Name: הקלטת אלקטרו במוח של דג הזברה למבוגר שלמה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: למדו שיטה לאלקטרופיזיולוגיה in vivo במוח דג הזברה הבוגר. השיטה כוללת חנקת Tricaine, אינטובציה וקרניוטומיה לגישה למוח. שיטה זו מאפשרת הקלטת פעילות עצבית חוץ-תאית וחקר מעגלים נוירונליים ב-Danio rerio.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי NIH / NINDS גרנט R01NS070159 (לTMD, הליגה להגנה יהודית וATS).

<ol><li>Henze, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+features+predicted+by+extracellular+recordings+in+the+hippocampus+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Intracellular features predicted by extracellular recordings in the hippocampus in vivo.</a> J. Neurophysiol. 84, 390-400 (2000).</li>
<li>Gabriel, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+pattern+in+the+adult+zebrafish+spinal+cord+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Locomotor pattern in the adult zebrafish spinal cord in vitro.</a> J.Neurophysiol. 99, 37-48 (2008).</li>
<li>Vargas, R., Johannesdottir, I. T., Sigurgeirsson, B., Thornorsteinsson, H., Karlsson, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+brain+in+research+and+teaching%3A+a+simple+in+vivo+and+in+vitro+model+for+the+study+of+spontaneous+neural+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Physiol+Educ%22%5BJournal%5D)">The zebrafish brain in research and teaching: a simple in vivo and in vitro model for the study of spontaneous neural activity.</a> Adv Physiol Educ. 35, 188-196 (2011).</li>
<li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> J. Neurosci. Methods. 135, 205-210 (2004).</li>
<li>Brockerhoff, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+behavioral+screen+for+isolating+zebrafish+mutants+with+visual+system+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A.%22%5BJournal%5D)">A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 92, 10545-10549 (1995).</li>
<li>Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentylenetetrazole+induced+changes+in+zebrafish+behavior%2C+neural+activity+and+c-fos+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression.</a> Neuroscience. 131, 759-768 (2005).</li>
<li>Baraban, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale+mutagenesis+screen+to+identify+seizure-resistant+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish.</a> Epilepsia. 48, 1151-1157 (2007).</li>
<li>Maximino, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaximino%2C+C+%22Serotonin+and+anxiety%3A+Neuroanatomical%2C+pharmacological+and+functional+aspects%22">Serotonin and anxiety: Neuroanatomical, pharmacological and functional aspects</a>. , Springer. New York. (2012).</li>
<li>Bally-Cuif, L., Vernier, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBally-Cuif%2C+L+%22Fish+Physiology%3A+Zebrafish%22">Fish Physiology: Zebrafish</a>. Perry, S. F., Ekker, M., Farrell, A. P., Brauner, C. J. 29, (2010).</li>
<li>Kaslin, J., Nystedt, J. M., Ostergard, M., Peitsaro, N., Panula, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+orexin%2Fhypocretin+system+in+zebrafish+is+connected+to+the+aminergic+and+cholinergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The orexin/hypocretin system in zebrafish is connected to the aminergic and cholinergic systems.</a> J. Neurosci. 24, 2678-2689 (2004).</li>
<li>McLean, D. L., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+and+innervation+patterns+of+dopaminergic%2C+noradrenergic%2C+and+serotonergic+neurons+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny and innervation patterns of dopaminergic, noradrenergic, and serotonergic neurons in larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 38-56 (2004).</li>
<li>Mueller, T., Vernier, P., Wullimann, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+central+nervous+cholinergic+system+of+a+neurogenetic+model+animal%2C+the+zebrafish+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The adult central nervous cholinergic system of a neurogenetic model animal, the zebrafish Danio rerio.</a> Brain Res. 1011, 156-169 (2004).</li>
<li>Higashijima, S., Schaefer, M., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter+properties+of+spinal+interneurons+in+embryonic+and+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter properties of spinal interneurons in embryonic and larval zebrafish.</a> J. Comp. Neurol. 480, 19-37 (1002).</li>
<li>Tao, L., Lauderdale, J. D., Sornborger, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+Functional+Connectivity+between+Neuronal+Ensembles+with+Larval+Zebrafish+Transgenic+for+a+Ratiometric+Calcium+Indicator%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Mapping Functional Connectivity between Neuronal Ensembles with Larval Zebrafish Transgenic for a Ratiometric Calcium Indicator.</a> Front Neural Circuits. 5, 2(2011).</li>
<li>Fan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+statistical+methods+enhance+imaging+of+cameleon+fluorescence+resonance+energy+transfer+in+cultured+zebrafish+spinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">New statistical methods enhance imaging of cameleon fluorescence resonance energy transfer in cultured zebrafish spinal neurons.</a> J Biomed Opt. 12, 034017(2007).</li>
