מאמר זה מתאר שיטות להשרה ולהערכה של דיסקינזיות הנגרמות על ידי לבודופה במודל חולדה של מחלת פרקינסון. הפרוטוקול מציע מידע מפורט לגבי העוצמה והתדירות של מגוון התנהגויות דיסקינטיות, הן דיסטוניות והן היפרקינטיות, ומספק כלי אמין לבדיקת טיפולים המכוונים לצורך רפואי זה שטרם קיבל מענה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אינדוקציה והערכה של דיסקינזיות הנגרמות על ידי לבודופה במודל חולדות של מחלת פרקינסון
במאמר זה
סיכום
תקציר
לבודופה (L-DOPA) נותרה הטיפול הסטנדרטי המשמש לטיפול בתסמינים מוטוריים של מחלת פרקינסון (PD). עם זאת, תנועות לא רצוניות לא רצויות הידועות בשם דיסקינזיות הנגרמות על ידי L-DOPA (LIDs) מתפתחות עם שימוש ממושך במבשר דופמין זה. ההערכה היא כי שכיחות ה-LIDs עולה לכ-90% מהאנשים עם מחלת פרקינסון תוך 10-15 שנות טיפול. הבנת המנגנונים של מחלה זו ופיתוח טיפולים אנטי-דיסקינזיים חדשניים ויעילים כאחד דורשת מודלים עקביים ומדויקים לבדיקה פרה-קלינית של התערבויות טיפוליות. שיטה מפורטת לאינדוקציה אמינה ודירוג מקיף של LIDs בעקבות נגעים ניגרליים הנגרמים על ידי 6-OHDA במודל חולדה של מחלת פרקינסון מוצגת כאן. הערכת LID מהימנה בחולדות מספקת כלי רב עוצמה שניתן להשתמש בו בקלות במעבדות שונות כדי לבחון טיפולים מתפתחים המתמקדים בהפחתת או ביטול הנטל הנפוץ הזה המושרה על ידי טיפול עבור אנשים עם מחלת פרקינסון.
מבוא
למרות שעברו יותר מ -50 שנה מאז שלבודופה (L-DOPA) הוצגה לראשונה כטיפול באנשים עם פרקינסון 1,2, היא נותרה באופן מדהים הטיפול היעיל ביותר לתסמינים מוטוריים של פרקינסון. הסימפטומים המוטוריים הקליניים הקשורים לפרקינסון נובעים מאובדן של נוירוני דופמין (DA) ב- substantia nigra (SN) pars compacta, וכתוצאה מכך הירידה הדרמטית בדופמין הזמין בסטריאטום. L-DOPA משחזר ביעילות את רמות ה-DA של הסטריאטים, וכתוצאה מכך התועלת המוטורית בשלב מוקדם של המחלה 3,4. באופן לא מתאים, עם טיפול ארוך טווח, רוב האנשים עם מחלת פרקינסון יפתחו דיסקינזיות המושרות על ידי L-DOPA (LID), כולל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
בעלי החיים שהוצגו כאן נשמרו וטופלו בהתאם להנחיות המוסדיות. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת מישיגן (IACUC) בהתאם לתקנות הפדרליות והמדינתיות.
1. אישור ללא תרופות על מצב הנגע 6-OHDA
- מבחן לתליית זנב יציב 11,12,13
הערה: הערך את מצב הנגע לפחות שבוע לאחר אינדוקציה של נגע 6-OHDA (ראה 9,10,35 לפרטים על הנגע) בנבדקים ניסיוניים (למשל, זכר או נקבה, ספראג דאולי בוגר או פישר 344 חולדות....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
LIDs בחולדות פרקינסון יכולות להתבטא כמגוון של תנועות לא רצוניות חריגות (AIMs), כולל התנהגויות דיסטוניות, היפרקינטיות וסטריאוטיפיות. קריטריוני דירוג LID עבור התנהגויות כאלה מוצגים כאן כדי לכלול הן את העוצמה (טבלה 1) והן את התדירות (טבלה 2). זה מספק ציון חומרת LID כולל עבור כל חולדה המשקף הן את האיכות (העוצמה) והן את כמות הזמן המושקע במעורבות (תדירות) בהתנהגויות אלה בכל נקודת זמן של דירוג. ציון חומרת ה-LID הסופי מחושב על ידי הכפלת ציון העוצמה בציון התדירות עבור כל רכיב התנהגותי. קריטריוני .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מוצגים כאן פרטים על אינדוקציה הניתנת לשחזור ודירוג של LIDs במודל של חולדה פרקינסון בעקבות נגע חד צדדי 6-OHDA של מערכת DA nigrostriatal. בעוד שבעבר חשבו כי מכרסמים אינם מפתחים LID וכי אסימטריה סיבובית עשויה להיות האנלוגיה של LID בחולדות31, מודלים של חולדות ועכברים אופיינו במהלך שני העשורים האחרונים והם כלי מקובל היטב למחקר LID 15,32,33,34. הפרוטוקול המוצג כאן מועיל במיוחד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לא הוכרזו ניגודי עניינים.
