يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

4.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62530

⸱

مايو 10, 2021

 ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا إجراءات جراحية محسنة حول إجراء عملية زرع الجزر داخل البوابة بنجاح ، وهو إجراء جراحي ذي صلة سريريا ولكنه صعب تقنيا ، في الفئران.

الملخص

على الرغم من أن الكبد مقبول حاليا كموقع زرع أساسي للجزر البشرية في الإعدادات السريرية ، إلا أن الجزر يتم زرعها تحت كبسولة الكلى في معظم دراسات زراعة الجزر قبل السريرية للقوارض. يستخدم هذا النموذج بشكل شائع لأن زرع جزيرة الفئران داخل الكبد يمثل تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران من المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف من موقع الحقن بعد الزرع. في هذه الدراسة ، تم عرض إجراءين يمكنهما تقليل حدوث نزيف الوريد البابي بعد التسريب. تطبق الطريقة الأولى إسفنجة جيلاتين مرقئ قابلة للامتصاص على موقع الحقن ، وتتضمن الطريقة الثانية اختراق إبرة حقن الجزيرة من خلال الأنسجة الدهنية أولا ثم في الوريد البابي باستخدام الأنسجة الدهنية كحاجز مادي لوقف النزيف. كلتا الطريقتين يمكن أن تمنع بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف. تم تقديم قسم الكبد بأكمله الذي يوضح توزيع الجزر وأدلة على تجلط الدم في الجزيرة بعد الزرع ، وهي ميزة نموذجية لزرع الجزر داخل الكبد. تعمل هذه البروتوكولات المحسنة على تحسين إجراءات زرع الجزر داخل الكبد وقد تساعد المختبرات على إعداد الإجراء لدراسة بقاء الجزيرة ووظيفتها في إعدادات ما قبل السريرية.

المقدمة

زرع الجزر داخل البوابة (IIT) عبر الوريد البابي هو الطريقة الأكثر استخداما لزرع الجزر البشرية في الإعدادات السريرية. يوفر نموذج IIT للفأر فرصة رائعة لدراسة زراعة الجزر واختبار الأساليب التداخلية الواعدة التي يمكن أن تعزز فعالية زراعة الجزر1. تم وصف IIT لأول مرة في 1970s واستخدامها من قبل عدة مجموعات1،2،3،4،5. استعادت شعبيتها بعد الاختراق في زرع الجزر البشرية في عام 20006،7. ومع ذلك ، استخدمت معظم دراسات زراعة....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إجراء جميع الإجراءات بموافقة اللجان المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في جامعة ساوث كارولينا الطبية ومركز رالف إتش جونسون الطبي في تشارلستون.

1. تحريض مرض السكري باستخدام الستربتوزوتوسين (STZ)

  1. إعداد الفئران المتلقية:
    1. وزن جميع الفئران بشكل فردي.
    2. تحقق من مستويات الجلوكوز في الدم من عينة دم الوريد الذيل باستخدام مقياس السكر.
  2. تحديد جرعة STZ لثلاثة سيناريوهات مختلفة:
    1. بالنسبة للفئران المصابة بمرض الكبد الدهني ، قم بحقن جرعة واحدة من STZ [40 مجم / كجم / يوم ، حقن داخل الصفاق (i.p)] لمدة 5 أيام متتالية.
    2. بالنسبة للفئران NOD-SCID ، قم بحقن 125 مجم / كجم من STZ ، حقنة واحدة ، أ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

