Name: Egzersizle indüklenen Lenfosit Apoptoz belirlenmesi için parmak sopa Kan Örnekleme Metodolojisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-24T17:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Öğrenin egzersizle indüklenen lenfosit apoptozunu parmak sopa kan örnekleme yöntemiyle hızlı ve minimal invaziv olarak analiz etmeyi. Bu yöntem akış sitometrisi ile bağışıklık hücreleri dinamiklerini değerlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma, Western Kentucky Üniversitesi&#39;nde Fakülte Burs Konseyi Yeni Bir Fakültesi Grant tarafından desteklenmiştir.

1. Parmak-Stick Kan Örnekleme <ol><li> Tam kan toplanması genellikle kesildikten sonra (genellikle 1-3 saat sırasında bazal ölçüm (genellikle 10-15 dk oturan geri kalanı aşağıdaki), veya bir egzersiz nöbeti hemen ardından, egzersiz sonrası dönem boyunca dinlenme alınır egzersiz). </li><li> Evrensel Önlemler kullanarak, önce parmak ucu% 70 izopropil alkol ile sterilize edin. </li><li> Sonra, delinme, otomatik bir neşter veya benzeri bir cihaz kullanarak site. Biz tabi konfor sağlamak için 30-gauge neşter kullanmalarına rağmen, daha büyük bir iğne yararlanılabilir. </li><li> Ilk kan damlası uzak silin ve sonra da kan pıhtılaşmasını önlemek için lityum heparin ile tedavi, kılcal tüpler veya microvettes içine toplamak. </li></ol> 2. Hücre fenotipleme ve Apoptoz Boyama <ol><li> 250 mcL bağlayıcı tampon titred antikor paneli (bkz. Tablo 1 şematik) 10 mcL heparinize tam kan ekleyin. Biz başarı ile 1:20 seyreltme faktörü var, ama her laboratuar için en iyi çalışma çözümü belirlemek için reaktifler titre. (Tablo 1). Lökosit altkümelerini egzersiz apoptosis belirlenmesi için antikor paneli. Geç apoptozis Annexin V ve 7-AAD çift pozitif etiketleme tarafından tanımlanan iken erken apoptozis, Annexin V ifadesi ile tanımlanmıştır. V-7-AAD + hücreler nekrotik hücreler Annexin edildi. <table border="1"><tbody><tr><td> Tüp 1 </td><td> Tüp 2 </td><td> Tüp 3 </td><td> Tüp 4 </td></tr><tr><td> Hücreler sadece tüp </td><td> Annexin V - FITC </td><td> Annexin V - FITC </td><td> Annexin V - FITC </td></tr><tr><td></td><td> Anti İnsan CD4-PE </td><td> Anti İnsan CD8 - PE </td><td> Anti İnsan CD19-PE </td></tr><tr><td></td><td> 7-AAD </td><td> 7-AAD </td><td> 7-AAD </td></tr><tr><td></td><td> Anti İnsan CD45RA - APC </td><td> Anti İnsan CD45RA - APC </td><td></td></tr></tbody></table> 7-AAD = 7-Amino-aktinomisin D, APC = Allophycocyanin, CD4 yardımcı T lenfositler, CD8 = Bastırıcı / sitotoksik T lenfositler, CD19 = B lenfositleri, CD45RA = naif hücre alt grupları, FITC = Floresein izotiyosiyanat, PE = Fikoeritrin. </li><li> Karanlık oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. </li><li> 5-10 dakika 1075 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Durusu, 300 mcL Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tampon ekleyin ve iyice girdap. </li><li> 15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> RBC parçalama reaksiyonu durdurmak için 300 mcL PBS ekleyin. </li><li> 5-10 dakika 1075 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Durusu, raf ve 50 mcL bağlayıcı tampon ekleyin. </li><li> Flow sitometri ile analiz edin. </li></ol> Sadece tüp arka plan otofloresans saptanmasında bir negatif kontrol olarak hizmet etmek için bir hücre, her bireyin içeren tüplere ve akış sitometresinin ilk sırasında tazminat ayarlamak için florokrom: en azından aşağıdaki denetimleri kullanılan olması tavsiye edilir. Buna ek olarak, bizim deneyler kurmak için tazminat standart boncuk başarıyla kullanmıştır.