<li>Burgess, H. A., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+gating+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor gating in larval zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 4984-4994 (2007).</li>
<li>Burgess, H. A., Schoch, H., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+retinal+pathways+drive+spatial+orientation+behaviors+in+zebrafish+navigation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Distinct retinal pathways drive spatial orientation behaviors in zebrafish navigation.</a> Curr. Biol. 20, 381-386 (2010).</li>
<li>Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+neurobiology%3A+how+larval+fish+orient+towards+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral neurobiology: how larval fish orient towards the light.</a> Curr. Biol. 20, 159-161 (2010).</li>
<li>Haug, M. F., Biehlmaier, O., Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+acuity+in+larval+zebrafish%3A+behavior+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Zool%22%5BJournal%5D)">Visual acuity in larval zebrafish: behavior and histology.</a> Front. Zool. 7, 8(2010).</li>
<li>Fetcho, J. R., Higashijima, S., McLean, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+and+motor+control+over+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.Rev%22%5BJournal%5D)">Zebrafish and motor control over the last decade.</a> Brain Res.Rev. 57, 86-93 (2008).</li>
<li>Connaughton, V. P., Nelson, R., Bender, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+GABAA+and+GABAC+receptors+on+zebrafish+retinal+bipolar+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of GABAA and GABAC receptors on zebrafish retinal bipolar cells.</a> Vis. Neurosci. 25, 139-153 (2008).</li>
<li>Kim, Y. J., Nam, R. H., Yoo, Y. M., Lee, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+evidence+of+GABAergic+neurons+in+parts+of+the+brain+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification and functional evidence of GABAergic neurons in parts of the brain of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Neurosci. Lett. 355, 29-32 (2004).</li>
<li>Sato, Y., Miyasaka, N., Yoshihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+regulation+of+odorant+receptor+gene+choice+and+subsequent+axonal+projection+of+olfactory+sensory+neurons+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hierarchical regulation of odorant receptor gene choice and subsequent axonal projection of olfactory sensory neurons in zebrafish.</a> J. Neurosci. 27, 1606-1615 (2007).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book%3A+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Brachydanio+rerio%29%22">The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Brachydanio rerio)</a>. , (1993).</li>
<li>Lazarova, M., Samanin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiation+by+yohimbine+of+pentylenetetrazol-induced+seizures+in+rats%3A+role+of+alpha+2+adrenergic+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Potentiation by yohimbine of pentylenetetrazol-induced seizures in rats: role of alpha 2 adrenergic receptors.</a> Pharmacol. Res. Commun. 15, 419-425 (1983).</li>
<li>Loscher, W., Honack, D., Fassbender, C. P., Nolting, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+technical%2C+biological+and+pharmacological+factors+in+the+laboratory+evaluation+of+anticonvulsant+drugs.+III.+Pentylenetetrazole+seizure+models%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+res%22%5BJournal%5D)">The role of technical, biological and pharmacological factors in the laboratory evaluation of anticonvulsant drugs. III. Pentylenetetrazole seizure models.</a> Epilepsy res. 8, 171-189 (1991).</li>
<li>DeMicco, A., Cooper, K. R., Richardson, J. R., White, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neurotoxicity+of+pyrethroid+insecticides+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Developmental neurotoxicity of pyrethroid insecticides in zebrafish embryos.</a> Toxicol Sci. 113, 177-186 (2010).</li>
<li>Arnolds, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+effects+of+tricaine+on+the+supramedullary%2Fdorsal+neurons+of+the+cunner%2C+Tautogolabrus+adspersus%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Physiological effects of tricaine on the supramedullary/dorsal neurons of the cunner, Tautogolabrus adspersus.</a> Biol. Bull. 203, 188-189 (2002).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

פרוטוקול זה נעשה שימוש כדי למדוד את הפעילות העצבית של דג הזברה מבוגר in vivo. בעזרת תרגול, פעילות עצבית יכולה להיות שנצפתה באופן עקבי, אם כי המאפיינים (אמפליטודה וצורה של אירועים) של הפעילות שנרשמה יכולים להשתנות בין דגים בודדים. ניצול של טכניקת ההקלטה תאית יכול להסביר תצפית זו. השיטה מספקת ניטור סימולטני של מספר רב של תאים בתוך אזור 1, כך ששינויים במיצוב של האלקטרודה הראשית יכולים לשחק תפקיד בפעילות הנצפית. עומק של האלקטרודה העיקרית גם משנה את האזור הנמדד. אם ...

