Name: 정상과 비정상적인 인간 조혈의 전직 생체내 흉내 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: 학습하세요 3D 배양 시스템을 이용한 정상 및 비정상 조혈 연구 방법입니다. 폴리우레탄 스캐폴드와 탯줄혈 단핵세포를 사용하여 골수 유사 환경에서 세포 성장을 분석하고 혈액 질환 치료법을 탐색하는 실험 모델을 구축합니다.

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이 작품은 리처드 토마스 Leukaemia 기금, 레이디 타타 기념관 신탁, Northwick 공원 병원 Leukaemia 연구 신탁 기금 및 건강 연구의 국립 연구소 (NIHR), 영국에 의해 재정 지원되었다.

1. 공사장 공중 발판의 발판 제조 및 바이오 작용화 <ol><li> 배양 접시 디스크의 형태로 우레탄 공사장 공중 발판 (기공 크기 1백~2백50밀리미터, 다공성 90~95%)를 조작하려면 다음 폴리머 솔루션 (Dioxan에서 5wt %)를 준비하여 열 유도된 상 분리에게 13 프로세스를 사용하여 동결 이후 용매 승화 (그림 1A). </li><li> ECM 단백질 (그림 1B)와 코팅 이전 0.5 X 0.5 X 0.5 mm의 조각으로 발판 디스크를 자르고. </li><li> 다음 1 분 및 인산으로 전송을 위해 에탄올 (70 %)에서 그들을 immersing하여 사전 서부 유럽 표준시 공사장 공중 발판은 20 분 동안 (PBS) 염분 버퍼. 그렇다면 3,630 XG에 10 분 동안 원심 분리기와 단백질 솔루션을 추가합니다. </li><li> 20 분 대한 1,420 XG에서 단백질 용액에 공사장 공중 발판을 원심 분리기. </li><li> 표면 모공 차단을 해제하고, 발판에 깊이 침투하는 놓는 세포를 허용하기 위해서는 10 분 동안 910 XG에 한 번만 더 공사장 공중 발판 원심 분리기PBS 인치 </li><li> 에탄올 2 H (70 %)에 대한 침수와 230 V, 50 Hz에서, 0.14, 자외선 램프,시 8 분 노출의 조합을 사용하여 공사장 공중 발판을 소독. 그 후, 30 % 태아 소 혈청 (FBS) 및 1퍼센트 페니실린과 스트렙토 마이신 (P / S)와 함께 보충 Iscove의 수정일 Dulbecco 중간 (IMDM)를 추가하기 전에 PBS로 두 번 공사장 공중 발판을 씻는다. ° C에서 5 % CO 2는 이전에 사용하기 37 3 일간 humidified 인큐베이터에서 공사장 공중 발판을 놓으십시오. 멸균 공사장 공중 발판은 24 잘 조직 배양 플레이트 (물론 당 하나 비계)에 배치됩니다. </li></ol> 2. Mononuclear 세포 분리 및 비계를 심는 <ol><li> Ficoll-Paque 밀도 기울기 원심 분리 (1500 rpm으로 35 분) (그림 1C)를 사용하여, 코드 혈액 또는 leukemic 골수 샘플로부터 인간 MNC의 압축을 풉니다. </li><li> IMDM의 Resuspend MNC 30 % FBS와 1 % P / S.