الجمع بين التفكك الميكانيكي والأنزيمي لأنسجة الحصين في دماغ الفئران

Madison Trujillo; Taylor McElroy; Taurean Brown; Pilar Simmons; Fabio Ntagwabira; Antiño R. Allen

doi:10.3791/63007

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الجمع بين التفكك الميكانيكي والأنزيمي لأنسجة الحصين في دماغ الفئران

4.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63007

⸱

أكتوبر 21, 2021

Madison Trujillo¹^,²^,³ , Taylor McElroy¹^,²^,³ , Taurean Brown¹^,²^,³ , Pilar Simmons¹^,² , Fabio Ntagwabira¹^,²^,³ , Antiño R. Allen¹^,²^,³

¹Division of Radiation Health, University of Arkansas for Medical Sciences, ²Department of Pharmaceutical Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences, ³Neurobiology & Developmental Sciences, University of Arkansas for Medical Sciences

في هذه المقالة

ملخص

بروتوكول تفكك الخلايا العصبية هذا مخصص للعينات التي تحتوي على كمية منخفضة من المواد الأولية وينتج عنه تعليق أحادي الخلية قابل للتطبيق للغاية للتحليل النهائي ، مع خطوات تثبيت وتلطيخ اختيارية.

الملخص

يعمل بروتوكول التفكك العصبي هذا (وهو تكييف للبروتوكول المصاحب لمجموعة تفكيك دماغية تجارية للبالغين) على تحسين معالجة الأنسجة استعدادا للتحليل التفصيلي في المراحل النهائية مثل قياس التدفق الخلوي أو تسلسل الخلية الواحدة. يمكن إجراء التفكك العصبي عن طريق التفكك الميكانيكي (مثل استخدام المرشحات أو تقنيات التقطيع أو تريتوريون الماصة) أو الهضم الأنزيمي أو مزيج منهما. يمكن للطبيعة الحساسة للخلايا العصبية أن تعقد الجهود المبذولة للحصول على تعليق خلية واحدة حقيقي وقابل للتطبيق للغاية مع الحد الأدنى من الحطام الخلوي المطلوب لتحليل الخلية الواحدة. تظهر البيانات أن هذا المزيج من التفكك الميكانيكي الآلي والهضم الأنزيمي ينتج باستمرار تعليقا أحادي الخلية قابلا للتطبيق (>90٪) ، متغلبا على الصعوبات المذكورة أعلاه. في حين أن بعض الخطوات تتطلب براعة يدوية، فإن هذه الخطوات تقلل من معالجة العينات وفقدان الخلايا المحتمل. تفصل هذه المخطوطة كل خطوة من خطوات العملية لتجهيز مختبرات أخرى لفصل كميات صغيرة من الأنسجة العصبية بنجاح استعدادا للتحليل النهائي.

المقدمة

تم وصف الحصين لأول مرة من قبل عالم التشريح البولونزي ، جوليو سيزار أرانزيو ، في 1500¹. في تسمية هذا الهيكل المكتشف حديثا ، من المحتمل أن يكون أرانزيو مستوحى من تشابهه الغريب مع فرس البحر من جنس Hippocampus¹. يشارك الحصين في استجابات الإجهاد ولكنه معروف على نطاق واسع بدوره في التعلم والذاكرة. وبشكل أكثر تحديدا ، فإن الحصين مسؤول عن تشفير واسترجاع الذاكرة التقريرية والمكانية¹.

ينقسم الحصين ، أو الحصين المناسب ، إلى CA1 (أمونيات القرنو) ، CA2 ، و CA3 الفرعية¹. بالمقارنة مع بقية الجهاز العصبي ، فإن الحصين له العديد من الخصائص المميزة الفريدة....