<ol><li>Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+does+not+contribute+to+the+blood+lymphocytopenia+observed+after+intensive+and+downhill+treadmill+running+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Res.+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans.</a> Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).</li>
<li>Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+exercise%2C+lymphocyte+apoptosis+and+F2-isoprostanes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).</li>
<li>Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+apoptosis+after+exhaustive+and+moderate+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise.</a> J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).</li>
<li>Peters, E. M., Eden, M. V. an, Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+exercise+does+not+cause+lymphocyte+DNA+damage+or+increased+apoptosis+in+well-trained+endurance+athletes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).</li>
<li>Wang, J. -S., Huang, Y. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+exercise+intensity+on+lymphocyte+apoptosis+induced+by+oxidative+stress+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men.</a> Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).</li>
<li>Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise-induced+apoptosis+of+lymphocytes+depends+on+training+status%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci.+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status.</a> Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).</li>
<li>Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+treatment+influences+the+yield+of+apoptotic+lymphocytes+after+maximal+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci.+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise.</a> Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).</li>
</ol>

Minimal invaziv bir örnek toplama işlemi ve sonraki analiz egzersize bağlı lenfosit apoptozis hem erken ve geç faz analizi için gösterilmiştir. Bu açıkça nekrotik ve apoptotik değil bu hücrelerin, dışlamak için de mümkündür. Bu işlem sırasında, önce birden fazla zaman noktalarında antekübital bölgede invaziv venipunktür ile ilgili sakıncaları ve rahatsızlık üstesinden ve egzersizden hemen sonra ya da egzersiz maçın süresi için bir kateter güvence. Araştırmacılar açısından, bu tür işlemler genellikle flebotomi, tüm birey...

<table><tbody><tr><td>Akış Sitometrisi Bağlanma Tamponu</td><td></td><td>eBioscience</td><td>00-4222-26</td><td></td></tr><tr><td>Eritrosit Lizis Tamponu</td><td></td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>Lanset Cihazı</td><td>Accu Check Soft Touch</td><td>Roche Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kılcal tüpler</td><td>Heparinli Kılcal Tüpler</td><td>Chase Scientific Glass, Inc.</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>GmC Lab</td><td>Gilson, Inc.</td><td>PMS-880</td><td></td></tr><tr><td>Annexin V-FITC Konjuge</td><td></td><td>Biovision Inc.</td><td>K201-400-1</td><td></td></tr><tr><td>CD4-PE Konjuge</td><td>Anti-insan, klon RPA-T4</td><td>eBioscience</td><td>12-0049-42</td><td></td></tr><tr><td>CD8-PE Konjuge</td><td>Anti-insan, klon OKT8</td><td>eBioscience</td><td>12-0086-73</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PE Konjuge</td><td>Anti-insan, klon HIB19</td><td>eBioscience</td><td>12-0199-42</td><td></td></tr><tr><td>7-AAD Canlılık Boyama Solüsyonu</td><td></td><td>eBioscience</td><td>00-6993-50</td><td></td></tr><tr><td>CD45RA-APC Konjuge</td><td>Anti-insan, klon HI100</td><td>eBioscience</td><td>17-0458-42</td><td></td></tr><tr><td>Akış sitometresi</td><td>C6</td><td>Accuri</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

egzersizle indüklenen lenfosit apoptoz belirlenmesi için parmak sopa kan Örnekleme metodolojisi

Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis

Egzersiz bağışıklık hücrelerinin apoptozisi indükleyen yeteneğine fizyolojik bir uyarı. Bugüne kadar, özellikle hücre ölümü değerlendirme öncesinde kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli sınırlamalar, bu fenomenin ölçümü ile tespit edilmiştir. Bu nedenle, immün hücre apoptozis artar, sistem üzerinde egzersiz gerçek etkisi katkıda veya bu ölçüm sonunda elde etmek için gerekli zaman ve işleme bir yansıması olup olmadığını belirlemek zordur. Bu yazıda, egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir prosedür ortaya koymaktadır. Diğer tekniklerin aksine, tam kan, hemen bir örnek elde etmek üzerine bir antikor paneline eklenir. Kuluçka döneminin ardından, kırmızı kan hücrelerinin parçalanmış ve numuneler analiz edilecek hazırız. Bir parmak-stick örnekleme prosedürü kullanmak gerekli kan hacmini azaltır ve konulara rahatsızlığı en aza indirir.

Egzersiz immün hücrelerinde apopitoz indükleyen yeteneğine sahiptir. Özellikle önce değerlendirilmesi için kan örneği izole etmek ve tedavi etmek için gerekli süreyi ile ilgili çeşitli ölçüm sınırlamaları vardır. Göstermiştir egzersize bağlı lenfosit apoptozis analizi için hızlı ve minimal invaziv bir işlemdir.

Egzersizle indüklenen Lenfosit Apoptoz belirlenmesi için parmak sopa Kan Örnekleme Metodolojisi

Egzersiz, bağışıklık hücrelerinde apoptozu indükleme kapasitesine sahip fizyolojik bir stimülüstür. Günümüze kadar, ölçümle ilgili çeşitli sınırlamalar tespit edilmiştir...

Merhaba, ben Western Kentucky Üniversitesi Kinezyoloji Rekreasyon ve Spor Bölümü Egzersiz Bilimleri Programı'ndan James Volta. Size, egzersizle tetiklenen lenfosit apoptozunu ölçmek için geliştirdiğimiz ve kullandığımız prosedürü göstereceğiz. Hadi bir göz atalım.Evrensel önlemler uygulanarak parmak delme yöntemiyle kan örneği alınır. Parmak ucu sterilize edilir ve ardından delinir. İlk kan damlası silinir ve sonrasında kan, kapiler tüplere veya mikro yataklara çekilir.Flow sitometrisi için uygun florokromları içeren; annexin V, 7-AAD, CD4, CD8 veya CD19 ve CD45 RA'dan oluşan bir antikor paneli içeren durdurma tamponuna 10 µL tam kan pipetlendi; ayrıca sadece hücre içeren bir tüp de hazırlandı. Deneylerimizin kurulumuna yardımcı olmak amacıyla kontrol olarak kompanzasyon boncukları kullandık. Örnek vortex cihazında iyice karıştırıldı ve ardından oda sıcaklığında, karanlıkta 30 dakika boyunca inkübasyona bırakıldı. İnkübasyonun ardından örnekler 10 dakika boyunca santrifüjlendi ve sonrasında tek bir akıcı hareketle üst fazı boşaltıldı.300 µL eritrosit liziz tamponu eklenir ve örnekler iyice vortekslenir. Örneği ile liziz tamponunun tamamen karıştırılması çok önemlidir. Maksimum erit

finger-stick-blood-sampling-methodology-for-determination-exercise

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Hücre-aracılı lenfositotoksisite (KML) deneyleri, in vitro otoreaktif yanıtları ve hücre ölümü çalışma mekanizmaları test etmek için kullanılabilir. Ancak, canlı hücre floresan boyalar, tipi ve hücre ölümü gibi kullanılan yollar kinetiği konfokal mikroskopik görüntüleme teknikleri kullanılarak daha ayrıntılı olarak incelenebilir.

Sitotoksik T Lenfositler Beta Hücre Ölümü aracılığı ile değerlendirin yöntemleri

Bu video, antikor salgılayan B hücrelerinin, ASC'lerin işlevini değerlendirmek için ELISpot testinin kullanımını göstermektedir. ASC'ler tarafından salgılanan antikorlar, enzim konjuge IgG veya IgM antikorları tarafından tespit edilen zara bağlı poliklonal antikor fragmanları ile etkileşime girer. Her bir oyukta üretilen renkli nokta, B hücrelerinin salgı aktivitesi ile ilişkili olan spesifik antikorun izotipinin varlığını gösterir.

