Name: Neurocircuit מבחני עבור התקפים של אפילפסיה של מוטאנטים תסיסנית /em (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-15T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: חקור התקפים חשמליים בזבובי פרי Drosophila באמצעות גירוי בתדר גבוה. שיטה זו מאפשרת למדוד סף התקף ופעילות מערכת סיבי הענק לחקר מנגנוני עצבנות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר NIH, קרן אפילפסיה מענק קרן מק &#39;נייט להעניק MT ניסויים על זבובים תסיסנית פרי בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי ועדת ברקלי שימוש בבעלי חיים.

הדגימה אופן ההכנה: בלילה שלפני הניסוי, זבובים זכרים של הגנוטיפ הרצוי מורדמים והושמו בקבוקון עם תקע ניילון רך. כדור צמר גפן היה גם לעבוד. לאחר הרדמה, סף התקף משתנה, כך הזבובים הם עזבו ביותר לפחות 6 שעות, אם כי במשך הלילה הוא אידיאלי. ביום הניסוי, הזבובים הם רכובים אחד בכל פעם כדי שקופיות הזכוכית בשכבת שעווה שיניים בצד אחד. זבוב אחד הוא הרים ראש באמצעות מחט מד 23 (עם קצה חד לחתוך) מוצמד לקו ואקום. לעוף היא מודבקת ואז השעווה בשקופית על ידי לחיצה על רגליים וכנפיים בשעווה. לאחר לטוס היא משותקת, שעווה נדחף סביב הצוואר והעיניים כדי לשתק לגמרי את הראש. Electrophysiology: לעוף, אשר מותקן עכשיו ומוכן ללכת ממוקם electrophysiology להגדיר. קבוצת electrophysiology למעלה מורכב משלושה סטים של micromanipulators, כל אחד עם 1-2 אלקטרודות טונגסטן חידד המצורפת. מתח מסופק על ידי ממריץ המחובר יחידת הבידוד מחוברת האלקטרודות מגרה. אלקטרודה ההקלטה מחובר המגבר מראש אשר בתורו מחובר אוסצילוסקופ אחסון דיגיטלי. אמנם זה לא הכרחי, כדאי להיות הדובר מחוברת אוסצילוסקופ, כך התגובות ניתן נשמע. אלקטרודה הקרקע מוכנס לתוך הבטן של הזבוב. אלקטרודה ההקלטה מוכנס לתוך אחד השרירים אורך הגב של בית החזה של הזבוב. האלקטרודות מוחדרות לתוך מגרה הראש. אחת לצד כל עין. ממריץ צריך את ההגדרות הבאות כדי להתחיל: מרווח דופק רציף עם 2 שניות בין הדופק בכל. לא צריך להיות שום עיכוב הדופק. רוחב הדופק צריך להיות 0.2ms. אוסצילוסקופ צריך את התכונה אחסון מופעל יש את ההגדרות הבאות: Time / DIV צריך להיות מוגדר 1ms/DIV. וולט / DIV צריך להגדיר או 0.1V/DIV או 50 mV / div. הסף של סיבים ענק נקבעת על ידי מתן פולסים יחיד וציין את המתח המינימלי הנדרש כדי לקבל תגובה. מתח זה הוא בדרך כלל סביב 2 V. לאחר סף סיבים ענק נקבע, פועם להפסיק את הזבוב לשנות את ההגדרות על אוסצילוסקופ אל: 0.2 S / DIV הגדרות על ממריץ יש לשנות ל: רווח הדופק צריך להיות מוגדר יחיד. הרכבת צריכה להיות מופעלת ומוגדרת 3 שניות. הפרמטרים waveform הם: 0.5 ms ב 200Hz פולסים של 300 מילישניות. מתח משתנה ההגדרה הרצויה רכבת בתדירות גבוהה של קטניות מועבר למוח של זבוב. אם ההתקף לא מושרה, עקבות אוסצילוסקופ יראה קו שטוח לאחר הרכבת. אם ההגדרות נקבעות במהירות בחזרה להגדרות המוצא, קטניות בודד יגרום תגובה במערכת סיבים ענק. אם התקף מושרה, אוסצילוסקופ יציג את פעילות ההתקפים דמויי לאחר הרכבת. אם הגדרות מוחלפות במהירות בחזרה להגדרות המקוריות, קטניות יחיד ייכשל כדי להפעיל תגובה של מערכת סיבים ענק. הזבובים יש תקופה עקשן לאחר wavetrain בתדירות גבוהה גירוי שבו תפיסה כמו פעילות לא יכול להיגרם. אם לא מתרחשת תפיסת זבובים הם עקשן כ 7 דקות. אם התקף מושרה, הזבובים יש עקשן תקופה של כ 17 דקות. בעת קביעת סף, נוסף בתדירות גבוהה בגירויים יכול להיות מועברת להטיס אותו (לאחר זמן המתאים לתקופה עקשן) עד לסף נקבעת או עד התגובה סיבים ענק הופך חלש מדי כדי לראות. לאחר הניסוי הושלם, לטוס יוסר electrophysiology להגדיר, שוחרר מבית השעווה, ואת להיפטר ממנו.