를 포함하는 </li><li> 마이크로 피펫을 사용하여 공사장 공중 발판쪽으로 MNC 서스펜션의 종자 100μl (2 × 10 6 세포 / 비계). </li><li> 공사장 공중 발판으로 정착하는 세포에 대해 10 분 동안 5 % CO 2 하에서 37 ° C에서 씨앗을 품고 공사장 공중 발판을 품어. </li><li> 37시 인큐베이터 30 % FBS와 1 % P / S와 장소도 접시를 포함 IMDM 1.5 ML 각 잘 더더 이동 ° C와 실험 기간 동안 5퍼센트 CO 2. </li><li> 씨앗을 품고 공사장 공중 발판은 모든 미디어 일일 변경될 받고있다. </li></ol> 3 원위치 세포 증식과 형태론의 경우 :. MTS, SEM 및 Cytospins <ol><li> MTS 분석 : 문화 한 해제 번시드인하고 깨끗한 24 개의 새 항목 잘 플레이트에서 두 씨앗을 품고 공사장 공중 발판과 장소에서 제거합니다. 미디어 1 ML 37에서 MTS 솔루션 및 3 시에위한 품어 200 μl를 추가 ° C에서 5 % CO 2. <ol><li> microplate 판독기를 사용하여 490 nm의시 96 - 웰 플레이트 및 측정 흡광도에서 개최하며 뜨는에서 8 X 100 μl 샘플을 가져가라. </li></ol></li><li> 일 중 다른 시간 시점 : 전자 현미경 (SEM)을 스캔전자 문화, 미디어에서 MNC로 놓는 공사장 공중 발판을 제거하고 4에 40 분 2.5 % PBS 버퍼 글루 타 알데히드 용액 ° C로 고정 후 PBS로 두 번 씻는다. <ol><li> 탈수 4 시간 동안 무균 환경에서 10 분 건조를위한 에탄올의 등급 시리즈 (25, 50, 70, 80, 90, 95 및 100 %), 각각의 공사장 공중 발판. </li><li> 섹션 표본 후 사전 SEM 평가 2 분 아르곤 분위기 속에서 금을 스퍼터 코팅 그들은 20 kV의 가속 전압을 사용합니다. </li></ol></li><li> Cytospins : 문화에서 다른 시간 시점에서 발판에서 세포를 aspirating하여 2.0 X 10 4 세포 / 슬라이드를 수집합니다. <ol><li> 1,500 RPM에서 3 분 유리 슬라이드에 세포를 원심 분리기. </li><li> 라이트-Giemsa 수정된 청바지와 광학 현미경을 사용하여 관찰과 함께 슬라이드를 청바지. 소프트 이미징 시스템은 사진을 찍는하는 데 사용할 수있는 F-봅니다. </li><li> 현미경 관찰 이전 슬라이드를 씻으십시오. </li></ol></li><li> M<html> ultiphoton 분석 : 자세한 분석 시까지 -20시 에탄올 증기 (70 %) 숙박 후 건조하고 매장 ° C와 다른 시간 지점에서 픽스 공사장 공중 발판. 이전 multiphoton 현미경의 30 μm의 두께의 슬라이드로 섹션 비계 및 PBS와 젖은와 시각화합니다. <ol><li> 상온에서 30 분 10 % 태아 소 혈청으로 PBS에 씨앗을 품고 공사장 공중 발판을 차단합니다. </li><li> 마우스 안티 인간 CD71를 : ° C ~ 어둠 속에서 기본 단클론 항체의 1시 50분 희석과 4에서 공사장 공중 발판이 하룻밤 사이에 알을 품다. </li><li> PBS에서 샘플을 세 번 씻고 이차 항체에 얼룩 : 어둠의 실온에서 1 H를위한 안티 마우스 알렉사 형석 488. </li><li> PBS로 샘플을 세 번 씻고 물 방출 x60 목표 렌즈를 사용 공촛점 현미경으로 관찰합니다. </li><li> 형광단 알렉사 형석 488은 타악기 레이저로 488 nm의에서 흥분한다. Volocity 5.3.2 소프트웨어는 이후의 이미지 분석에 사용될 수 있습니다. </li></ol></li></ol>세포 인구 &quot;&gt; 4 jove_title. 