Name: Hücre Biyolojisi Degrade üreten mikroakışkan Aygıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Öğrenin hücre biyolojisinde degrade üreten mikroakışkan cihaz mikrofabrikasyonunu. Bu yöntem, yönlü hücre göçü ve embriyogenez gibi süreçleri incelemek için kontrollü mikroçevreler oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

A. mikroimalat mikroakışkan degrade üreten cihaz <ol><li> Si gofret, reaktif oksijen plazma (30W, harrick Bilimsel az 5 dakika, NY) ile tedavi edilir. </li><li> Negatif fotorezist (SU-8 (50), Microchem, MA) Si gofret 1 dakika 1000 rpm&#39;de spin-kaplı. </li><li> Gofret yumuşak 65 pişirilmiş ° C daha sonra 95 ve 10 dak ° C 30 dakika bir ocak. </li><li> Gofret UV ışığı (200W) en az 30 mikron özellik boyutu ile bir şeffaflık maskesi ile 3 dakika maruz kalmaktadır. </li><li> Gofret 65 pişirilmiş yazılan ° C 1 dakika ve 95 ° C de 10 dakika. </li><li> 100 mikron kalınlığında kanalları ile Si SU-8 fotorezist geliştirici ana kalıp kullanılarak geliştirilmiştir. </li><li> Gofret mikro içeren bir Petri kabı içerisinde yerleştirilir. </li><li> Poli (dimethylsiloxane) (PDMS) (Sylgard 184) kalıplar, karıştırma silikon elastomer ve sertleştirici (10:1 oranı) tarafından imal edilir. </li><li> PDMS karışımı Si ana kalıp üzerine dökülür. </li><li> Si ana kalıp 10 dakika kabarcıklarını çıkarmak için bir vakum desikatörde yerleştirilir. </li><li> PDMS 1 ~ 2 saat boyunca 70 ° C&#39;de kür. </li><li> PDMS kalıpları Si ana kalıptan sıyrılır. </li></ol> B. deney düzeneği <ol><li> Hücre giriş, çıkış ve beslerken girişler PDMS tabanlı mikroakışkan cihazın keskin zımbalama kullanarak açılmıştır. </li><li> Geri dönüşümsüz bir cihaz ve bir cam slayt (2 × 3 inç) reaktif oksijen plazma (30W, harrick Bilimsel az 5 dakika, NY) ile yapıştırılır. </li><li> Polietilen boru (PE 20, Becton Dickinon, MD) beslerken girişler mikroakışkan cihazın içine yerleştirilir ve daha sonra bir şırınga pompası bağlı. </li><li> Floresein izotiyosiyanat (FITC)-dekstran (MW = 10kD, 10 mcM, Sigma) ve tamponu (PBS, Invitrogen, CA) akışkan cihaz içinde istikrarlı gradyanlar onaylamak için mikroakışkan cihazın içine infüze. </li><li> Ekstrasellüler matriks (ECM) (yani, fibronektin) 1 saat inkübatör (37 ° C), mikroakışkan cihazın içinde kaplanmıştır. </li><li> NIH 3T3 fibroblast hücreleri tripsinize ve ayrışmış. </li><li> Disosiye hücreleri hücre yoğunluğu 2 × 10 6 hücre / ml mikroakışkan cihazı (800 mm genişliğinde) yüklenir. </li><li> 2 ml medya ve 50 ng / ml epidermal büyüme faktörü (EGF), bir şırınga pompası (0.05 ul / dk) kullanarak çözünen gradyanlar üretmek için bir mikroakışkan cihazın içine doluyor. </li><li> Hücreler her 5 dakikada bir inverted mikroskop (Nikon TE 2000) kullanarak gerçek zamanlı takip edilmektedir. </li></ol>

