تلعب اللوزة دورا رئيسيا في صرع الفص الصدغي ، الذي ينشأ في هذا الهيكل وينتشر منه. تقدم هذه المقالة وصفا مفصلا لتصنيع أقطاب الدماغ العميقة مع كل من وظائف التسجيل والتحفيز. يقدم نموذجا لصرع الفص الصدغي الإنسي الناشئ من اللوزة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخدام قطب كهربائي ثنائي القطب لإنشاء نموذج فأر صرع الفص الصدغي عن طريق إشعال اللوزة كهربائيا
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
اللوزة هي واحدة من أكثر أصول النوبات شيوعا ، ونموذج فأر اللوزة ضروري لتوضيح الصرع. ومع ذلك ، فقد وصفت دراسات قليلة البروتوكول التجريبي بالتفصيل. توضح هذه الورقة العملية الكاملة لصنع نموذج الصرع الكهربائي اللوزة ، مع إدخال طريقة لتصنيع القطب ثنائي القطب. يمكن لهذا القطب أن يحفز ويسجل ، مما يقلل من إصابة الدماغ الناتجة عن زرع أقطاب كهربائية منفصلة للتحفيز والتسجيل. لأغراض تسجيل مخطط كهربية الدماغ على المدى الطويل (EEG) ، تم استخدام حلقات الانزلاق للقضاء على انقطاع السجل الناجم عن تشابك الكابلات والسقوط.
بعد التحفيز الدوري (60 هرتز ، 1 ثانية كل 15 دقيقة) من اللوزة القاعدية (AP: 1.67 مم ، L: 2.7 مم ، V: 4.9 مم) لمدة 19.83 ± 5.742 مرة ، لوحظ إشعال كامل في ستة فئران (تعرف بأنها تحريض ثلاث حلقات مستمرة من الدرجة الخامسة مصنفة حسب مقياس راسين). تم تسجيل مخطط كهربية الدماغ داخل الجمجمة طوال عملية إشعال النار بأكملها ، ولوحظ إفراز صرع في اللوزة الدماغية يستمر 20-70 ثانية بعد الإشعال. لذلك ، هذا بروتوكول قوي لنمذجة الصرع الناشئ من اللوزة ، والطريقة مناسبة للكشف عن دور اللوزة في صرع الفص الصدغي. يساهم هذا البحث في الدراسات المستقبلية حول آليات صرع الفص الصدغي المتوسط والأدوية الجديدة المضادة للصرع.
المقدمة
صرع الفص الصدغي (TLE) هو أكثر أنواع الصرع انتشارا ولديه مخاطر عالية للتحول إلى صرع مقاوم للأدوية. الجراحة ، مثل استئصال اللوزة الحميدية الانتقائية ، هي علاج فعال ل TLE ، ولا يزال تكوين الصرع وتكوين المرض قيد التحقيق 1,2. وقد تبين أن التسبب في TLE يحدث ليس فقط في الحصين ولكن أيضا على نطاق واسع في اللوزة3،4. على سبيل المثال ، تم الإبلاغ عن كل من تصلب اللوزة وتضخم اللوزة بشكل متكرر كأصول لنوبات TLE 5,6. لا يمكن التقليل من أهمية اللوزة. نموذج اللوزة ضروري لدراسة تكوين الصرع ، وهناك حاجة ماسة إلى تو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على هذه التجربة من قبل لجنة أخلاقيات التجارب في مستشفى Xuanwu ، جامعة العاصمة الطبية. تم الاحتفاظ بجميع الفئران في مختبر الحيوانات في مستشفى Xuanwu ، جامعة العاصمة الطبية. ينقسم هذا البروتوكول إلى أربعة أجزاء. يقدم الجزءان الأولان طريقة بناء القطب والدائرة الكهربائية باستخدام حلقة انزلاق لتوصيل الأقطاب الكهربائية ومعدات تسجيل / تحفيز EEG. يصف الجزء الثالث طريقة تشغيل زرع القطب الكهربائي ، ويعرض الجزء الرابع معلمات تسجيل وتحفيز EEG المستخدمة في نموذج الصرع اللوزة.
1. تصنيع الأقطاب الكهربائية
- احتفظ بالمواد التالية المعدة مسبقا جاهزة: قطعتان بطول 3 سم من سلك التنغستن المطلي بالتفلون (القطر العاري: 76.2 م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتيح القطب والدائرة تسجيل مخطط كهربية الدماغ والعمل كتحفيز (الشكل 1) ؛ يتجنب هذا الإعداد تعقيد تسجيل الزرع وتحفيز الأقطاب الكهربائية بشكل منفصل ويقلل من تلف أنسجة المخ. يسمح تطبيق حلقات الانزلاق بتوصيل القطب الكهربائي بجميع أنواع الأجهزة.
أجرينا جراحة زرع القطب الكهربائي على ستة ذكور بالغين أصحاء C57BL / 6 الفئران ، وتم إجراء التحفيز الكهربائي بعد 2 أسابيع من الجراحة. زاد مستوى النوبات السلوكية تدريجيا مع زيادة عدد المحفزات ، ويستند التصنيف إلى مقياس راسين: 1 = أت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الصرع هو مجموعة من الأمراض ذات المظاهر المتعددة والأسباب المتنوعة18 ؛ تجدر الإشارة إلى أنه لا يمكن استخدام نموذج واحد لجميع أنواع الصرع ، ويجب على الباحثين اختيار نموذج مناسب لدراستهم المحددة. تقدم الدراسة الحالية واحدة من أكثر الطرق التي يمكن الوصول إليها لتصنيع الأقطاب الكهربائية. يمكن تعديل أجزاء مختلفة من هذه الطريقة للتكيف مع الظروف التجريبية المختلفة.
تستخدم هذه الطريقة أقطاب كهربائية مع كل من وظائف التحفيز والتسجيل ، مما يقلل من إصابة دماغ الحيوان الناتجة عن زرع .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
شكر وتقدير
تم دعم البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82030037 ، 81871009) ولجنة الصحة البلدية في بكين (11000022T000000444685). نشكر TopEdit (www.topeditsci.com) على مساعدتها اللغوية أثناء إعداد هذه المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488 مترافق الحمار المضاد للأرانب IgG | invitrogen | A-21206 | |
| c-Fos الأجسام المضادة | ab222699 | ||
| مثقاب الجمجمة | SANS | SA302 | |
| أسمنت الأسنان | NISSIN | ||
| EEG معدات التسجيل والتحفيز | Neuracle Technology (Changzhou) Co.، Ltd | NSHHFS-210803 | |
| سلك القصدير الخالي من الرصاص | BAKON | ||
| رأس دبوس / رأس أنثى | XIANMISI | تباعد 1.27 مم | |
| الأسلاك الفضية | أنظمة EM | 786000 | |
| حلقة الانزلاق | Senring Electronics Co.، Ltd | SNM008-04 | |
| أنظمة أسلاك التنغستن | AM | 796000 | |
| سلك متناهية الصغر متعدد الحامل | سلك Shenzhen Chengxing و معدات لحام الكابلات | UL10064-FEP | |
| BAKON | BK881 |
المراجع
- Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study. PLoS One. 11 (7), 0159464(2016).
- Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
