تشريح ونمو الخلايا من منطقة في الدماغ الفردية يسهل التحقيق في المعلمات الخلوية والفسيولوجية. نحن تصف طريقة لزرع الخلايا الأولية التي تنتج الخلايا العصبية التخصيب الثقافات في بيئة خالية من المصل.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الثقافة الأولية من الخلايا العصبية قرن آمون من الفئران حديثي الولادة P0
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
عادة يتم التحقيق الخصائص الفيزيولوجية للعصبونات الحصين ، وخصوصا بسبب تورط حصين في التعلم والذاكرة. زراعة الخلايا الأولية الحصين يسمح علماء الأعصاب على دراسة النشاط وخصائص الخلايا العصبية في زنزانة فردية واحدة على مستوى المشبك. في هذا الفيديو ، سوف نقوم شرح كيفية عزل وزراعة الخلايا الأولية الحصين من الفئران حديثي الولادة. قد تكون معزولة الحصين من كل حيوان الأطفال حديثي الولادة في قصيرة بقدر 2 إلى 3 دقائق ، ويمكن المحافظة على الثقافات لمدة تصل الى أسبوعين. ونحن أيضا لفترة وجيزة تبين كيفية استخدام هذه الخلايا العصبية الحصين للتصوير ratiometric الكالسيوم. في حين أن هذا البروتوكول يصف عملية للقرن آمون ، مع قليل من دون تعديل ، ويمكن تطبيقه في مناطق أخرى من الدماغ.
البروتوكول
قبل قرن آمون إلى العزلة
قبل البدء في عزلة الحصين ، تأكد من أن جميع الأدوات معقمة. رذاذ أسفل غطاء الثقافة مع الايثانول 70 ٪ ، ووضع الأدوات داخل غطاء محرك السيارة. ستحتاج 6 -- و 10 سم ، أطباق بتري ، معقمة بولي - L coverslips الزجاج المطلي ، وpipettors نصائح ، ماصات القابل للتصرف ، وpipettor الكهربائية. من هذه النقطة ، تذكر أن استخدام تقنية معقمة الصحيح.
- بدوره على حمام مائي وتأكد من أن يتم تسخينها إلى 37 درجة مئوية.
- الحلول ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد تم تطوير هذا البروتوكول بمثابة تعديل للعمل منوية من بانكر غاري وكيم Goslin 1. هذا الكتاب هو موردا أساسيا للراغبين في زراعة الخلايا -- وليس فقط الثقافات عصبون التخصيب هو موضح في البروتوكول الحالي.
العوامل الثلاثة الأكثر أهمية في استنبات الخلايا هي : العقم ، وسرعة ، واختيار الوسيلة المستخدمة.
هناك حاجة إلى تدفق الصفحي / هود العقيمة ، والظروف العقيم ، وحاضنة العقيمة -- العقم. تل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وأيد JLN بواسطة MH 68347.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مضاد انقسام خلوي مضاد حيوي | Invitrogen | 15240062 | |
| مكمل B-27 | Invitrogen | 17504044 | خالٍ من المصل |
| حمض البوريك | Sigma-Aldrich | B6768 | |
| Dnase I | Sigma-Aldrich | DN25 | |
| Fura-2, AM نفاذ خلوي | Molecular Probes, Life Technologies | F1221 | |
| جلوكوز | Sigma-Aldrich | G7528 | |
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | |
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G7513 | |
| MEM | Invitrogen | 51200038 | |
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | بدون فينول الأحمر |
| هيدروبروميد Poly-L-Lysine | Sigma-Aldrich | P6282 | |
| حمض البيروفيك | Sigma-Aldrich | P2256 | |
| بيروفات الصوديوم | Sigma-Aldrich | P2256 | |
| تترابورات الصوديوم | Sigma-Aldrich | ||
| تريبسين، 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
المراجع
- Banker, G., Goslin, K. Culturing Nerve Cells, 2nd Edition. , The MIT Press. (1998).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