흐름 Cytometric 분석 <ol><li> 흐름 cytometer (FC)의 세포 분석하기 전에 검출에 해당 immunofluorescence 항체와 관심 세포에 라벨을 달고. 샘플의 수를 검출을위한 선택된 항체에 따라 준비가되어 있습니다. MNC 검출 항체의 경우 다음과 같은 조합이 사용됩니다 : CD45-FITC/CD71-PE/CD235a-PE-Cy5. </li><li> 다른 시간 지점과 원심에 있던 발판에서 세포를 기음. 100 μl FC 완충액 (PBS + 0.1 % 나트륨 azide)에서 6 1x10 주변 세포의 세포 펠렛를 해산하고 각 항체 형광 색소의 10 μL를 추가합니다. 4에 30 분 ° C에 대해 세포를 품어, PBS로 두 번 씻어 마침내 FC 버퍼에 다시 일시 중지합니다. </li><li> 항체 표현의 &quot;부정적&quot;를 설정하고 흐름 cytometer 컨트롤과 함께 검출 채널을 교정 isotype 제어 흐름 cytometer의 스테인드로 샘플을로드합니다. </li><li> 샘플 스테인드 w 읽기<html> 세 가지 다른 항체 ith 그리고 마지막 WinList 소프트웨어를 사용하는 데이터를 나타냅니다. </li></ol> 5. 대표 결과 외인성 성장 요인 이외없이 조혈 세포 성장 속도론의 예제는 그림 2에 표시됩니다. 조혈의 이질적인 성격, 서로 다른 두 가지 세포로 인해 : 정상과 비정상 조혈 세포는 그림하고 있습니다. 그림 2A에서 인간 CBMNC의 세포 증식은 문화가 28 일 후에 분명하다. 그림 2B는 인간의 기본 leukemic 세포를 사용하여 흉내의 성장 속도론을 보여줍니다. 세포의 증식은 흡광도와 관련하여 세포 신진 대사 활동을 측정하는 MTS 분석을 사용하여 평가된다. 두 경우 모두, 세포가 확산하고 모델에서 설립. 성장 속도론의 차이가 관찰되며, 문화를 구축 정상 조혈 세포를 빠르게 leukemic 세포보다. 공사장 공중 발판의 _content &quot;&gt; 외인성 성장 요인 부재의 문화의 28 일 정상 조혈 세포 (그림 3A)와 leukemic 세포 (그림 3B)의 전형이었다 후에도 수확 세포의 형태. 중앙 부분은 후 SEM으로 분석되었다 공사장 공중 발판은 문화에서 제거하고 클러스터에와 &quot;틈새 같은&quot;구조 (그림 3A &#39;&amp; B&#39;)에서 자신을 설립, 발판에 걸쳐 씨앗을 품고 세포의 확산을 보여주되었다. 그림 C는 보여준다 unseeded의 기공 크기와 분포 비계는 컨트롤로 사용됩니다. 28일 후 Multiphoton 현미경은 원래의 장소에 3D 발판 내에서 세포의 분포를 강조하기 위해 사용하고 마커의 표현에 의해 (그림 4) 비계의 중앙 섹션에 erythroid 섬의 존재를 보여주되었다 erythroblasts에 긍정적이다. CD71 이것은 성숙하고 성숙 세포 뒤의 중요성을 증명링 적혈구 조혈. 