<ol><li>Kuebler, D., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modifications+of+seizure+susceptibility+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Modifications of seizure susceptibility in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 83, 998-1009 (2000).</li>
<li>Kuebler, D., Zhang, H., Ren, X., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+suppression+of+seizure+susceptibility+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Genetic suppression of seizure susceptibility in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 86, 1211-1225 (2001).</li>
<li>Song, J., Tanouye, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizure+suppression+by+shakB2%2C+a+gap+junction+mutation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Seizure suppression by shakB2, a gap junction mutation in Drosophila.</a> J Neurophysiol. 95, 627-635 (2006).</li>
</ol>

סרט הווידאו הזה הוכיח את הפעולות הבסיסיות בקביעת סף התקף של זבוב תסיסנית בודדים. במקום להשתמש אוסצילוסקופ דיגיטלי, digitizer ממוחשב עשוי לשמש גם. טכניקה זו שימושית עבור לקבוע את ההשפעות של התרופה או שינוי גנטי על סף התקף של זבוב.

<table><tbody><tr><td>אוסצילוסקופ דיגיטלי</td><td>Hitachi</td><td>VC-6523</td><td></td></tr><tr><td>סטימולטור</td><td>Cornerstone</td><td>S-900</td><td></td></tr><tr><td>קדם-מגבר</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>Electro 705</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-מניפולטורים</td><td>Narishige International</td><td>שונים</td><td></td></tr></tbody></table>

neurocircuit מבחני עבור התקפים של אפילפסיה של מוטאנטים תסיסנית</em

Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila

תסיסנית melanogaster הוא כלי שימושי לחקר תפיסה כמו פעילות. מגוון מוטציות שבו ההתקפים יכול להיגרם דרך הלם פיזית או גירוי חשמלי זמין עבור לימוד היבטים שונים של הפעילות תפיסה והתנהגות. כל זבובים, כולל wild-type, יעברו התקף כמו פעילות אם מגורה במתח גבוה מספיק. תפיסה כמו הפעילות היא תגובה הכל או כלום גנוטיפ אחד יש סף התקף ספציפי. סף תפיסת גנוטיפ מסוים של זבוב ניתן לשנות באמצעות טיפול בתרופה או על ידי דיכוי או שיפור גנטי. הסף נמדד בקלות על ידי electrophysiology. תפיסה כמו פעילות יכול להיגרם באמצעות גירוי חשמלי בתדר גבוה ישירות אל המוח דרך רשמה את שרירי הגב האורך (DLMs) בתוך בית החזה. DLMs מעוצבבים על ידי חלק של מערכת סיבים ענק. החל גירוי נמוך, מתח בתדר גבוה, ולאחר מכן העלאת מתח במרווחים קטנים, סף התקף עבור לטוס יחיד ניתן למדוד.

באמצעות גירוי חשמלי בתדר גבוה, תפיסת כמו פעילות יכול להיגרם ב<em&gt; תסיסנית</em&gt;. פעילות זו רשמה בקלות ממערכת סיבים ענק.

Neurocircuit מבחני עבור התקפים של אפילפסיה של מוטאנטים תסיסנית</em

*Drosophila melanogaster* היא כלי שימושי לחקר פעילות דמוית פרכוסים. קיימים מוטנטים מגוונים שבהם ניתן להשרות פרכוסים באמצעות גורם פיזי או...

כדי להתחיל את בדיקת המעגלים העצביים (Neurocircuit assay), מקבעים את הזבובים לשעוות דנטלית. על גבי זכוכית נושאת מוחדרות ארבעה אלקטרודות אל תוך הזבוב: אלקטרודת הארקה אחת בבטן, אלקטרודת הקלטה אחת בשרירי התעופה האורכיים-גבייים בחזה, ושתי אלקטרודות גירוי בראש.מיקום האלקטרודות מאומת על ידי מציאת סף הסיב הענק (giant fiber threshold) וסימון תגובה נראית לעין. הזבוב מקבל רכבת גלים בתדר גבוה במתח הרצוי, ואם לא מתרחשת פרכוס, העקבה באוסצילוסקופ תהיה שטוחה. אם מתרחשת פרכוס, העקבה תראה פעילות בלתי נשלטת כתגובה לגירוי בתדר הגבוה.שלום, אני מארק טואי, פרופסור במחלקה למדיניות וניהול של מדעי הסביבה באוניברסיטת קליפורניה בברקלי. היום נדגים לכם פרוצדורה לבדיקת פרכוסים אלקטרופיזיולוגיים ב-drosophila. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי לחקור פרכוסים במוטנטים של drosophila ולקבוע את ספי פרכוסים עבור מוטנטים אלו.אם כן, נתחיל. בלילה שלפני הניסוי, זבובים זכרים בעל הגנוטיפ הנדרש מורדמים באמצעות פחמן דו-חמצני ומועברים לבקבוק מזון טרי הסגור בפקק ניילון רך או בכדור צמר. בעקבות ההרדמה בפחמן דו-חמצני, סף הפרכוסים משתנה, לכן מומלץ להמתין לפחות שש שעות לפני המשך הניסוי, אם כי המתנה למשך לילה שלם היא האידיאלית.ביום הניסוי, הזבובים מקובעים אחד אחד לשקופיות זכוכית בעזרת שכבת שעוות דנטלית בצד אחד. הזבובים מטופלים ל

