Non-invasive visualisation 3D avec résolution submicronique utilisant synchrotron à rayons X-tomographie

Résumé

Nous avons utilisé synchrotron tomographie par rayons X à l'European Synchrotron Radiation Facility (ESRF) pour produire de manière non invasive en 3D des jeux de données tomographiques avec un pixel résolution de 0.7μm. En utilisant le logiciel de rendu de volume, ce qui permet la reconstruction des structures internes dans leur état naturel sans les artefacts produits par sectionnement histologique.

Résumé

On connaît mal l'organisation interne de nombreux micro-arthropodes du corps avec des tailles inférieures à 1 mm. Les raisons en sont la petite taille et la cuticule dure ce qui rend difficile d'utiliser des protocoles de l'histologie classique. En outre, les coupes histologiques détruit l'échantillon et ne peut donc pas être utilisé pour matériau unique. Ainsi, une méthode non destructive est souhaitable qui permet de visualiser l'intérieur de petits échantillons sans avoir besoin de sectionnement.

Nous avons utilisé synchrotron tomographie par rayons X à l'European Synchrotron Radiation Facility (ESRF) à Grenoble (France) à la non-invasive de produire des ensembles de données 3D tomographique avec une résolution de pixel 0.7μm. En utilisant le logiciel de rendu de volume, ce qui nous permet de reconstituer l'organisation interne dans son état naturel sans les artefacts produits par sectionnement histologique. Ces date peut être utilisé pour la morphologie quantitative, des repères, ou pour la visualisation de films d'animation pour comprendre la structure des parties du corps cachés et de suivre les systèmes d'organes ou de tissus complète à travers les échantillons.

Protocole

Les animaux utilisés dans cette étude

Les spécimens de la parthénogénétiques oribates acariens Archegozetes longisetosus (Acari, Oribatides) ont été prises à partir de notre culture en laboratoire. La culture pousse sur un plâtre de Paris / mix charbon (9:1) dans des pots en plastique, dans l'obscurité constante à 20-23 ° C avec environ 90% d'humidité de l'air.

La préparation des échantillons

1. Les échantillons ont été prélevés dans la culture, nettoyé avec un pinceau fin et placé dans un mélange 06:03:01 d'éthanol 80%, formaldéhyde 35% et 100% d'acide acétique pendant 24 heures.

Discussion

Dans cette présentation, nous nous sommes concentrés sur la visualisation 3D de l'anatomie interne d'un micro-chelicerate arthropodes. Les rayons X synchrotron mesures permettent un pixel-résolution allant jusqu'à 0.3μm, selon la taille de l'échantillon. Ici, nous avons montré des données avec 0.7μm pixels de résolution. Généralement, synchrotron tomographie aux rayons X peut être utile pour analyser de petits matériels biologiques (ou des tissus) avec un faible atténuation des rayons X. Les pixels de résolution atteint pres.......