인간 CBMNCs 및 그림 5B 비정상 조혈 세포 설명 : 기본 leukemic 세포를 마지막으로, 세포 사전 시딩의 유동세포계측법 그래프는 그림 5A가 정상 조혈 세포를 대표하는 조혈 세포의 표현형의 차이를 보여줍니다. CD235a의 수준 + 및 CD45 + 각각 leukemias의 hemoblastic 성격을 강조 leukemic보다 일반적인 샘플에 높은 있습니다 적혈구 및 leukocytes에 대응. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3654/3654fig1.jpg" /> 그림 1. 우레탄 발판 제조 및 바이오 작용화에 관련된 프로세스의 삽화. ) 우레탄은 Dioxan (5wt %)에 녹아 있으며, 열 유도된 상 분리 공정 및 후속 용매 승화하여 발판 Safinia 외 13에서 설명한 바와 같이, 생산하고 있습니다. B) 비계 디스크는 다음 INT 절단되어O 장치의 큐브 0.5 X 0.5 엑스트라 셀룰러 매트릭스 (ECM) 단백질과 원심 분리에 의해 코팅 X 0.5 mm 후. C) MNC는 인간의 탯줄 CB이나 micropipette으로 밀도 구배 원심 분리 및 우레탄 공사장 공중 발판에 씨앗을 (2x10 6 셀 / 비계)를 사용 BM 흡출됨으로써 압축이 풀립니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3654/3654fig2.jpg" /> . 그림 2 세포 증식은 MTS 분석을 사용하여 측정 :) 인간의 탯줄 혈액 MNCs 사용하는 인간의 기본 leukemic 세포를 사용하여) B를. 외인성 크린 시토킨의 추가없이 우레탄 공사장 공중 발판에 놓는 때 열은 시간에 따른 세포의 성장을 보여줍니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3654/3654fig3.jpg" /> 그림 3 : 공사장 공중 발판 주위 세포 형태학 및 유통이 scanni를 cytospins를 사용하여NG 전자 micrographs. (AB) 문화의 28 일 후에 우레탄 공사장 공중 발판에서 수집한) 코드 혈액 mononuclear 세포의 대표 라이트-Giemsa 스테인드 cytospins 및 B) 뼈 aspirated leukemic 세포 문화 날로부터 14 일 후 우레탄 공사장 공중 발판에서 수집했습니다. 두 실험 시토킨 자유로운 상태로 진행​​되었다. (A&#39;-B &#39;)) 씨앗을 품고 코드 혈액 MNCs와 B&#39;) 28 일 동안 배양해 거쳐 leukemic 세포없이 세포와 C) 제어 비계의 우레탄 발판 SEM의 micrographs 대표 중앙 섹션 &#39;. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3654/3654fig4.jpg" /> 그림 4. erythroid 마커 CD71과 문화와 스테인드 28 D 후 탯줄 혈액 MNCs와 우레탄 발판 씨앗의 Multiphoton의 현미경. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3654/3654fig5.jpg" /> 그림 5. 유동세포계측법 3D 도트 플롯은 CD45, CD71 및 CD235a 표면 발현 마커에 대해 묻다. 얻은 isotype 컨트롤도 상대 형광 강도의 비교를 위해 제공됩니다. 패널은 위의 마커에 대한 긍정적인 인간 코드 혈액 mononuclear 세포를 보여줍니다, 패널 B는 인간의 기본 leukemic 세포를 보여줍니다.

