Name: C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: 学ぶC57BL/6Jマウスの乳腺移植法。間質細胞と上皮細胞をコラーゲンに包埋し、受容マウスの脂肪パッドに移植して、腫瘍形成における間質・上皮相互作用を解析する。この系は免疫系を保持した生理学的環境で乳がん進行を研究できる。

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このプロジェクトは、NIH / NCIの助成金番号R00 CA127357とカンザスがんセンター基金の大学を通じて資金を供給された。

<ol><li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li>
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<li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li>
</ol>

動物実験： 動物実験は、カンザス大学医療センターのIACUC委員会によって定められたガイドラインおよび規制に準拠して行った。

腫瘍の進行における線維芽細胞の機能的な貢献は、癌関連した線維芽細胞が増加した腫瘍の増殖と浸潤5の良性乳腺上皮細胞の結果と同じ場所に移植した、移植モデルによって実証されている。従来の移植のアプローチは、異なる遺伝的マウスの背景や異なる種からの共移植間質および上皮細胞のSCIDまたはヌードマウスの使用が関与している。免疫不全マウスでは腫瘍特異的抗原と腫瘍細胞の標的とそれに続く、阻害転移拡散6の認識を通して抗腫瘍免疫を媒介する重要な役割を果たしている機能的なT細胞を、欠けている。さらに、最近の研究は、線維芽細胞が新しいアプローチの開発が間質勉強することを示し、免疫細胞の動員7,8の重要な調節因子であることが示されている：上皮細胞の相互作用がより明確に乳腺腫瘍の進行のメカニズムを理解するために必要です。概説する手順は、信頼できる方法を示しています：隔離と文化乳腺上皮と間葉系細胞と同所乳腺腫瘍を形成するために免疫マウスでこれらの細胞を移植。説明する手順を使用して、我々はこのシステムの信頼性を実証する、97％成功した移植料金の上で異なる実験群と別のエンドポイントを使用して40マウスを...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> C57BL/6Nマウス</td><td>ハーラン</td><td> N / </td><td></td></tr><tr><td> MMTV - PyVmTトランスジェニックマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎仔血清</td><td>フィッシャー</td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>フィッシャー</td><td> MT - 30から001 </td><td></td></tr><tr><td>アンフォテリシン</td><td>漁師</td><td> BP2645 - 20 </td><td></td></tr><tr><td>アミコンろ過カラムultracel 50K </td><td>ミリポア</td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td>ベックマンTIローター用チューブ</td><td>ベックマン</td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td>ラットの尾のコラーゲン</td><td>フィッシャー</td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> 10倍EBSS </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> E7510 - 100ML </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン1X、HBSS W / Oカルシウムとマグネシウム0.25％ </td><td>フィッシャー</td><td> MT - 25 - 050 - CI </td><td></td></tr><tr><td>氷酢酸</td><td>フィッシャー</td><td> A491 - 212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie青</td><td>フィッシャー</td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> T3924 - 100ミリリットル</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>シグマAldrichC0130 - 50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNase処理</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td>万華鏡のタンパク質標準</td><td>バイオラッド</td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>フィッシャー</td><td> 12545〜78 </td><td></td></tr><tr><td>ガラス製カバースリップ</td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td>ビメンチン抗体S - 20 </td><td>サンタクルスバイオテクノロジー</td><td> SC - 7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-平滑筋アクチン抗体</td><td>アブカム</td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14抗体</td><td>サンタクルスバイオテクノロジー</td><td> SC - 53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18抗体</td><td>アブカム</td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td>抗マウスビオチン化</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td> BA9200 </td><td>フィッシャーを通じて配布</td></tr><tr><td>抗マウス-アレクサ- 568 </td><td>インビトロジェン</td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td>抗マウス-アレクサ- 488 </td><td>インビトロジェン</td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td>ストレプトアビジン-アレクサ- 488 </td><td>インビトロジェン</td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td>インビトロジェン</td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td>退色を長引かせる</td><td>インビトロジェン</td><td> P - 36930 </td><td></td></tr><tr><td>外科はさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 91400〜12 </td><td></td></tr><tr><td>春のはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 15000〜02 </td><td></td></tr><tr><td>ブラント鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11002〜12 </td><td></td></tr><tr><td> ＃5微細な鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11251〜10 </td><td></td></tr><tr><td>腸クロム縫合</td><td>フィッシャー</td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td>ガラスパスツールピペット</td><td>フィッシャー</td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>フィッシャー</td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> betadine </td><td>漁師</td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td>創傷クリップ</td><td>フィッシャー</td><td> 12032〜07 </td><td></td></tr><tr><td>創傷主食</td><td>フィッシャー</td><td> 12031〜07 </td><td></td></tr></tbody></table>

