Name: 혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: 배우세요 쥐 대퇴 동맥 와이어 부상 기법을 통해 혈관 재형성 및 신내막 과형성을 연구하는 방법을. 이 모델은 혈관 주위 약물 전달 및 재협착 억제 치료제 개발에 활용됩니다.

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저자는 미국심장협회(American Heart Association, 10SDG2630139), 웰치 재단(Welch Foundation) 및 NIH Director's New Innovator Grant (1DP2 OD008716-01)를 통한 지원에 감사를 표합니다. 저자들은 ICMB(Institute of Cellular and Molecular Biology) 핵심 시설과 텍사스 대학교 오스틴 캠퍼스의 TherapeUTex에서 제공하는 서비스에 감사를 표합니다.

참고 :이 프로토콜에 표시된 모든 방법은 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 외과 표 1. 준비 <ol><li> 해부 현미경, 수술 테이블에 따뜻한 물을 재순환과 가열 패드를 설정합니다. 가열 패드 상 스테인리스 기판을 놓는다. 베이스 플레이트와 가열 패드에 멸균 흡수 패드를 놓습니다. </li><li> 인접한 멸균 흡수 패드에 멸균 된 수술 도구를 정렬합니다. 각진 끝이 뾰족한 집게 두 쌍의 각도 포셉 두 쌍의 세 지혈 겸자, 두 견인기 와이어, 작은 수술 가위, 마이크로 가위, 한 혈관 성형술 와이어 (0.15 인치 직경) 6.0 실크 봉합사의 세 6 인치 세그먼트를 수집 . </li><li> 대퇴 동맥의 곡률과 일치하도록 혈관 성형술 와이어의 원형 단부를 구부린다. 이렇게하면, 수술 중에 와이어를 전진하게된다. </li></ol> 2. 준비외과 마우스 <ol><li> 2.5 % 이소 플루 란 흡입에 의해 연속적으로 마우스를 마취. 절차를 통해 동물의 상태를 모니터링해야합니다. 완전히 마취하는지 확인하려면 마우스의 발 핀치 테스트를 수행합니다. 핀치 테스트 투여 할 때 움직이지 않는 동물을 확인합니다. </li><li> 탈수를 방지하기 위해 동물의 눈 연고 윤활 적용. 수술 테이프를 사용하여 흡수 패드에 앙와위에서 동물을 고정합니다. 코 콘을 통해 2.5 %의 이소 플루 란을 투여 계속합니다. </li><li> 제모 크림을 사용하여, 중간 선에 다리와 복부에서 모피를​​ 제거합니다. 물로 피부를 씻어. 탈모는 수술에 앞서 일일 수행 될 수있다. 피부 자극이 발생할 수 있습니다 크림과 함께 과도한 치료를합니다. </li><li> 즉시 수술 전에 피부를 소독하기 위해 면봉으로 면도 한 지역에 포비돈 - 요오드를 적용합니다. 70 % 에탄올 건조와 면도 한 피부를 씻어멸균 면봉으로. 3 번 반복합니다. </li><li> 피하 주사를 통해 카프로 펜의 5 ㎎ / ㎏의 수술 전 투여 량을 관리합니다. </li></ol> 대퇴 동맥의 3. 분리 <ol><li> 작은 수술 가위를 사용하여, 대퇴 동맥 위에 피부 절개를 만곡. 퉁명스럽게 대퇴 동맥을 찾기 위해 견인기 자기 트랙터 fixators을 사용하여 주변 조직을 해부 고정합니다. 멸균 면봉을 사용하여 식염수를 적용 관개를 위해 주기적으로 생리 식염수를 사용하여 조직을 적 십니다. </li><li> 집게를 사용하여 대퇴 동맥을 분리합니다. 부드럽게 끝이 뾰족한 집게를 사용하여 혈관 번들에서 신경을 분리합니다. 정맥을 천공하지 말고, 신경에 손상을주지 않습니다. 