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</ol>

우리는 공개 할게 없다.

여기서 제시 전직 생체내 3D 문화 시스템은 우리가 조혈의 3D biomimicry를 확립 수 있도록 그 recapitulates 원래 BM 건축과 외인성 크린 시토킨의 독립 세포 표현형. 3D 모델은 구조와 정상 및 비정상 조혈 세포가 생체내에 발생한 것과 유사한 조건에서 분아 따위에 의해 중식 수 microenvironment를 제공합니다. 고분자 비계 재료의 선택 biomimicry 디자인에 중요한 단계를 나타낸다. biomaterials의 중요 장점은 필요한 건축, 구조적 속성과 필요한 biosignals을 제공하여 생체내 환경을 모방 고분자에 점점 관심을 이끌고있다. 그들의 즉각적인 환경에 민감 살아있는 세포와 직접 접촉에 항상 있기 때문에 고분자는 biomedicine 그들의 응용에 필수적인 최소 요구 사항을 충족해야합니다. 일반적으로 전거래 발판이 정의된 3 차원 구조, 부피 비율 및 재현성 제조 당 높은 표면적을 ...

<table><tbody><tr><td>Dioxan</td><td>Invitrogen</td><td>D20,186-3</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Invitrogen</td><td>12440-053</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>MTS</td><td>Promega Corp.</td><td>G3580</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde</td><td>Fluka</td><td>49624</td><td></td></tr><tr><td>Wright-Giemsa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WG32</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(Fetal bovine serum)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10108-165</td><td></td></tr><tr><td>CD71</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-32272</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td></td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>74895</td><td></td></tr><tr><td>CD71-PE</td><td>BD Biosciences</td><td>555537</td><td></td></tr><tr><td>CD235a-PE-Cy5</td><td>BD Biosciences</td><td>555570</td><td></td></tr><tr><td>Sodium azide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-8032</td><td></td></tr></tbody></table>

정상과 비정상적인 인간 조혈의 전직 생체내 흉내

Ex vivo Mimicry of Normal and Abnormal Human Hematopoiesis

골수 (BM)은 spatially 조직 세포 microenvironments에 의해 규제되는 복잡한 입체 (3D) 조직이 어떤 점에서의 조혈입니다 틈새에게 2-4 되나, 조혈 줄기 세포는 혈액 세포 형성 1을 유지하기 위해 독특한 microenvironment를 필요로합니다. BM 틈새의 조직은 정상 또는 악성 BM 5의 기능 또는 기능 장애에 중요합니다. 따라서 전직 생체내의 흉내를 사용하여 생체내 microenvironment에의 이해 우리 leukemogenesis 6, 분자 세포 및 microenvironmental determinants을 명료하게하다 도움이 될 것이다. 현재 조혈 세포 중 allogenic 또는 이종 개체의 stromal 세포와 공동의 문화 또는 외인성 크린 시토킨 8의 추가 요구 (2D) 2 차원의 조직 문화 flasks / 잘 접시 7에서 체외에서 배양해 있습니다. 이러한 조건 인공 있으며 생체내에 따라 다를 </eM&gt;은 3D 휴대폰 틈새 시장이 부족하고 pluripotency 9,10의 분화 및 손실을 초래할 수있는 비정상적으로 높은 시토킨 농도로 세포를 노출 점에서 microenvironment. 여기, 우리는 생체내 3D 성장 환경에서을 시뮬레이션 및 외인성 성장 요인 부재에 multilineage의 조혈을 지원하는 새로운 3D 골수 배양 시스템을 제시한다. 폴리 우레탄 (PU)으로 만들어진이 시스템에 사용되는 높은 다공성 발판은 2D 11에서 기존의 단일층 문화보다 높은 특정 표면 영역에 걸쳐 고밀도 세포 성장을 용이하게합니다. 우리의 연구는이 모델은 인간의 탯줄 혈액 (CB) mononuclear 세포 (MNC) 외인성 크린 시토킨의 부재에서 12 일차 leukemic 세포의 성장을 지원하는 것을 시사하고있다. 이 소설 차원 흉내는 조혈을 연구하고 백혈병에 대한 새로운 치료법을 탐구하는 인간의 실험적인 모델의 개발을위한 실행 가능한 플랫폼을 제공합니다.

조혈을위한 3D 문화 시스템은 인간 코드 혈액과 leukemic 골수 세포를 사용하여 설명합니다. 방법은 세포외 기질 단백질로 코팅 다공성 합성 폴리 우레탄 발판의​​ 사용을 기반으로합니다. 이 발판은 세포의 광범위한 수용하는 적응이다.

조혈모세포는 혈구 형성을 유지하기 위해 독특한 미세환경이 필요합니다. 골수(BM)는 복잡한 3차원적...