Antikor Salgılayan B Hücrelerinin ELISpot Testi Kullanılarak Fonksiyonel Değerlendirmesi

Bu video, tiplenemeyen Haemophilus influenzae (NTHi) yoluyla lenfositleri uyarmak ve bağışıklık tepkisini değerlendirmek için in vitro bir tekniği göstermektedir. İzole edilmiş periferik kan mononükleer hücrelerinin (PBMC'ler) NTHi ile inkübe edilmesi, bakteri hücrelerinin T lenfositlerini uyarmasına neden olarak sitokin üretimine yol açar. Sitokinlerin sekresyonunu inhibe ettikten sonra, uyarılmış T lenfositlerinde biriken hücre içi sitokinleri tespit etmek için immünofloresan boyama yapılır.

Patojenik Bakteriler Yoluyla Lenfositleri Uyarmak için İn Vitro Teknik

Bu videonun amacı, modifiye edilmiş Bergström iskelet kası biyopsi tekniğini insan denekler üzerinde sunmaktır.

Modifiye Bergström Tekniği İnsan İskelet Kası Biyopsi Prosedürleri

Bu makalenin amacı, insan kan örneklerinde monosit ve granülosit fagositozu ve oksidatif patlama aktivitesini ölçmek için bir yöntem sunmaktır.

İnsan Kanı Ölçüm Granülosit ve Monosit Fagositoz ve Oksidatif Burst Etkinlik

İnsan periferik kanı, humoral immün yanıtın değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılır. Burada, insan B hücrelerini periferik kandan izole etme, insan B hücrelerini kültürde antikor (Ab) salgılayan B hücrelerine (ASC'ler) ayırma ve bir ELISpot testi ile toplam IgM ve IgG-ASC'leri numaralandırma yöntemleri açıklanmaktadır.

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi&#39;nin olarak

Bu çalışma, insan kan örneklerinde NK (Doğal Öldürücü) hücre sayısının ve NK hücre sitotoksisitesinin doğru ve hızlı bir şekilde belirlenmesi için gelişmiş bir iş akışını açıklar.

İnsan Tüm Kan Natural Killer Hücre Parçalayıcı Faaliyet Akışı Sitometrik Analizi

Metabolizma çalışması, immünolojik araştırmalarla giderek daha fazla ilgili hale geliyor. Burada, fare splenositlerinde ve T ve B lenfositlerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçmek için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Bir Optimize Protokol Lenfositlerindeki Glikoliz ve Mitokondriyal Solunum Analiz

Burada birkaç kan örneklerini kolundaki damarı yoğun ara egzersiz sırasında almak için bir protokol mevcut. Bu iletişim kuralı kan metabolitleri ölçüm için yararlı olabilir ve egzersiz sırasında endokrin işaretleri.

Kolundaki ven kateterizasyonu tarafından yoğun egzersiz sırasında kan laktat ve plazma insülin değerlendirme

Egzersiz yoğunluğu etkisi fizyolojik ve biyolojik yanıtları değerlendirmek için iki farklı egzersiz test protokol kullanılmıştır. Yöntemleri, egzersiz döngüsü Küreði üzerinde test bir artımlı maksimal oksijen tüketimi testi ve dayanıklılık özetleyen kararlı duruma submaximal dayanıklılık testi açıklanmıştır.

Maksimal ve Submaximal dayanıklılık egzersiz akut egzersiz insanlarda biyolojik ve fizyolojik yanıtlarını ölçmek için test iletken

Öğrenin egzersizle indüklenen lenfosit apoptozunu parmak sopa kan örnekleme yöntemiyle hızlı ve minimal invaziv olarak analiz etmeyi. Bu yöntem akış sitometrisi ile bağışıklık hücreleri dinamiklerini değerlendirir.

Egzersizle indüklenen Lenfosit Apoptoz belirlenmesi için parmak sopa Kan Örnekleme Metodolojisi

Daha fazla video keşfet