c57bl/6jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

乳腺腫瘍の進行に対する線維芽細胞を含む間質細胞の影響はよくマウスの乳腺の間質細胞と上皮細胞の移植による、特に、マウスモデルを使用して文書化されています。現在の移植モデルは、しばしば間質細胞と上皮細胞の異なる遺伝的背景に起因する免疫不全マウスの使用を必要とする。細胞外マトリックスは、しばしば一貫性のある細胞間相互作用の2つの異なった種類の細胞を埋め込むために使用されるが、免疫原性基質であるマトリゲルまたはラット尾のコラーゲンの使用を必要としている。免疫不全マウスから機能的なT細胞の欠如は、医薬品開発と有効性に関する重要な意味を持つ、 生体内での乳腺腫瘍の進行に間質細胞の正確な評価を防ぎます。また、免疫不全マウスでは、特別なケアの条件を繁殖し、必要とするのは難しい、コストがかかります。これらの障害を克服するために、我々は、同所一貫性のある腫瘍の形成を誘導するために、同じ遺伝的背景からマウスに間質細胞と上皮細胞を移植する手法を開発しました。このシステムは、ドナーC57BL/6Jマウスから通常、癌関連線維芽細胞、PyVmT乳癌細胞とコラーゲンを収穫伴います。次に、細胞をコラーゲンに埋め込まれ、雌のC57BL/6Jマウスの鼠径部乳腺に移植されています。単独でPyVmT細胞の移植は、明白な腫瘍の30〜40日後に移植を形成する。 60日でのエンドポイント解析は、その線維芽細胞との共移植が単独で移植PyVmT細胞と比較して乳腺腫瘍の成長を促進することを示します。 C57BL/6Jマウス由来の細胞とマトリックスはこれらの研究で用いていたが、細胞とマトリックスと移植のアプローチの分離は、汎用性を実証するさまざまな遺伝的背景からマウスの方に適用されることがあります。要約すると、このシステムは、間質細胞と上皮細胞間の分子間相互作用を調査するために使用すること、および免疫不全マウスモデルでの重要な限界を克服しています。

このレポートでは、我々はマウス乳腺から分離し、培養ドナー細胞にシステムのデモンストレーションを、と同所間質分析するためにレシピエントマウスにこれらの細胞を移植：乳腺腫瘍の開発中に上皮との相互作用を。

C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植

線維芽細胞を含むストローマ細胞が乳腺腫瘍の進行に及ぼす影響は、マウスモデル、特に…を用いることで十分に立証されています。

本手順の全体的な目的は、MA間質細胞および上皮細胞を移植し、移植後の腫瘍形成に対する間質・上皮相互作用の影響を研究することである。まず、C57BL/6マウスから尾部組織を採取し、ドナーコラーゲンを抽出する。次に、正常マウスおよび/またはMMTV-PyVMTトランスジェニックマウスからドナー線維芽細胞および上皮細胞を単離し、培養する。C57BL/6のバックグラウンドにおいて、これらの細胞をコラーゲンに包埋し、円形プラグとして組織培養プレートに播種する。最後に、コラーゲンに封入された細胞を、レシピエントマウスの鼠径部乳腺の脂肪パッドに移植します。このシステムを用いることは、条件付きノックアウトマウスの作製や免疫不全マウスへの移植といった既存の手法と比較して、いくつかの利点があります。その一つは、このシステムが比較的容易に構築できることです。もう一つの利点は、レシピエントマウスの免疫系が維持されているため、乳癌の進行過程における特定の分子の役割や間質・上皮間の相互作用を解析できることです。これらの手法の実演を行うのは、私の研究室のリサーチアシスタントであるDiana Lambertです。承認済みのIACUCの方法に従って成熟した正常な雌のC 57 black sixマウス5〜7匹を安楽死させた後、尾部を採取し、滅菌のため70% ethanolに45分間浸します。ティッシュペーパーで尾を乾かします。アルミホイルで包み、使用するまで-20 °Cで保存します。層流クリーンベンチ内で、まずハサミを使って尾の先端を切り取り、次に尾の付け根の皮膚を切り裂いて、尾から剥がします。尾の両端から0.5〜1 cmを切り取り、残りの部分を3〜4等分にします。尾から腱を摘出し、個々の繊維に分離します。メスまたはカミソリを使用して、繊維を小さなwebo boatに入れます。次に、腱線維を滅菌容器に移し、滅菌蒸留水で洗浄します。その後、液量の大部分を吸引して除去します。線維を含む残りの水をウェイボートに注ぎ、さらに35 mLの氷酢酸を含む50 mLコニカルチューブに移します。ペニシリン、ストレプトマイシン、およびアムホテリシンを含む滅菌脱イオン水で500倍に希釈します。コラーゲンを抽出するため、ロッカーに載せ4 °Cで1週間置きます。卓上遠心機を用い、4 °C、3000 Gsで15分間遠心分離してデブリを沈殿させます。上清をBeckman 50.2 TIローター適合のポリカーボネートチューブ2本に移し、35,000 G、4 °Cで1時間遠心分離して、上清を1〜2 mg/mLまで濃縮します。これをUltraCell 50K AmConろ過ユニットに移し、3000 RPM、4 °Cで15分間遠心分離します。液量が5〜6 mLになるまで、この遠心操作を繰り返します。ろ液を滅菌コニカルチューブに移し