תודות
אנו רוצים להכיר במאבקים של כל אלה הסובלים ממחלת פרקינסון ובכוח ובחוסן שהם מפגינים מדי יום, במיוחד אביו האהוב של KSC, מארק סטייס. העבודה המיוצגת כאן נתמכה על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי (NS090107, NS110398) ותוכנית מענקי המחקר הבינלאומית של הקרן למחלות פרקינסון, כיום קרן פרקינסון. אנו רוצים גם להודות למולי ונדר ואנדרוורפ על עזרתה המצוינת בעריכה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 100 דקות | סיכות | 1111764 | |
| Compass CX Compact Scale | Ohaus | 30428202 | |
| 5-(2-aminoethyl)-1,2,4-benzenetriol, monohydrobromide | Cayman Chemicals | 25330 | 6-OHDA הוא נוירוטוקסין קטכולמינרגי המשמש להשראת נגעים דופמינרגיים ותסמינים פרקינסוניים במכרסמים. |
| כלובי אלנטאון | Allentown, LLC | Rat900 | כלובי אלנטאון מספקים את היכולת לצפות בחולדות מכל עבר. |
| מגשי אלרגיסט BD עם מחט מחוברת לצמיתות | BD | BD 305540 | לזריקות L-DOPA תת עוריות |
| Benserazide hydrochloride | Sigma-Aldrich | B7283 | Benserazide הוא מעכב דקרבוקסילאז היקפי המשמש עם L-DOPA כדי לגרום לדיסקינזיה במודלים של מכרסמים של PD. |
| בקבוקוני נצנוץ ענבר מזכוכית | Thermo Scientific | B7921 | משמש לאחסון L-DOPA/benserazide ב-20 מעלות; C עד לערבוב עם מי מלח סטריליים. |
| L-3,4-דיהידרוקסיפנילאלנין מתיל אסטר הידרוכלוריד | סיגמא-אולדריץ' | D1507 | L-3,4-דיהידרוקסיפנילאלנין מתיל אסטר הוא קודמן ל L-DOPA החוצה את מחסום הדם-מוח ומשמש לטיפול בתסמיני פרקינסון במכרסמים. |
| Paper Mate Sharpwriter עפרונות מכניים | סיכות | 107250 | |
| מכרסמים טיפולי העשרה מלאה מבחינה תזונתית | Bio-Serv | F05478 | |
| דלי קרח עגול עם מכסה, 2.5 ליטר | קורנינג | 432129 | |
| סיכות | לוח פלסטיק סטנדרטיות | 1227770 | |
| פלדה חוטית 6 'יחידות מדפים ניידות ארוכות | Uline | H9488 | ניתן להתאים רוחב/גובה לצורך/מספר חולדות לניסוי |
| תמיסת מלח סטרילית 0.9% | Covidien/Argyle | 1020 | לערבוב עם L-DOPA/benserazide לפני הזרקות תת עוריות. |
מקורות
- Cotzias, G. C., Papavasiliou, P. S., Gellene, R. L-dopa in parkinson's syndrome. New England Journal of Medicine. 281, 272(1969).
- Yahr, M. D., Duvoisin, R. C., Schear, M. J., Barrett, R. E., Hoehn, M. M. Treatment of parkinsonism with levodopa. Archives of Neurology. 21 (4), 343-354 (196....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
