Method Article

ثقافة الخلايا الجذعية من الدم النخاعي السلائف نخاع العظم

DOI:

10.3791/769

July 25th, 2008

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الفيديو يوضح الإجراء للتمييز بين الخلايا الجذعية من نخاع العظم النخاعي الماوس. وأظهرت عزلة الماوس الساق وعظم الفخذ ، ومعالجة نخاع العظم. وتظهر الصور يتظاهرون مورفولوجية الخلية قبل وبعد التمايز ، والشخصيات التي تصور النمط الظاهري الخلية ونضوج IL - 12 الإنتاج التالية باستخدام CPG.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكثيرا ما تستخدم الخلايا الجذعية النخاعي (DCS) لدراسة التفاعلات بين آليات المناعة الفطرية والتكيف والاستجابة المبكرة للعدوى. لأن هذه هي أقوى مستضد تقديم الخلايا ، ويجري البلدان النامية تستخدم بشكل متزايد كناقل لقاح لدراسة تحريض مستضد محددة الاستجابات المناعية. في هذا الفيديو ، نبدي الداخلي للحصاد وtibias femurs ماوس من المانحين ، ومعالجة نخاع العظم والتفريق البلدان النامية في المختبر. تغيير خصائص البلدان النامية التحفيز التالية : الخلايا الجذعية غير الناضجة هي البالعات قوية ، في حين أن البلدان النامية قادرة على تنضج العرض والتفاعل مع مستضد CD4 + و + CD8 خلايا تي. هذا التغيير في النشاط الوظيفي يتوافق مع upregulation من علامات سطح الخلية والإنتاج خلوى. ويمكن استخدام العديد من وكلاء للبلدان النامية ناضجة ، بما في ذلك السيتوكينات وعدد يغاندس مستقبلات شبيهة. في هذا الفيديو ، ونظهر مقارنات تدفق cytometric للتعبير عن جزيئات تنشيطية شارك في اثنين ، و CD86 CD40 ، وخلوى و، IL - 12 ، في أعقاب التحفيز بين عشية وضحاها مع العلاج CPG أو وهمية. بعد التمايز ، ويمكن التلاعب بها البلدان النامية مزيد من استخدام كناقل لقاح أو لتوليد مستضد محددة الاستجابات المناعية التي ينبض في المختبر باستخدام الببتيدات أو بروتينات أو transduced باستخدام ناقلات فيروسية المؤتلف.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم تكييف هذا البروتوكول من لوتز وآخرون 1

الحصاد ومعالجة نخاع العظم

  1. العزل من الساق والفخذ : الموت ببطء الماوس المانحة ورذاذ الأرجل مع الايثانول 70 ٪. فهم الكاحل first بحزم مع ملقط كليلة والبدء في قطع الجلد والعضلات الكامنة لفضح الساق. لتجنب إتلاف العظام ، وببطء وخفض مواز في الساق ، وترك سليمة مفصل الركبة.

    لتنظيف عظم الفخذ ، لشل حركة مفصل الركبة بواسطة ملقط مع استيعاب حادة. نظيفة بعيدا عن الجهاز العضلي مع زوج من مقص حاد ملقط والمنحن....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البلدان النامية هي مفيدة لدراسات التفاعلات المناعية الفطرية والتكيفية ، ويمكن استخدامها كناقل اللقاح. في هذا الفيديو ، وقد برهنا على خطوات لعزل النخاع العظمي والخلايا الجذعية التفريق النخاعي في المختبر. بعد فترة الثقافة ، ويمكن تصور هذه الخلايا مجهريا كل من الخلايا الملتصقة والتي غالبا ما تمتلك التشعبات وخلايا مستديرة غير ملتصقة. ويمكن للبلدان النامية لمزيد من التلاعب العرض مستضد التي ينبض مع مستضد أو تحفيز للإنتاج خلوى وcostimulatory upregulation جزيء باستخدام السيتوكينات و / أو مستقبلات يغاندس حصيلة.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

معتمد من قبل JB منحة دراسية من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث (NSERC). تم تقديم الدعم لهذا المشروع من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة والمنح MOP - 67066.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كاشف الفئران المؤتلف GM-CSFPeptrotech315-03

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
  2. Gilboa, E. DC-based cancer ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Myeloid Dendritic CellsBone Marrow PrecursorsFlow CytometryToll Like Receptor LigandCD86 ExpressionCD40 ExpressionIL 12 CytokineCpG StimulationDendritic Cell MaturationAntigen Presentation

Related Articles