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乳腺上皮移植の手順

この記事では、乳がん細胞を乳腺脂肪パッドに注入することにより、雌マウスの乳がんモデルを確立する方法について説明します。この例のプロトコルは、同所性注射を示しています。...

乳腺脂肪パッドへの同所性注射:マウスにおける乳がんの確立

このビデオは、マウスモデルでの乳がんの同所性接種技術を示しています。この技術は、皮下注射または非外科的注射と比較して、腫瘍のサイズと形状のばらつきが少なく、高い腫瘍形成率を生み出します。...

同所性注射:成体マウスへの組織特異的がん細胞の移植

臨床的に関連する転移性乳癌における乳管系の結果へのアデノウイルス-Creを持つ潜在変異の活性化。 YFPプロモーターの組み込みは、遠位の転移性腫瘍細胞の追跡を可能にする。このモデルは、潜在性転移、抗腫瘍免疫、および乳癌を治療するための新規な免疫療法を設計するための研究に有用である。...

乳癌の新規トランスジェニックマウスモデル：アデノ-Creを持つ乳管上皮の標的とすることにより、転移性乳癌の開始

癌は、腫瘍の周囲の組織だけでなく、ローカルプロ - および抗炎症性メディエーターによって影響される複雑な疾患である。したがって、むしろ皮下モデルより異方性注入モデルは、方法をより良く模倣するヒト病理における癌の進行を研究するために有用であり得る。...

腫瘍増殖を研究するためにマウスの乳房脂肪パッド中に乳癌細胞の同所注入。

乳癌の転移を標的としたアジュバント療法を評価する前臨床モデルは欠けている。これに対処するために、本発明者らは、アジュバント設定（原発腫瘍の外科的切除後）で投与された治療が、以前に播種された肺転移に影響を及ぼす有効性について評価され得る、 新規な肺乳腺腺癌転移のマウスモデルを開発した。...

前臨床マウスモデルのための外科手術手順および方法論デ・ノヴォ乳がん転移

マウス実験乳房癌モデルと人間の胸の癌の進行を模倣する腫瘍負荷を定量化する発光技術と根治的乳房切除モデルを紹介しています。...

マウス実験転移性乳癌癌モデルを生成、およびマウス乳癌根治術を実行

ここでは、侵襲性、ハンドル簡単方法は、以下の単純な乳腺の脂肪パッドに乳がん細胞を注入するためのプロトコルを提案して適切な乳腺脂肪パッド環境とこのマウス実験乳房のがんモデルはの様々...

マウス乳腺の脂肪パッドに乳癌細胞の同所性同種注入

本研究は、緑色蛍光タンパク質および生物発光シグナルの検出と定量的分子検出技術の統合によって腫瘍負荷を正確に評価するための高度なプロトコルをプリセットする。...

交感性乳癌モデルを用いたトリプルネガティブ乳癌の研究

本稿では、レシピエント動物の間肩甲膜白色脂肪パッドにドナーラット乳腺上皮細胞を移植する移植方法について説明する。この方法は、乳腺上皮発生に対する宿主および/またはドナーの影響を調べるために使用することができ、事前にクリアする必要がなくなり、この技術の有用性を拡張する。...

間肩甲膜白脂肪パッドへのラット乳腺上皮細胞移植

患者由来異種移植片(PDX)モデルおよび移植可能な遺伝子組み換えマウスモデルは、ヒト疾患を忠実に再現し、基礎的および翻訳的な乳癌研究のための好ましいモデルである。ここで、乳房腫瘍断片を乳腺脂肪パッドに整形移植して腫瘍生物学を研究し、薬物反応を評価する方法について説明する。...

乳癌の前臨床モデルとしての乳房腫瘍の移植性

学ぶC57BL/6Jマウスの乳腺移植法。間質細胞と上皮細胞をコラーゲンに包埋し、受容マウスの脂肪パッドに移植して、腫瘍形成における間質・上皮相互作用を解析する。この系は免疫系を保持した生理学的環境で乳がん進行を研究できる。

C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植

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