במאמר זה, פרוטוקול מתואר לקבלת בהקלטות vivo של פעילות עצבית בדג זברה מבוגר. שיטות הקלטה תאית משמשות, מתן מדידות מתח של פעילות חשמלית בתוך אזור קטן של רקמה עצבית. שיטה זו של חקירה כרוכה במעקב אחר מספר גדול של תאים בבעלי חיים מתנהגים 1. בעבר, הקלטות פרוסה כבר בוצעו בשני מבוגרים וזחלים, כמו שיש לי הכנות כוס העין והקלטות electroretinogram. ניסויים אלה במידה רבה כבר בוצעו לפרטים תגובות פיסיולוגיות של מערכות חושיות שונות 2-5. עד לאחרונה, הכנות מוח שלמות היו זמינות לביצוע אלקטרופיזיולוגיה עם 3,6,7 זחל דג הזברה, בהם פיזור נשימה וחמצן יכול להתרחש דרך העור בלבד. ההכנה שלנו מאפשרת פעילות נוירולוגית יליד דג הזברה מבוגר כדי להימדד בעוד החיה נשארה בהכרה מלאה ומודעת oו סביבתו. דג הזברה (Danio rerio) לשחק כרגע תפקיד בסיסי כמודל למחקרים גנטיים, טוקסיקולוגי, תרופתיים, וphysiopathological 3. דג הזברה זכה לנראות בתחום של מדעי המוח, כי הם חולקים הומולוגיה נרחבת עם יונקים ברמות גנטיות, העצבית והמערכת האנדוקרינית 8. במהלך העשור האחרון, טכניקות neuroanatomic וimmunohistochemical סטנדרטיות היו בשימוש כדי לקבוע את הארגון האופייני מפורט של מערכת עצבים דג הזברה 9-12 ושל ההפצה של נוירוטרנסמיטרים שונים 3,8,13. לאחרונה, חוקרים העבירו את המיקוד שלהם ללימודים תפקודיים 14,15, שרבים מהם במרכז על תהליכים התנהגותיים 16-19 ומאפיינים של מערכות אלקטרו חושיות 2,13,20. מספר קטן של מחקרים אלה התמקדו בפעילות החשמלית של אזורים הספציפיים של adult מוח דג הזברה 21-23, אך לא בוצעו באמצעות vivo בגישה. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם ללימודי אלקטרו של שתי פעילות הספונטנית ועוררה בתוך מערכת עצבים דג הזברה כדי לתאר את דפוסי פעילות באזורי מוח מסוימים. השימוש בטכניקה זו מאפשר השוואות שיש להבחין בין פעילות הנוירולוגית של שלבי זחל צעירים ומבוגרים. יתר על כן, הפרוטוקול שלנו מאפשר השוואה בין שינויים גנטיים או תרופתיים. יחד עם גישות אחרות, כגון הנדסה גנטית או בדיקות פרמקולוגיות, שיטה זו מציעה אפשרות חדשה לניתוח הפונקציונלי של תקשורת העצבית ופלסטיות בבעלי החיים הבוגרים בשלמותה, כמו גם ליישומים אפשריים, כגון לומד אפילפסיה התחלה מאוחרת או תהליכי ניוון עצבי.