<ol><li>Jeon, N. L., Baskaran, H., Dertinger, S. K. W., Whitesides, G. M., Van de Water, L., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+chemotaxis+in+linear+and+complex+gradients+of+interleukin-8+formed+in+a+microfabricated+device%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil chemotaxis in linear and complex gradients of interleukin-8 formed in a microfabricated device.</a> Nat. Biotechnol. 20, 826-830 (2002).</li>
<li>Lin, F., Nguyen, C. M., Wang, S. J., Saadi, W., Gross, S. P., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+neutrophil+chemotaxis+is+strongly+influenced+by+mean+IL-8+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Effective neutrophil chemotaxis is strongly influenced by mean IL-8 concentration.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 319, 576-581 (2004).</li>
<li>Chung, B. G., Flanagan, L. A., Rhee, S. W., Schwartz, P. H., Lee, A. P., Monuki, E. S., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+growth+and+differentiation+in+a+gradient-generating+microfluidic+device%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell growth and differentiation in a gradient-generating microfluidic device.</a> Lab Chip. 5, 401-406 (2005).</li>
<li>Saadi, W., Wang, S. J., Lin, F., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+parallel-gradient+microfluidic+chamber+for+quantitative+analysis+of+breast+cancer+cell+chemotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Microdevices%22%5BJournal%5D)">A parallel-gradient microfluidic chamber for quantitative analysis of breast cancer cell chemotaxis.</a> Biomed. Microdevices. 8, 109-118 (2007).</li>
<li>Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hybrid+microfluidic-vacuum+device+for+interfacing+with+conventional+cell+culture+platform%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform.</a> BMC Biotechnol. 7, (2007).</li>
</ol>

Hücreler yüksek konsantrasyonlarda doğru göç eden bir mikroakışkan cihaz EGF istikrarlı konsantrasyon gradyanlar maruz. Hücre göçü, kemotaktik indeks, göç hücrelerinin motilite yönlü yönlendirme hücre izleme analizi ile araştırıldı. Bu nedenle, bu degrade üreten mikroakışkan platformu kanser metastazı, embriyogenez ve akson rehberlik eğitimi için yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Dextran-FITC</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD10S</td><td>Florescein izotiyosiyanat (FITC) konjuge dekstran (10kD)</td></tr><tr><td>hr-EGF</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>13247-051</td><td>insan rekombinan Epidermal büyüme faktörü</td></tr><tr><td>PDMS</td><td></td><td>K.R. Anderson Co.</td><td>2065622</td><td>Poly(dimetilsiloksan) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb)</td></tr><tr><td>Negatif fotoresist</td><td></td><td>MicroChem Corp.</td><td>SU-8 50</td><td></td></tr><tr><td>Si wafer</td><td></td><td></td><td></td><td>silikon wafer, 4 inç</td></tr><tr><td>Petri kapları</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polietilen tüp</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>PE 20</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>hücre hattı</td><td></td><td></td><td>fibroblast hücreleri</td></tr><tr><td>İnverted mikroskop</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>TE 2000</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre biyolojisi degrade üreten mikroakışkan aygıt

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

Hücresel davranışlarının incelenmesi için bir degrade üreten mikroakışkan cihazın imalat ve işleyişi açıklanmıştır. Tam akışkanlar işlemek, yüksek verimli deneyler etkinleştirmek, ve istikrarlı çözünen konsantrasyonu gradyanlar oluşturmak için mikroakışkan bir platform sağlayan deneysel bir araçtır. Geleneksel gradyan jeneratörler, poli (dimethylsiloxane) (PDMS) ile karşılaştırıldığında tabanlı mikroakışkan cihazlar iyi tanımlanmış profiller ile istikrarlı büyüme faktörleri konsantrasyon gradyanlar üretebilirsiniz. Burada, üç ayrı girişleri ile basit degrade üreten mikroakışkan cihazlar geliştirdi. Üç mikro konsantrasyon gradyanlar oluşturmak için bir Mikrokanallı birleştirilir. Epidermal büyüme faktörü (EGF) benzeri bir moleküler ağırlığı ile istikrar ve büyüme faktörü degradelerin şekli floresein isothyiocyanate (FITC)-dekstran tarafından teyit edildi. Bu mikroakışkan cihazı kullanarak, yüksek konsantrasyonlarda maruz fibroblastlar EGF konsantrasyonu degradelere doğru göç ettiğini göstermiştir. Göç eden hücrelerin hücre göç ve hareketlilik yön yönelimi kantitatif hücre izleme analizi ile değerlendirildi. Böylece, bu degrade üreten mikroakışkan cihaz göç eden hücrelerin davranışlarını incelemek ve analiz etmek için yararlı olabilir.