أجرينا عمليات زرع جزر متجانسة وجينية أجنبية عبر الوريد البابي. لوحظت وظيفة الكسب غير المشروع في الجزيرة بطريقة تعتمد على الجرعة في كل من نماذج زرع الجزر. في نموذج زرع الجزر المتلازمية باستخدام الفئران C57BL/6 ، أدى زرع 250 جزيرة إلى ارتفاع السكر في الدم المعياري العابر قبل أن تعود الفئران إلى ارتفاع السكر في الدم. وصلت الفئران التي تتلقى 500 جزيرة إلى مستوى السكر في الدم المعياري وحافظت عليه بعد 30 يوما من الزرع (الشكل 2 أ). أظهرت الفئران في كلتا المجموعتين زيادة في أوزان الجسم (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة ، تم إثبات اثنين من الإجراءات المحسنة التي يمكن أن تمنع النزيف وقد تقلل من وفيات الفئران أثناء IIT الفأر. تمكن هذه الدراسة الباحثين من تصور نموذج زرع الجزر الفريد من نوعه في دراسة الاستجابة الالتهابية الفورية بوساطة الدم بعد الزرع. نموذج IIT هو نموذج مميز لدراسة بقاء الخلايا الجزرية والإصابات الإقفارية الكبدية استجابة لزرع الجزر19. هنا ، قمنا بتنقيح الإجراء بناء على دراسات سابقة وقللنا من وفيات الفئران المبكرة الناجمة عن المضاعفات. تم استخدام كل من الطريقة A14,15,16

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن جميع المؤلفين أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى (VA-ORD BLR & D MERITIT I01BX004536) ، ومنح المعهد الوطني للصحة # 1R01DK105183 ، DK120394 ، DK118529 ، إلى HW. نود أن نشكركم السيد مايكل لي والسيدة ليندسي سوابي على تحرير اللغة

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10٪ فورمالين محايد مخزن v / vفيشر ساينتفيك23426796
1 مل حقنة مع إبرةAHSAH01T
20 مل حقنةBD301031
25G × 5/8 "إبر تحت الجلدBD305122
وسادات تحضير الكحول ، معقمةفيشر Scientific22-363-750
التخدير الحيواني نظامVetEquip، Inc.901806
بوبرينورفين هيدروكلوريد ، حقنPar Sterile Products ، LLCNDC 42023-179-05
أنابيب الطرد المركزي ، 15 ملفيشر ساينتفيك0553859A
CMRL-1066Corning15110CV
DMEMCorning10013CV
الإيثانول ، المطلق (200 دليل) ، درجة البيولوجيا الجزيئيةفيشر العلميBP2818500
مقص تشريح دقيق فائق الدقة 4 "شركةRoboz Surgical Instrument Co.RS-5882
مصل الأبقار الجنيني (FBS)Corning35011CV
FreeStyle  شرائط اختبار الجلوكوزAbbottLite
FreeStyleAbbottLite
Gelfoam (إسفنجة جيلاتين قابلة للامتصاص ، USP)Pharmacia & amp شركة Upjohn34201
ملقط Graefe 4 "طرف حساس للغايةRoboz Surgical Instrument Co.RS-5136
وسادة ساخنةمن أمازونB07HMKMBKM
حامل إبرة هيجار-بومغارتنر 5.25 بوصةشركة روبوز للأدوات الجراحيةRS-7850
حقنة الأنسولين بإبرة قياس 27BD879588
وسادات إعداد اليودفيشر Scientific19-027048
IsofluranePiramal للرعاية الحرجةNDC 66794-017-25
البنسلين / الستربتومايسين (P / S) خياطةHyCloneSV30010
البولي بروبيلين 4-0Med-Vet InternationalMV-8683
خياطة البولي بروبلين 5-0Med-Vet InternationalMV-8661
كلوريد الصوديوم ، محلول وريدي 0.9٪VWR2B1322Q
Streptozocin (STZ)SigmaS0130
الستارة الجراحية ، كاسيتالأنسجة المعقم Med-Vet InternationalDR1826
كاسيت الأنسجةفيشر Scientific22-272416
في الدم

المراجع

  1. Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
  2. Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

فئران زراعة الجزر البنكرياسيةإسفنج الجيلاتين المرقئتقنية الوسادة الدهنيةحقن الوريد البابيبقاء الجزر البنكرياسيةالمضاعفات الجراحيةتوزيع الجزر البنكرياسيةزراعة كبد الفئران