<table><tbody><tr><td>70% אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>2750HC</td><td>לדלל 100% עד 70% עם מי DI</td></tr><tr><td>2 M אשלגן כלורי</td><td>J.T. Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 M נתרן כלורי</td><td>J.T. Baker</td><td>3624-05</td><td></td></tr><tr><td>0.4% Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td>pH 7.2-7.4; מאוחסן ב-20 oC</td></tr><tr><td>Pancuronium Bromide</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P1918</td><td>מדולל ל-1 &mu; g/&mu; l ב-1x פוספט חוצץ</td></tr><tr>מי <td></td><td></td><td>בית גידול</td><td>pH 7.0-7.4, מוליכות של 400-450 &mu; S; מתוחזק על ידי Instant Ocean ונתרן ביקרבונט</td></tr><tr><td>Pentylenetetrazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td>מדולל ל-300 מ"מ במזרק Nanofil מי מלח 1x פוספט חוצץ</td></tr><tr><td></td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>06A</td><td></td></tr><tr><td>34 G מחט משופעת</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>NF34BV</td><td></td></tr><tr><td>ספוג</td><td></td><td></td><td>נקבוביות קטנות וללא כימיקלים</td></tr><tr>נייר <td></td><td></td><td>חול דק מגובה קצף</td><td>5 x 5 ס"מ2 גדול מספיק</td></tr> חוטי <tr><td>סוללה</td><td></td><td></td><td></td>9 וולט</tr><tr><td>עם קליפס תנין</td><td></td><td></td><td>צריך 2</td></tr><tr><td>37 ס"מ x 42 ס"מ Kimwipe</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>TW31KEM</td><td></td></tr><tr><td>11 ס"מ x 21 ס"מ</td><td>Kimwipe Kimberly-Clark Professional</td><td>TW31KWP</td><td></td></tr><tr><td>צינור</td><td></td><td></td><td></td>בקוטר 1/8 אינץ'</tr><tr><td>צינור</td><td></td><td></td><td></td>בקוטר 1 ס"</tr><tr><td>מ צינור</td><td></td><td></td><td></td>בקוטר 1 מ"מ</tr><tr><td>שסתום הפחתה עם מכסה נעילת לואר נקבה וטבעת סיליקון</td><td>מיקרוסקופ Qosina</td><td>51505</td><td></td></tr><tr><td>(Leica MZ APO)</td><td></td><td></td><td>מיקרוסקופ נוסף יכול להיות מספריים משומשים</td></tr><tr><td></td><td>של Vanna Roboz Surgical Instruments Co., Inc.</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>60 מ"ל צינורות מזרק נעילת לואר</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>תלת כיווני Stopcocks עם חיבורי</td><td></td><td></td><td></td>Luer</tr><tr><td>חד כיווני Stopcock עם חיבור</td><td></td><td></td><td></td>Luer</tr><tr><td>Fisherbrand 100 מ"מ x 15 מ"מ צלחת פטרי</td><td>Fisherbrand</td> Scientific <td>NC9299146</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand 60 מ"מ x 15 מ"מ צלחת פטרי</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67961</td><td></td></tr><tr><td>4 בצינור נימי בורוסיליקט</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100F-4</td><td>יכול להכיל נימה כדי לסייע במילוי בתמיסה</td></tr><tr><td>P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digidata 1440</td> התקנים <td></td><td></td><td>מולקולריים</td></tr><tr><td>Axon Aloclamp 900A</td> התקנים <td></td><td></td><td>מולקולריים</td></tr><tr><td>Axoclamp תוכנה</td><td>התקנים מולקולריים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HS-9Ax 1U headstage</td><td>התקנים</td><td></td><td></td>מולקולריים</tr><tr><td>0.010 בחוט כסף</td><td>A-M Systems, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחזיק אלקטרודות מסדרת Q</td><td>Warner Instruments</td><td>QSW-A10P</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td></td><td></td><td></td>נעילת Luer</tr><tr><td>1 מ"מ x 15 בצינורות</td><td></td><td></td><td>חבר מזרק נעילת Luer למחזיק אלקטרודות מסדרת Q</td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור</td><td>Warner Instruments</td><td></td><td>Need 2</td></tr><tr><td>מחשב מבוסס מיקרוסופט</td><td>Dell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Faraday </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלוב שולחן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אוויר מנתח מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הקלטת אלקטרו במוח של דג הזברה למבוגר שלמה

