September 1st, 2011
و في الجسم الحي التصوير بروتوكول لرصد المحاور العصبية الحسية الأولية التالية سحق الجذرية الظهرية. إجراءات استخدام واسع الحقل المجهري مضان وthy1 - YFP الفئران المعدلة وراثيا ، والسماح التصوير المتكرر للتجديد لأكثر من 4 سم محور عصبي في الجهاز العصبي المحيطي والتفاعلات محوار مع واجهة للجهاز العصبي المركزي.
الهدف العام من هذا الإجراء هو التحقيق في تجديد الجذر الظهري من أجل اكتشاف وسيلة للحث على تجديد كبير بعد إصابات جذر العمود الفقري. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء استئصال الصفيحة الفقرية الشوكية أولا الذي يكشف عن الجذر الظهري L الخمسة الأيمن ويسمح بتصور المحاور الإيجابية المسماة YFP في الحبل الشوكي والجذر الظهري. بعد ذلك ، يتم سحق الجذر الظهري L الخمسة بعناية لضمان الحد الأدنى من النزيف.
ثم يتم تصوير موقع السحق بعد التكسير للتحقق من موضع الجذر الظهري المصاب في الآفة. على مدار عدة نقاط زمنية ، يتم تصوير موقع الإصابة ومنطقة دخول الجذر الظهري لتحديد قدرة المحاور التالفة على التجدد في النخاع الشوكي. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر أن المحاور المتجددة يتم تجميدها بسرعة وتظل ثابتة عند دخولها منطقة دخول الجذر الظهري أو DREZ.
الميزة الرئيسية لهذه التقنية على التقنيات الحالية مثل التصوير في ميت ، هي أنه يمكننا تصوير هذا النظام في حي بشكل متكرر على مدى أسابيع أو حتى أشهر. ضع أولا وسادة تسخين يتم التحكم فيها حراريا تحت مجهر استريو فلوري واضبط الإخراج على 32.5 درجة مئوية على وسادة تسخين ، معدلة إلى 32.5 درجة مئوية محلول رنين معقم دافئ مسبقا إلى 32.5 درجة مئوية لري الحبل الشوكي أثناء الجراحة ، قم بتخدير بحقن داخل الصفاق من كوكتيل الزيلازين والكيتامين. يتم أيضا إعطاء جرعة أولية من البوبرينورفين المسكن تحت الجلد.
يتم تحقيق مستوى مناسب من التخدير عندما يكون المنعكس الملموس غائبا ولا يستجيب لقرصة إصبع القدم. بمجرد تأكيد التخدير ، حلق الجزء العلوي من الظهر باستخدام مقصات الصغيرة وانشر قطرة صغيرة من غسول إزالة الشعر على المنطقة المحلوقة باستخدام مسحات قطنية ذات رؤوسة. بعد دقائق ، قم بإزالة المستحضر المطبق وأي فرو متبقي بالماء والصابون.
أخيرا ، باستخدام إسفنج شاش مبلل بالإيثانول بنسبة 70٪ لتنظيف المجال الجراحي تماما. ضع على وسادة التدفئة وقم بتطهير الجلد بمسحات مبللة بالإيثانول بنسبة 70٪. يجب استخدام ستارة جراحية معقمة لأغراض العرض التوضيحي.
لم يتم عرضه في هذا الفيديو. تحت إضاءة المجال الساطع على المجهر الاستريو ، قم بعمل شق خط الوسط من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات في جلد الظهر. إذا لزم الأمر ، استخدم مسحات قطنية لوقف النزيف.
تعكس عضلات العمود الفقري بملقط رفيع وفكي العظام. لكشف الفقرات القطنية الأساسية. قم بتعريض الأجزاء الشوكية من L ثلاثة إلى S واحد عن طريق استئصال الصفيحة الصفيحية النصفية على الجانب الأيمن باستخدام محلفين صغار ثم قم بتفريخ التجويف بمحلول جرس معقم دافئ.
ضع على وسادة دعم مصنوعة من شاش القطن الملفوف. لتسطيح العمود الفقري. استخدم خطافات التراجع لتوسيع المنطقة المكشوفة.