Biz, iyi tanımlanmış mikroçevresinin mekansal ve zamansal degradeleri üretebilir degrade üreten mikroakışkan cihaz mikroimalat için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, degrade üreten mikroakışkan cihaz yönlendirilmiş hücre göçü, embriyogenez, yara iyileşmesi, ve kanser metastazı çalışma için kullanılabilir.

Hücre Biyolojisi Degrade üreten mikroakışkan Aygıt

Hücresel davranışı incelemek için gradyan oluşturan bir mikroakışkan cihazın üretimi ve çalıştırılması anlatılmaktadır. Mikroakışkan platform, bir ...

Benim adım Jiang. Harvard ve MIT Sağlık, Bilim ve Teknoloji bünyesinde poster bursiyeriyim. Benim adım da Amir Manchi ve Harvard, MIT, Sağlık Bilimleri ve Teknoloji bölümleri bünyesindeki Profesör ha SANE laboratuvarında lisans öğrencisiyim.Bu slayt, cihazın nasıl yapıldığının şematik sürecini göstermektedir; böylece silikon buharının üzerine sadece SUA 50 spin kaplama yapıyorum ve ardından silikon buharının üzerine bir maske yerleştirip UV maruziyeti ve geliştirme işlemini uyguluyorum. Sonuç olarak, bu pedleri silikon buharı üzerine yerleştirebiliriz. Bundan sonra sadece PDMS dökümü yapabilir, ardından kürleme ve fırınlama işlemleriyle küçük bir delik açabilir ve son olarak oksijen plazması kullanarak PDMS cihazı ile cam arasındaki bağlamayı gerçekleştirebiliriz.Tamam, şu anda laboratuvar içindeki mikrofabrikasyon odasındayız ve işe bazı PDMS katmanları hazırlayarak başlayacağız. PDMS ile kastettiğim, bilimsel adıyla polimetilsiloksan olup organik bir polimerdir. Bu, en yaygın kullanılan silikon tabanlı organik polimerdir.Aslında iki farklı maddenin karışımıdır; silikon elastomer baz ve silikon elastomer kürleme ajanının bir karışımıdır. Oran, 10 birim baz ve 1 birim kürleme ajanı

a-gradient-generating-microfluidic-device-for-cell-biology

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz hücre yakalama ve kültür etkinleştirebilirsiniz mikroakışkan cihazların imalatı için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, mikroakışkan kanallar içinde oluk gibi desenli mikro, içinde hücre sabitleyebilirsiniz Shear stresin düşük olduğu bölgelerde oluşturmak için kullanılır.

Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt

Bu protokol, chemoeffectors istikrarlı konsantrasyon gradyanlar bakteriyel kemotaksis soruşturma için bir mikroakışkan aygıt geliştirme açıklar.

Kararlı Konsantrasyon Degradeler Bakteriyel Kemotaksis miktarının mikroakışkan Aygıt

Biz temiz oda ya da yumuşak litografi gerek kalmadan, birden çok farklı suşları için benzer dinamik koşullar uygulanarak yeteneğine microfluidic cihazlar üretmek için basit bir yöntem sunulmaktadır.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Canlı hücre göç çalışmaları için bir mikroskop odasında yapıştırıcı ve çözünür degradelerin montajı için bir yöntem tarif edilmiştir. Mühendislik ortamı çözümü degradelerle antifouling yüzeyleri ve yapıştırıcı parçaları birleştirir ve bu nedenle bir rehberlik ipuçları göreli önemini belirlemek için izin verir.