다음 실험의 전반적인 목표는 정상 및 비정상적 조혈 작용을 재현하는 ex vivo 모델을 구축하는 것입니다. 이는 열 유도 상분리법(TIPS)을 사용하여 폴리우레탄으로 제작된 스캐폴드를 제작함으로써 달성되며, 이를 통해 페트리 접시 형태의 다공성 비생분해성 스캐폴드가 생성됩니다. 그다음, 스캐폴드를 큐브 형태로 절단하고 세포 부착을 돕기 위해 세포외 기질 단백질로 코팅합니다. 세포를 파종할 때, 스캐폴드는 UV와 에탄올을 사용하여 멸균하며, 파종 전까지 배지에서 배양합니다.다음 단계는 스캐폴드에 파종하는 데 사용될 제대혈 샘플에서 단핵구를 분리하는 것입니다. M-T-S-S-E-M 및 유세포 분석법 데이터에 기반한 결과에 따르면, 본 모델은 외인성 사이토카인이 없는 상태에서도 인간 제대혈 단핵구와 일차 백혈병 세포의 성장을 지원하는 것으로 나타났습니다. 이 방법은 세포 상호작용 연구를 위한 골수 실험 모델 구축 및 새로운 치료법 탐색과 같이 피부과 분야의 핵심적인 문제들을 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다.백혈병의 경우, 이 방법은 골수의 ex vivo 생체 모방 환경을 제공할 수 있습니다. 또한, 이 방법은 신경 세포와 같은 다른 시스템에도 적용하여 신경망의 in vitro 재구성을 수행함으로써, 자연적인 신경 돌기 성장을 이해하기 위한 모델로 활용하거나 신경계 질환을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 응용 범위는 혈액 관련 질환인 백혈병 치료까지 확장될 수 있는데, 이는 인체와 유사한 환경에서 다양한 약물의 치료 효과를 테스트할 수 있기 때문입니다.90 millimeter 페트리 접시 디스크 형태의 PU 스캐폴드를 제작하려면 열 유도 상분리 공정을 사용하십시오. 간단히 설명하면, 스캐폴드당 60 millimeters의 폴리머 용액을 준비합니다. 용액을 디스크 몰드에 0.5 centimeters 깊이로 붓고, 몰드를 냉각시킨 후 용매가 승화되도록 둡니다.그 후 동결 후 팁 장비를 설정하고, 스캐폴드 디스크를 0.5 centimeter 정육면체로 절단합니다. 스캐폴드 큐브를 70% ethanol에 1분 동안 담가 전처리한 다음, PBS로 옮겨 20분 동안 둡니다. PBS 배스 처리 후, 큐브 20개를 50 milliliter 원추형 튜브에 넣고 스캐폴드를 원심 분리합니다.다음으로, 각 원뿔형 튜브에 ECM 단백질 용액 40 milliliters를 넣고 원심 분리합니다. 다시 한번 단백질 용액을 제거하

ex-vivo-mimicry-of-normal-and-abnormal-human-hematopoiesis

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

표준 배양 방법에 세포 생리 학적 환경 꺼내하고 접시의 플라스틱 표면에 성장합니다. 일차 인간 골수 세포의 거동을 연구하기 위해, 우리는 세포가 조직의 미세 환경을 네이티브 recapitulating 조건에서 재배되는 3-D 배양 시스템을 만들었다.

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

여기에 설명된 프로토콜은 최소 전사 인자 세트의 과발현을 통해 마우스 배아 섬유아세포에서 혈액 프로그램의 유도를 자세히 설명합니다. 이 기술은 조혈, 혈액 질환 및 조혈 줄기 세포 이식에 대한 향후 연구를 위한 플랫폼을 제공하기 위해 인간 시스템으로 변환될 수 있습니다.

전사 인자와 마우스 배아 섬유 아 세포를 재 프로그램하는 것은 Hemogenic 프로그램을 유도하는

여기, 우리는 인간의 만능 줄기 세포 (hPSC) 문화 프로토콜, hPSCs CD34로 차별화 하는 데 사용 현재+ 조 혈 창시자. 이 방법은 단계 특정 조작 정식 WNT 신호 독점적으로 프로그램 중 하나는 확실 한 또는 원시 조 혈 세포를 지정 하려면 사용 합니다.