그것을 자극 피하려면 번들에서 신경을 밀어 넣습니다. </li><li> 조심스럽게 대퇴 분기의 위치, 대퇴 동맥에서 대퇴 정맥을 분리합니다. 분기의 지역은 해부 특히 어렵다. </li><li> 피osterior 분기에, 루프 지혈과 대퇴 동맥과 보안에서 6.0 실크 봉합사. 이 근위 봉합사 동맥 혈류를 제한하는 데 사용된다. 주 : 소작 방법 대 결찰 방법을 수행 할 때 관계에 다소 차이가있다 (도 1 및도 2 참조). </li><li> 분기에 원위부, 루프 6.0 실크 대퇴 동맥에서 봉합 및 지혈 고정합니다. 동맥의 위치에있는이 말단 봉합 보조. </li><li> 대퇴 동맥의 근육 분기 아래 루프 두 봉합, 그것들을 미리 묶어 지혈 고정합니다. 식염수로 조직을 습하게해야합니다. 와이어 부상 소작 방법을 수행하면, 하나의 루프 형 봉합사 근육 지점에 필요하다. </li></ol> 대퇴 동맥 와이어 부상 4. 성능 <ol><li> 근위 봉합사 당기는 대퇴 동맥에 혈류를 제한한다. 약간 먼 hemost 당겨지혈이 지점을 확보에서와 arteriotomy의 사이트를 노출합니다. 주위 봉합을 매서 근육 분기를 결찰. 주 : 상향 동맥 리프팅보다 효과적으로 가로 당김 형보다 혈류를 제한 할 것이다. </li><li> 두 봉합 사이의 소작으로 작은 지점을 끊다. 마이크로 가위를 사용하여 분기의 측면 지점에서 arteriotomy을 수행합니다. 마이크로 가위를 안정화 외과 테이프의 롤에 균형 집게를 사용합니다. </li><li> 끝이 뾰족한 집게를 사용 arteriotomy의 존재를 확인합니다. 부드럽게 집게로 arteriotomy의 오프닝을 들어 올립니다. 집게를 사용 arteriotomy에 와이어의 둥근 끝을 소개합니다. 와이어의 발전을 용이하게하기 위해, 주사기를 사용하여 영역 리도카인 한두 방울을 가하여. </li><li> 와이어 근위 봉합사 도달하면 봉합사를 해제하고 와이어의 전진을 방해 할 수 없도록하여 조정한다. 이 더 진행되지 때까지 와이어를 삽입합니다. 번째의 선단전자 와이어 사타구니 인대의 영역에서 중지해야합니다. </li><li> 와이어가 1 분 동안 대퇴 동맥에 남아 허용합니다. 손상과 대퇴 동맥의 내피 세포를 발가 벗기다 데 10 시간을 1 분 후에, 철회 및 절단 운동에 와이어를 진행합니다. 덜 심각한 상해, 와이어 및 동맥 뽑아 횟수를 줄이거 나 단 1 분간 동맥 선을 떠난다. </li><li> 천천히 와이어를 집어 넣으십시오. 와이어의 단부는 둥근 근위 봉합사를 경과하면, 근위 봉합사 당기는 동맥 내로 유동을 제한한다. 완전히 선을 후퇴. </li></ol> 5. 근육 지점을 결찰 <ol><li> 근육 분기에 남아있는 봉합사를 조입니다. 이 arteriotomy에서 출혈을 방지 할 수 있습니다. 근육 분기에 흐름을 반환하고, 그 혈액이 누출되지 확인합니다. 근육 분기에 봉합에서 끝을 낸다. </li></ol> 6. 다른 방법 : 현지화 된 카우Arteriotomy의 terization 주 : 대안은 근육 분기의 결찰을 피하고 큰 메인 대퇴 동맥 혈관을 통해 액세스 할 수 있도록 수행 될 수있다. <ol><li> 4.1에서 시작, 근위 봉합 당겨 대퇴 동맥에 흐름을 제한 할 수 있습니다. 말단 봉합하고 arteriotomy의 사이트 (그림 1과 그림 2) 노출 약간 근육 분기를 고정 봉합을 당깁니다. </li><li> 마이크로 가위를 사용하여, 대퇴 동맥과 근육 지점의 분기점에서 arteriotomy를 수행합니다. 절개 동맥 측 이루어진 경우, 소작하기 쉬울 수있다. 