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

בעבר, מחקרי אלקטרו בדג זברה מבוגר היו מוגבלים לחתוך תכשירים או להכנות כוס העין והקלטות electrorentinogram. מאמר זה מתאר כיצד יכול להיות משותק דג הזברה מבוגר, מחוברת לצינורות, ומשמש לניסויי in vivo אלקטרו, המאפשר הקלטה של פעילות עצבית. חוסר תנועה של המבוגר דורש מנגנון כדי לספק חמצן מומס לזימים במקום תנועת buccal וopercular. בעזרת הטכניקה שלנו, בעלי חיים הם משותקים וperfused עם מים בסביבה כדי למלא דרישה זו. פתיחת גולגולת מתבצעת תחת methanesulfonate tricaine (MS-222; tricaine) הרדמה כדי לספק גישה למוח. האלקטרודה הראשית אז ממוקמת בתוך חלון פתיחת הגולגולת כדי להקליט את פעילות מוח תאית. באמצעות השימוש במערכת זלוף multitube, מגוון רחב של תרכובות תרופתיים יכול להינתן לדגים בוגרים וכל שינויים בפעילות העצביתניתן לצפות. המתודולוגיה לא רק מאפשרת לתצפיות שנעשו לגבי שינויים בפעילות נוירולוגית, אבל זה גם מאפשר להשוואות שנעשו בין הזחל ודג זברה מבוגר. זה נותן לחוקרים את היכולת לזהות השינויים בפעילות עצבית עקב כניסתה של תרכובות שונות בשלבי חיים שונים.

פרוטוקול זה נעשה שימוש כדי למדוד את הפעילות העצבית של דג הזברה מבוגר in vivo. קלטות אלקטרו אלה מתקבלות באופן עקבי וreproducibly. איור 5 מראה דוגמא מייצגת של שינויי ילידים מושרה ושל הפעילות העצבית של דג הזברה מבוגר כאשר pentylenetetrazol (PTZ), chemoconvulsant נפוץ 6,7,25,26, הוא הציג באינטובציה התקנה. פעילות נוירולוגית יליד דג הזברה המבוגר הייתה פיקוח על כל ניסוי (איור...

מאמר זה מתאר כיצד יכול להיות משותק דג הזברה מבוגר, מחוברת לצינורות, ומשמש לניסויי in vivo אלקטרו לאפשר הקלטות ומניפולציה של פעילות עצבית בבעלי חיים בשלמותה.

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לקבל הקלטות in vivo של פעילות עצבית במוחו של דג זברה בוגר ושלם. דבר זה מושג תחילה על ידי השבתת תנועתו של דג זברה בוגר באמצעות יישום של Trimethylsulfonium hydroxide באמבט. השלב השני הוא ביצוע אינטובציה לדג הזברה המשותק.בשלב הבא, מתבצעת קרניאוטומיה תחת הרדמה טריקה כדי לאפשר גישה למוח. השלב האחרון הוא מיקום של אלקטרודה ראשית בתוך חלון הקרניאוטומיה, המאפשר הקלטה של פעילות מוחית חוץ-תאית. בסופו של דבר in vivo.ניתן להשתמש באלקטרופיזיולוגיה בדג זברה בוגר כדי להראות כיצד תרכובות פרמקולוגיות שונות או מוטציות גנטיות יכולות להוביל לשינויים בפעילות הנוירולוגית הטבעית של דג הזברה. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח הן בביולוגיה של ההתפתחות והן בנוירוביולוגיה, בנוגע לאופן שבו שינויים במבנה המוח יכולים להשפיע על שינויים בפעילות העצבית, הן במהלך התפתחות תקינה והן במקרה של מוטציה גנטית. באופן כללי, מי שאינם בקיאים בטכניקה זו ייתקלו בקושי, שכן יש לנקוט זהירות יתרה כדי להסיר רק חלק קטן מהלוחית העצמית המכסה את הראש מבלי לפגוע ברקמת המוח.קנולת האינטובציה מקלה על החדרת נוזלים לדג. תצורה זו מספקת גמישות ויציבות כדי למקם את הקנולה באופן מיטבי בתוך פיו של בעל החיים. לצורך הכנת תצורה זו, הסר קטע באורך 1.5 סנטימטר מהקצה הרחב של טיפ פפטה P 200 באמצעות מספריים או להב תער.בשלב

electrophysiological-recording-in-the-brain-of-intact-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מראה כיצד לבצע מדידות אלקטרוקרדיוגרפיה (ECG או EKG), בדיקה המודדת את הפעילות החשמלית של הלב, על דג זברה.

אלקטרוקרדיוגרפיה של דגי זברה (ECG): בדיקה זעיר פולשנית להערכת תפקוד הלב

הפרוטוקול מתאר את ההליך לביצוע אלקטרופיזיולוגיה בדגי זברה בוגרים. שיטה זו יכולה לשמש למדידת פעילות עצבית in vivo.