기본 및 확실 한 조 혈 창시자 인간 만능 줄기 세포에서의 감독

생쥐에서 다른 인간화 된 골수 틈새를 만들고 살아있는 방법이 제시됩니다. human mesenchymal cells에 의해 만들어지는지지 적 틈새를 기반으로, 인간 내피 세포의 첨가는 인간 혈관의 형성을 유도하는 반면, rhBMP-2의 첨가는 인간 - 마우스 키메라 성숙한 뼈 조직의 형성을 유도한다.

마우스의 인간 골수 미세 환경의 생체 공학 및 실시간 영상화에 의한 시각화

조 혈 줄기에 규제 요인 및 신호 통로의 효과 결정 하 식 분석, 문화와 비장, 장기 재구성에 콜로 니 형성 단위에 대 한 교양된 대동맥-생식-Mesonephros를 사용 하 여이 프로토콜에 설명 합니다. 셀 개발입니다. 이 조 혈 줄기 세포 생물학을 연구 하 고 기능에 대 한 효과적인 시스템으로 입증 되었습니다.

대동맥-생식-mesonephros Explant 문화 시스템 개발 조에의 응용

이 프로토콜은 조혈 줄기 및 전구 세포를 생성하는 전사 인자 GATA2, GFI1B 및 FOS의 발현을 강제함으로써 인간 진피 섬유아세포에서 혈생 프로그램의 유도를 입증한다.

전사 요인의 강제 표현에 의한 인간 섬유아세포의 혈생 재프로그래밍

여기에서는 인간 골수의 생체 내 구조의 복잡성을 반영하는 구현하기 쉽고 표준화된 미세생리학적 시스템을 설명하여 광범위한 정상 및 병리학적 사건을 미세하게 연구할 수 있는 관련 모델을 제공합니다.

생리학적 또는 종양적 맥락에서 상주 세포 간의 역학 및 상호 작용을 조사하기 위한 인간 골수 3D 모델

여기에 제시된 것은 생체 외 폴리비닐 알코올 기반 확장을 사용하여 마우스 조혈 줄기 세포 배양을 시작, 유지 및 분석하는 프로토콜과 렌티바이러스 형질도입 및 전기천공을 통해 유전적으로 조작하는 방법입니다.

Ex Vivo (생체 외 ) 폴리비닐 알코올 기반 배양에서 마우스 조혈 줄기 세포의 확장 및 유전자 조작

여기서, 우리는 손상된 조혈 및 면역 체계의 재건을 위해 치료용 조혈 줄기세포/전구 세포를 수확하기 위해 뼈 형태 유전 단백질-2 로딩 젤라틴 골격에 의해 유발되는 생체 내 골 오가노이드를 확립했습니다. 전반적으로 이 접근법은 세포 치료를 위한 유망한 세포 공급원을 제공할 수 있습니다.

치료용 조혈 줄기세포/전구세포를 채취하기 위한 In vivo Osteo-organoid 접근법

적혈구 모델링은 이 과정에서 행위자의 생물학적 중요성을 이해하고 분화 결함을 완화할 수 있는 새로운 치료 접근법을 평가할 수 있는 귀중한 기회를 제공합니다. 여기에서는 CD34+ 조혈모세포와 전구세포를 체외에서 효율적으로 구별할 수 있는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다.

In vitro 및 ex vivo human erythropoiesis의 효율성을 평가하기 위한 포괄적인 파이프라인

학습하세요 3D 배양 시스템을 이용한 정상 및 비정상 조혈 연구 방법입니다. 폴리우레탄 스캐폴드와 탯줄혈 단핵세포를 사용하여 골수 유사 환경에서 세포 성장을 분석하고 혈액 질환 치료법을 탐색하는 실험 모델을 구축합니다.

정상과 비정상적인 인간 조혈의 전직 생체내 흉내

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