마이크로 가위를 안정화 외과 테이프의 롤에 균형 집게를 사용합니다. </li><li> 소작의 성공을 테스트하려면, 근위 봉합을 풀어 대퇴 동맥에 흐름을 복원합니다. 출혈 arteriotomy에서 발생하면, 소작을 반복한다. 소작이 성공하면, 혈류를 다시한다arteriotomy 원위부 저장됩니다. </li><li> 와이어를 소개하고 4 절에 설명 된대로 와이어 부상을 수행합니다. </li><li> 대퇴 동맥으로 혈액의 흐름을 제한 계속합니다. 적어도 6인치 마우스에서 멀리 뾰족한 소작을 가열. 소작 팁이 냉각으로, 절개를 닫습니다 arteriotomy의 다른 쪽면을 가볍게 적용됩니다. </li><li> 소작의 성공을 테스트하려면, 근위 봉합을 풀어 대퇴 동맥에 흐름을 복원합니다. 출혈 arteriotomy에서 발생하면, 소작을 반복한다. 소작이 성공하면, 혈류 arteriotomy 원위부 복원한다. 임시 근위 및 원위 관계를 제거합니다. </li></ol> 혈관 주위 약물 전달 패치 7. 주입 <ol><li> 이전의 연구 (11)에서 또는 이와 유사한 방법을 사용하여 기술 된 바와 같이 혈관 주위 약물 패치를 생성하는 생성 될 수있다. 멸균 가위를 사용하여 약물 전달 패치의 배리어 영역의 모서리를 무디게 </li><li> 약물 전달 팻 배치동맥 대향 약물 방출면이 부상 대퇴 동맥 상 CH. 필요에 따라, 패치의 위치를​​ 개선하는 집게를 사용한다. </li></ol> 8. 상처 폐쇄 및 복구 <ol><li> 광장 노트로 구성된 간단한 중단 봉합 상처를 닫습니다. 불연속 봉합사 동물 봉합사를 제거하려고 할 경우에 상처 봉합을 연장. </li><li> 마취를 끄고 설정부터 동물을 제거합니다. 동물이 온난화 패드에 복구 할 수 있습니다. </li><li> 마우스의 회복을 모니터링하기 위해 계속합니다. 이 닫혀 있는지 확인하기 위해 매일 절개 사이트를 확인하십시오. 수술 후 통증의 치료를 위해 2 일 후 매 12 시간을 수술 후 5 ㎎ / 카프로 펜마다 12 시간의 kg의 피하 주사를 관리합니다. 통증이 초기 이일 이상 계속되면, 더 진통제에 대한 방향에 대한 수의사에게 문의하십시오. </li></ol> 조직학 9. 수확 대퇴 동맥 <ol><li> 수술 후 이십팔일에서 마우스 이산화탄소 안락사를 수행합니다. 주 : 이산화탄소의 적절한 유량이 분당 챔버 10-30 %로 치환해야하며, 사용 된 챔버의 크기에 따라 달라진다. 다이어프램과 심장 천자의 절단은 안락사의 보조 방법으로 수행해야합니다. </li><li> 수술 테이프를 사용 누운 위치에 마우스를 고정합니다. 초기 수술 절개가되었다 대퇴 동맥을 통해 절개를합니다. </li><li> 손상된 동맥과 반대쪽 다리에서 손상되지 않은 동맥, 모두 퉁명스럽게 해부 대퇴 동맥을 찾기 위해 견인기 및 자기 견인기 fixators을 사용하여 주변 조직에 고정합니다. 주기적으로 관개 식염수를 사용하여 조직을 적 십니다. 멸균 면봉을 사용하여 식염수를 적용합니다. 동맥을 손상하지 않도록주의하십시오. </li><li> 대퇴 동맥 복부 대동맥에 arteriotomy 원래의 위치로부터 분리 된 후, SEG 넥타이arteriotomy의 원래 사이트 근처 실크 봉합사, 표준. 이 봉합사 대퇴 동맥의 가장 말단부를 확인하고 샘플의 처리를 완화 시키는데 도움이된다. </li><li> 마이크로 해부 가위를 사용하면 대퇴 동맥을 절제합니다. 봉합 한 절개는 원위부합니다. 복부 대동맥 옆에, 대퇴 동맥의 반대쪽에 다른 절개를합니다. </li><li> 식염수가 들어있는 유리 페트리 접시에 절제 동맥을 전송합니다. 