דיסקציה וצמיחה של תאים מאזור המוח הפרט מאפשר חקירה של פרמטרים פיזיולוגיים הסלולר. אנו מתארים שיטה culturing התא הראשוני שמייצר נוירון מועשר תרבויות בסביבה בסרום חופשי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
תרבות ראשונית של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות P0 יילוד
במאמר זה
סיכום
תקציר
המאפיינים הפיזיולוגיים של נוירונים בהיפוקמפוס נחקרות כלל, בעיקר בגלל מעורבותו של ההיפוקמפוס בלמידה ובזיכרון. תא ראשי culturing בהיפוקמפוס מאפשר מדעני מוח כדי לבחון את פעילות ומאפיינים של הנוירונים בתא הבודד וברמת סינפסה אחת. בסרטון זה נדגים כיצד לבודד ולגדל תאים בהיפוקמפוס של חולדות ראשוני לרך הנולד. ההיפוקמפוס עשוי להיות מבודד כל חיה הנולד בקיצור כמו 2 עד 3 דקות, ואת התרבויות יכול להישמר לתקופה של עד שבועיים. אנו גם בקצרה להדגים כיצד להשתמש אלה נוירונים בהיפוקמפוס הדמיה סידן ratiometric. בעוד פרוטוקול זה מתאר את התהליך עבור בהיפוקמפוס, עם קצת שינוי לא, זה יכול להיות מיושם על אזורים אחרים של המוח.
פרוטוקול
לפני בידוד בהיפוקמפוס
לפני תחילת הבידוד בהיפוקמפוס, לוודא שכל הכלים הם עקרים. תרסיס את מכסה המנוע תרבות עם אתנול 70%, ואת המקום כלים בתוך מכסה המנוע. יהיה עליך 6 - ו 10 ס"מ צלחות פטרי, סטרילי poly-L coverslips זכוכית מצופה, pipettors וטיפים, טפטפות חד פעמיות, וכן pipettor חשמלי. מנקודה זו והלאה, לזכור להשתמש בטכניקה סטרילית הנכון.
- הפעל את האמבטיה במים ולוודא כי הוא מחומם עד 37 ° C.
- הפתרונות הבאים המאוחסנים ב 4 ° C, יהיה צו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול זה פותח כשינוי העבודה הזרע של גארי בנקאי וקים Goslin 1. ספר זה הוא משאב חיוני עבור מי שמעוניין תאים culturing - לא רק נוירון מועשר תרבויות המתואר בפרוטוקול הנוכחי.
שלושת הגורמים הקריטיים ביותר culturing התא הם: עקרות מהירות, הבחירה של שימוש בינוני.
עקרות - זרימה למינרית / ברדס סטרילי, תנאי aseptic, וכן חממה סטרילי נדרשים. זיהום בשלב כלשהו הוא מזיק לא רק בניסוי הנוכחי אתה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
JLN נתמכה על ידי MH 68347.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אנטיביוטיקה אנטימיטוטית | Invitrogen | 15240062 | |
| תוסף B-27 | Invitrogen | 17504044 | נטול סרום |
| חומצה בורית | Sigma-Aldrich | B6768 | |
| Dnase I | Sigma-Aldrich | DN25 | |
| Fura-2, AM חודר תאים | Molecular Probes, Life Technologies | F1221 | |
| גלוקוז | Sigma-Aldrich | G7528 | |
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | |
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G7513 | |
| MEM | Invitrogen | 51200038 | |
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | ללא פנול אדום |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P6282 | |
| חומצה פירובית | Sigma-Aldrich | P2256 | |
| נתרן פירובט | Sigma-Aldrich | P2256 | |
| נתרן טטרaborate | Sigma-Aldrich | ||
| טריפסין, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
מקורות
- Banker, G., Goslin, K. Culturing Nerve Cells, 2nd Edition. , The MIT Press. (1998).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
