة الذروة ، باستخدام أيون m / z محدد لكل VOC. تم تأكيد التعليق التوضيحي الصحيح للمركبات العضوية المتطايرة من خلال مقارنة أوقات الاحتفاظ وأطياف الكتلة للمعايير التجارية البحتة التي تعمل في ظل نفس ظروف العينات. تم تحديد أكثر من 60 مركبات عضوية متطايرة في ثمار الكشمش الأسود الناضجة المزروعة في مواقع أوروبية متناقضة. من بين المركبات العضوية المتطايرة المحددة ، يمكن استخدام مركبات الرائحة الرئيسية ، مثل التربينويدات والمتطايرة C6 ، كمؤشرات حيوية لجودة فاكهة الكشمش الأسود. بالإضافة إلى ذلك ، تتم مناقشة مزايا وعيوب الطريقة ، بما في ذلك التحسينات المحتملة. وعلاوة على ذلك، تم التشديد على استخدام الضوابط لتصحيح الدفعات والتقليل إلى أدنى حد من شدة الانجراف.

المقدمة

النكهة هي سمة جودة أساسية لأي فاكهة ، مما يؤثر على قبول المستهلك وبالتالي يؤثر بشكل كبير على قابلية التسويق. يتضمن إدراك النكهة مزيجا من أنظمة الذوق والشم ويعتمد كيميائيا على وجود وتركيز مجموعة واسعة من المركبات التي تتراكم في أجزاء نباتية صالحة للأكل ، أو في حالة المركبات العضوية المتطايرة ، تنبعث من الفاكهة الناضجة1,2. في حين ركزت التربية التقليدية على الصفات الزراعية مثل الغلة ومقاومة الآفات، فإن تحسين سمات جودة الفاكهة، بما في ذلك النكهة، قد أهمل منذ فترة طويلة بسبب التعقيد الوراثي وصعوبة النمط الظاهري الصحيح لهذه الخصائص، مما أدى إلى استياء المستهلك3،4<....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. حصاد الفاكهة

  1. تنمو ما بين 4 إلى 6 نباتات لكل نمط وراثي و / أو علاج لضمان ما يكفي من مواد الفاكهة والتباين.
  2. إذا كان ذلك ممكنا ، قم بحصاد العينات في نفس التاريخ ؛ إذا لم يكن هناك ما يكفي من مواد الفاكهة ، فقم بتجميع العينات التي تم حصادها في تواريخ مختلفة.
    ملاحظة: يوصى بأن يظل وقت الحصاد (الصباح والظهيرة وبعد الظهر) متطابقا تقريبا حيث تتأثر ملفات تعريف المركبات العضوية المتطايرة بإيقاع النهار / الساعة البيولوجية 28,29,30,31.
  3. تقييم مرحلة نضج الثمار عن طريق الملاحظة البصرية32. تجمع الثما....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يعد التنميط عالي الإنتاجية للمركبات العضوية المتطايرة في مجموعة كبيرة من محاصيل الفاكهة المزروعة في ظل ظروف أو مواقع مختلفة أو تنتمي إلى أنماط وراثية متميزة أمرا ضروريا للتنميط الظاهري العطري الدقيق. هنا ، يتم تقديم منصة HS-SPME / GC-MS سريعة وشبه آلية للقياس الكمي النسبي للمركبات العضوية المتطايرة في أصناف الكشمش الأسود. واستند الكشف عن المركبات العضوية المتطايرة وتحديد هويتها إلى مكتبة وضعت لتحديد ملامح أنواع ثمار التوت (الجدول 1). ويبين الشكل 1 ألف صورة نموذجية متطايرة لف.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

لطالما أعيقت تربية رائحة الفاكهة بسبب الوراثة المعقدة والكيمياء الحيوية الكامنة وراء تخليق المركبات المتطايرة ونقص التقنيات اللازمة للتنميط الظاهري الصحيح. ومع ذلك، فإن التطورات الأخيرة في منصات الأيض، جنبا إلى جنب مع الأدوات الجينومية، تسمح أخيرا بتحديد المستقلبات المسؤولة عن تفضيلات المستهلك وتربية المحاصيل ذات النكهة المحسنة3. في حين تم إحراز معظم التقدم في الفاكهة النموذجية ، الطماطم 9،10 ، يمكن تحقيق نتائج مماثلة في أنواع المحاصيل الأ.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن صاحبا البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

يشكر المؤلفون الخدمات المركزية في Apoyo a la Investigación من جامعة ملقة على قياسات HS-SPME/GC-MS. ونعرب عن تقديرنا للمساعدة التي قدمتها سارة فرنانديز - بالاسيوس كامبوس في القياس الكمي المتقلب. كما نشكر أعضاء كونسورتيوم GoodBerry على توفير مواد الفاكهة.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10 مل برغي أعلى قوارير الفراغالحراري العلمي10-HSV
18 مم غطاء لولبي سيليكون / PTFEThermo Scientific18-MSC
5 مل أنبوب مع غطاء لولبي HDPEVWR216-0153
الطردالمركزي الحراريالعلمي 75002415
الميثانول ل HPLCMerck34860-1L-R
N-pentadecane (D32 ، 98٪)مختبرات كامبريدج للنظائرDLM-1283-1
كلوريد الصوديومMerckS9888
SPME ألياف PDMS / DVBMerck57345-U
برطمانات طحن غير قابلة للصدأ ل TissueLyserQiagen69985
TissueLyser IIQiagen85300يمكن استبدالها بالهاون والمدقة أو المطحنة المبردة
تتبع GC كروماتوجراف الغاز-ITQ900 مطياف كتلة مصيدة الأيوناتThermo Scientific
Triplus RSH autosampler مع جهاز SPME الآليThermo Scientific1R77010-0450
Water for HPLCMerck270733-1L
Xcalibur 4.2 SP1Thermo Scientificالبرمجيات

المراجع

  1. Klee, H. J. Improving the flavor of fresh fruits: Genomics, biochemistry, and biotechnology. New Phytologist. 187 (1), 44-56 (2010).
  2. Ferrão, L. F. V., et al. Genome-wide association of volatiles reveals candidate loci for blueberry flavo....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

المركبات العضوية المتطايرةتوصيف رائحة الفاكهةتقدير كمية المركبات العضوية المتطايرةمنصات الميتابولومياتالمؤشرات الحيوية للرائحةتحليل المكونات الرئيسيةالمركبات التربينويدية