neurocircuit-assays-for-seizures-in-epilepsy-mutants-of-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

מבחני התנהגות למדידת פונקציות של תנועה, למידה, ויכולות...

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

שיטה פשוטה להקליט פוטנציאלי שדה תאיים במוח הקדמי דג זברת הזחל מתוארת. השיטה מספקת...

הקלטת אלקטרו מוח קדמי בזחל דג זברה

כאן אנו מתארים שני מבחני שנקבעו ללמוד ניוון מוחיים תלוי גיל של דופאמין (DA)...

הערכת פנוטיפים ניווניות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; נוירונים דופאמין על ידי מבחני לאז וimmunostaining מוח כל

שימוש במצלמת אינטרנט ושילוב של תוכנות חופשיות וזולות, ניתן לנתח דפוסי קטר בדרוזופילה melanogaster כדי לזהות הבדלים במהירות, מרחק, והזמן של פעילויות מוטוריות שונות.

שיטה בעלות נמוכה לניתוח כמו פעילות תפיסה ותנועה ב<em&gt; דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מתאר את הקרע של immunostaining של המבוגרים דרוזופילה melanogaster רקמות המוח. באופן ספציפי, פרוטוקול זה מדגיש את השימוש נוירונים הגוף, קולט אור פטריות דרוזופילה בתור דוגמה עצביים קבוצות משנה יכול לשמש באופן מדויק לחשוף את עקרונות כלליים שבבסיס היבטים רבים של ההתפתחות העצבית.

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

אנו מציגים פרוטוקול באמצעות גישה גנטית הקדמי למסך עבור מוטציות המציגות ניוון נוירוזוסופילה מלאנוגסטר. היא משלבת שיטת טיפוס, ניתוח היסטולוגיה, מיפוי גנים ורצפי דנ א בסופו של דבר לזהות גנים חדשניים הקשורים לתהליך של הגנה עצבית.

ב Vivo Forward המסך הגנטי כדי לזהות גנים נוירוגינים הרומן ב Drosophila ילה melanogaster

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להדמיית סידן ex vivo בדרוזופילה למבוגרים המבטאים GCaMP6 לניטור פעילויות אפילפטיפורמיות. הפרוטוקול מספק כלי רב ערך לחקר אירועים איקטליים בדרוזופילה בוגרת באמצעות הדמיית סידן ex vivo , המאפשר לחקור את המנגנונים הפוטנציאליים של אפילפסיה ברמה התאית.

אקס ויוו הדמיית סידן למודל דרוזופילה לאפילפסיה

מאמר זה מציג שיטות למניפולציה אופטוגנטית ב-Drosophila melanogaster, תוך שימוש ב-CsChrimson ו-GtACR2 כדי להפעיל ולהשתיק נוירונים ספציפיים. ארבעה ניסויים מתוארים לשימוש באופטוגנטיקה כדי לחקור התנהגויות תרמוטקטיות וטעמיות, ומספקים תובנות לגבי המנגנונים העצביים הבסיסיים השולטים בתהליכים אלה.

מבחנים התנהגותיים למניפולציה אופטוגנטית של מעגלים עצביים בדרוזופילה מלנוגסטר

פרוטוקול זה מפרט את השימוש בזחלי דרוזופילה לזיהוי תרכובות נוגדות פרכוסים ייחודיות לטיפול באפילפסיה.

פעילות התקפים הנגרמת על ידי שוק חשמלי בזחלי דרוזופילה

חקור התקפים חשמליים בזבובי פרי Drosophila באמצעות גירוי בתדר גבוה. שיטה זו מאפשרת למדוד סף התקף ופעילות מערכת סיבי הענק לחקר מנגנוני עצבנות.

Neurocircuit מבחני עבור התקפים של אפילפסיה של מוטאנטים תסיסנית

גלה סרטונים נוספים