אלקטרופיזיולוגיה של דגי זברה בוגרים: שיטה למדידת הפעילות החשמלית החוץ-תאית של תאי עצב ב-Vivo

סרטון זה מדגים רישום של אותות חשמליים מתאי עצב afferent בזחל זברה משותק על ידי מיקום מיקרופיפטה ליד גנגליון הקו הצידי ויצירת חותם רופף ללכידת אותות. התמיסה החוץ תאית שומרת על הכדאיות העצבית בתהליך זה.

ניטור אותות חשמליים מתאי עצב Afferent בזחל של דג זברה משותק

שיטה פשוטה להקליט פוטנציאלי שדה תאיים במוח הקדמי דג זברת הזחל מתוארת. השיטה מספקת...

הקלטת אלקטרו מוח קדמי בזחל דג זברה

בסרטון הזה, נדגים כיצד להקליט פעילות חשמלית מתא עצב בודד שזוהה בכל הכנת מוח, השומרת על מעגלים עצביים מורכבים. אנו משתמשים בדג מהונדס שבי גונדוטרופין משחרר הורמון (GnRH) נוירונים מתויגים גנטי בחלבון פלואורסצנטי לזיהוי בהכנת המוח השלמה.

הקלטת פעילות חשמלי מתא העצב מזוהה במוח שלם של דג מהונדס

כתב יד זה מתאר שיטות הקלטות אלקטרו מן הנוירונים השדרה של עוברי דג הזברה הזחלים. הכנת שומרת נוירונים באתרו ולעיתים קרובות כרוך דיסקציה מינימום. שיטות אלה מאפשרות לחקר אלקטרו מגוון של נוירונים שדרה, מרכישת רגישויות חשמל הראשונית דרך שלבי זחל מוקדם.

זברה<em&gt; באתרו</em&gt; הכנת בחוט השדרה עבור הקלטות אלקטרו מתוך השדרה חושית הנוירונים המוטוריים

כאן, אנו מציגים שיטה אמינה, פולשנית, וחסכונית כדי להקליט ולפרש אינהלטורים דג בוגרים מורדם.

ב אלקטרוקרדיוגרפיה למבוגרים בלבד Vivo

מוצג כאן הוא שיטת אלקטרופורציה עבור משלוח ה-DNA של הפלזמה ותיוג תא ependymoglial במבוגר בלדג טלנצאלון. פרוטוקול זה הוא שיטה מהירה ויעילה כדי להמחיש ולעקוב אחר תאים ependymoglial בודדים ופותחת אפשרויות חדשות להחיל אלקטרופורציה על מגוון רחב של מניפולציות גנטיות.

שיטת אלקטרופורציה לVivo משלוח של דנ א פלמיד בוגרים בדג טלנצאלון

כאן אנו מציגים שיטה לדימוי המוח העוברי של דג הזברה בשלבים של זחלים ונוער. הליך מיקרו-פולשני זה, המותאם מגישות אלקטרופיזיולוגיות, מספק גישה לפרטים תאיים ותת-תאיים של נוירון בוגר וניתן לשלבו עם אופטוגנטיקה ומחקרים נוירופרמקולוגיים לאפיון תפקוד המוח והתערבות תרופתית.

In vivo הדמיה של רקמת מוח פעילה לחלוטין בזחלי דגי זברה ערים וצעירים על ידי הסרת גולגולת ועור

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביצוע הדמיית סידן של שני פוטונים במוח הקדמי הגבי של דגי זברה בוגרים.

הדמיית סידן דו-פוטון של פעילות המוח הקדמי בדגי זברה בוגרים

המחקר מציג את Zebra II, מערכת מתקדמת לרכישה וניתוח ממושך של א.ק.ג בדגי זברה. מערכת זו כוללת מערכת זלוף עצמאית ואלקטרודות מרובות נקודות לטיפול בדגים מרובים בסביבות מבוקרות. ההשפעות החריפות של אמיודרון הוערכו ונותחו עם דג זברה מסוג בר.

זברה II כמערכת חדשה להקלטת אותות אלקטרופיזיולוגיים בדג זברה

למדו שיטה לאלקטרופיזיולוגיה in vivo במוח דג הזברה הבוגר. השיטה כוללת חנקת Tricaine, אינטובציה וקרניוטומיה לגישה למוח. שיטה זו מאפשרת הקלטת פעילות עצבית חוץ-תאית וחקר מעגלים נוירונליים ב-Danio rerio.

הקלטת אלקטרו במוח של דג הזברה למבוגר שלמה

גלה סרטונים נוספים