Floresan Mikroskobu ile Görüntüleme Hücre Göç Yapıştırıcı ve Çözünür Degradeler oluşturma

Bu makalede sürekli sigara degrade statik suşlar doku mühendisliği için hücre hizalama düzenleyen konsantrik bir hücre yüklü hidrojel Tarih sağlamak için basit bir yaklaşım sunar.

Hücre yüklü hidrojel uyarıcı hücresel davranışları için degrade zorlanma çip

Bu protokol, aynı zamanda, bir polimer matrisi üzerinden bir ilacın difüzyon hızını belirlemek için kullanılabilir chemoattractants yanıt olarak hücre göçü ölçmek için özelleştirilebilir yöntemi göstermektedir.

Ölçme Hücre Göç Bir Özelleştirilebilir Odası

Kimyasal ve oksijen gradyanlarının kontrolü hücre kültürleri için esastır. Bu makale, hücre göçü çalışmaları için kimyasal ve oksijen gradyanlarının kombinasyonlarını güvenilir bir şekilde üretebilen ve karmaşık enstrümantasyon olmadan biyolojik laboratuvarlarda pratik olarak kullanılabilen bir polidimetilsiloksan-polikarbonat (PDMS-PC) mikroakışkan cihazını bildirmektedir.

Hücre Göç Çalışmaları altında Dik Kimya ve Oksijen Gradyanların için polidimetilsiloksan-polikarbonat mikroakışkan Cihazlar

Tek hücreli de iyi tanımlanmış çevre koşulları içinde kanser dinamikleri uzun vadeli gerçek zamanlı kantitatif çalışmalar için kontrol edilebilir bir platform sağlayan bir mikroakışkan kanser-on-çip modeli, "Evrim Hızlandırıcı" teknolojisi saiyoruz Düzey. Bu teknolojinin temel araştırma veya klinik öncesi ilaç geliştirme için bir in vitro model olarak çalışması beklenmektedir.

Gerçek Zamanlı Gözlem için Mikroakışkan Evrim Hızlandırıcı kanser popülasyonları arasında Heterojen İlaç Gradyanların Üretimi

Gelişimkolektif hücre göçü, yara iyileşmesi, ve kanser metastazı genellikle büyüme faktörleri veya sinyal moleküllerinin gradyanları tarafından yönlendirilir. Burada açıklanan bir mikroakışkan sistem ve biyokimyasal gradyan altında kolektif göç mekaniği ölçmek için nasıl bir gösteri ile çekiş mikroskobu birleştiren deneysel bir sistemdir.

Kemotaktik Kolektif Göç için Mikroakışkanlarla Entegre Çekiş Mikroskobu

Bu protokol, mikrotübül polimer mekaniğini araştırmak için uygun bir mikroakışkan cihazın tasarımını ve üretimini detaylandırır. Mikrofabrikasyon, otomatik akış kontrolü ve hesaplamalı modelleme tekniklerinin sentezi, hücresel hücre iskeletini in vitro olarak araştırmak için ideal olan esnek bir sistem sağlar.

Mikrotübül Polimer Mekaniğinin İncelenmesi için Mikroakışkan Tabanlı Bir Yaklaşımın Geliştirilmesi

Öğrenin hücre biyolojisinde degrade üreten mikroakışkan cihaz mikrofabrikasyonunu. Bu yöntem, yönlü hücre göçü ve embriyogenez gibi süreçleri incelemek için kontrollü mikroçevreler oluşturur.

Hücre Biyolojisi Degrade üreten mikroakışkan Aygıt

Daha fazla video keşfet