في هذه المرحلة ، بعد حوالي 30 دقيقة من الحقن الأول للمخدر ، يجب حقن مكمل غذائي للحفاظ على مخدرا تماما. قم بالتبديل إلى إثارة الفلورسنت لتصور سبب تسمية المحاور FP. باستخدام طرف إبرة قياس 27 ونصف ، قم بإجراء شق صغير في الجافية التي تعلو L خمسة جذر ظهري بشكل متكرر بمحلول رنين ونظفها برفق باستخدام مسحات قطنية مائلة.
حدد الموقع المراد سحقه والتقط صورا للمنطقة المكشوفة بأكملها غير التالفة. سيساعد هذا في تحديد موقع الإصابة في جلسات التصوير اللاحقة. ثم أدخل جانبا واحدا من زوج من الملقط الناعم.
أغلق الملقط برفق ولكن بإحكام مع إمساك الجزء الإنسي من الجذر L five لمدة 10 ثوان ، ثم حرر الملقط برفق. يغسل بشكل متكرر بمحلول فسيولوجي وينظف برفق باستخدام مسحات قطنية ذات رؤوسة. احصل على صور متعددة للمنطقة المكشوفة بأكملها ، بما في ذلك موقع السحق و DREZ قبل وبعد السحق مباشرة بتكبير منخفض ومرتفع.
بعد التصوير بإحكام ، ضع قطعة من غشاء المصفوفة الاصطناعية الرقيقة متبوعة بالجافية الاصطناعية فوق الحبل الشوكي المكشوف ، بحيث تتناسب بدقة مع نافذة الحبل الشوكي المكشوفة. أغلق العضلات بخيوط معقمة من خمس خيوط أوه وأغلق شق خط الوسط بمشابك الجرح. حقن محاليل الرنين تحت الجلد وإعطاء البوبرينورفين كمسكن بعد الجراحة عن طريق الحقن العضلي كل 12 ساعة لمدة يومين.
قم بتخدير بالزيلازين والكيتامين كما هو موضح سابقا ، وقم بإزالة مقاطع الجرح والخيوط. قم بإزالة الجافية الاصطناعية وبقع غشاء المصفوفة الاصطناعية الرقيقة واحتفظ بها في أنبوب معقم يحتوي على محلول جرس لإعادة استخدامها لاحقا. بعد ذلك ، قم بإزالة أي نسيج ندبي ضام متراكم برفق باستخدام الطرف المنحني لإبرة قياس 26 والملقط الدقيق الذي يتم نقعه بشكل متكرر بمحلول رنين دافئ.
أعد تعريض المجال التشغيلي ، بما في ذلك موقع السحق ومنطقة دخول الجذر الظهري ، وقم بنقل المحاور المسماة YFP التي تم تصويرها في الجلسات السابقة لمواصلة التصوير على التجديد. هنا تظهر أربعة محاور سطحية تحمل علامة YFP مشار إليها بأسهم ملونة مباشرة بعد السحق. بعد ثلاثة أيام من السحق ، تمتد جميع المحاور الأربعة إلى نيورايت واحد ينمو من خلال موقع السحق كما هو موضح في يومين وخمسة بعد السحق.
تظل الخلايا العصبية مستقرة ولا يوجد نمو إضافي من هذه المحاور القريبة أو غيرها. في اليوم الرابع ، تكون الخلايا العصبية المتجددة أرق وخافتة من المحاور المحفوظة. يكشف التصوير المتكرر لهذه المحاور في أطرافها كل يومين أو ثلاثة أيام لمدة أسبوعين آخرين أنها لم تنمو للأمام أو تتراجع ، لكنها ظلت غير متحركة مع تورم أطراف وأعمدة بعض المحاور.
بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تعريض وتسحق ومراقبة L five do do root من أجل فهم الآليات التي تحظر أو تعزز التجدد المحوري بشكل أفضل.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تقدم هذه المقالة بروتوكول تصوير داخل الجسم لمراقبة المحاور الحسية الأولية بعد سحق الجذر الظهري. باستخدام التصوير المجهري بالفلورسنت واسع المجال والفئران المعدلة وراثيًا التي تعبر عن thy1-YFP، تتيح الطريقة التصوير المتكرر لتجديد المحاور على مسافة 4 سم في الجهاز العصبي المحيطي وتفاعلاتها مع واجهة الجهاز العصبي المركزي.