초과 결합 조직이나 지방을 제거하기 위해 추가로 동맥을 해부하다. 부드럽게 식염수로 세척하여 루멘에서 혈액을 제거합니다. </li><li> 10 % 포르말린의 유리 병에 동맥을 전송합니다. 부드러운 48 시간 동안 락을 함께 4 ° C에서 유리 병을 저장합니다. </li><li> 가 조직학을 위해 처리 될 때까지 저장하기 위해 70 % 에탄올에 고정 동맥 전송. </li><li> 파라핀 블록과 부분 염색에 대한 블록 동맥을 포함합니다. </li><li> 부상과 내막 우울의 정도를 평가하기 위해 조직 화학 및 면역 화학 염색을 수행erplasia. 참고 : 대표 결과를 위해, 우리는 탄성 얇은 판과 다른 동맥의 구성 요소를 시각화하기 위해 핵 및 전반적인 형태 또는 Movat의 Pentachrome 얼룩을 시각화하기 위해 헤 마톡 실린 및 에오신을 사용했다. </li></ol>

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</ol>

우리는 마우스에서 혈관 손상을 수행하고 혈관 주위 커프를 통해 손상 부위에 치료 화합물을 전달하는 방법을 제시했습니다. 대퇴 동맥 및 경동맥에 대한 결찰 방법은 기존 방법 논문에 설명되어 있으며 광범위하게 특성화되어 있으며(11-14,19-23 ) 젊은 마우스에서 자주 사용할 수 있는 기술적으로 덜 까다로운 절차인 동일한 혈관 손상을 달성하기 위한 대체 방법을 제시합니다. 혈관주위 패치와 함께 마우스 와이어 손상 모델을 사용하는 주요 이점 중 하나는 유전자 변형 마우스 또는 쥐 질병 모델을 사용할 수 있다는 것입니다. 소동맥의 혈관내 조작은 기술적으로 까다롭고 이러한 측면은 결찰, 11,24,25 , 혈관주위 커핑26 및 전기 충격을 포함한 여러 혈관외 방법을 통해 손상을 일으키는 모델을 만드는 데 동기를 부여했습니다. 27 우리의 절차에서 반대쪽 가짜 수술은 와이어 손상 없이 프로토콜을 수행하여 대조군으로 사용될 수 있으며, 또는 수술되지 않은 대조...

혈관 성형술과 스텐트 삽입술로 인한 동맥 손상 및 염증은 동맥벽이 두꺼워지는 신생아 증식을 유발할 수 있으며, 이는 재협착으로 알려진 과정입니다. 1,2 재협착의 형성은 혈관 성형술 및 베어 메탈 스텐트를 사용한 스텐트 삽입과 같은 중재술의 주요 실패 모드입니다. 3 약물 용출 스텐트로 치료한 동맥에서 혈관 치유를 억제하는 것에 대한 최근 우려로 인해 혈관 치유 및 재내피화를 유지하면서 재협착을 억제할 수 있는 화합물을 찾을 필요도 있습니다. 4-7 또한, 스텐트는 관상동맥 혈관 구조에서 성공을 거두었지만, 말초 동맥에서 모든 유형의 경피적 중재술은 재협착으로 인해 더 높은 비율로 계속 실패하고 있습니다. 8-10 외과적 중재의 마우스 모델은 임상 치료의 실패의 기저에 있는 메커니즘에 대한 기계론적 통찰력을 제공할 수 있고 내막 증식을 억제하는 화합물에 대한 초기 테스트 베드를 제공할 수 있는 강력한 유전자 조작의 사용을 허용합니다. 
여기에서는 신내피 증식을 억제하고 내피 형성 후 재내피화에 미치는 영향을 평가하기 위한 치료 화합물의 테스트를 허용하는 혈관 손상의 마우스 모델을 설명합니다. 생쥐에서 혈관 손상을 실행하는 데 있어 주요 과제는 혈관 접근을 얻고 와이어 손상 후 손상된 동맥으로의 흐름을 복원하는 데 필요한 기술력입니다. 이러한 이유로, 간단한 동맥 결찰 모델은 혈관 내 조작이 필요하지 않지만 구현하기 쉬운 마우스의 신생 증식을 연구하는 데 사용되었습니다. 11 그러나 이러한 유형의 수술 모델은 경피적 중재술의 기계적, 생물학적 측면과 상당히 다르며, 동맥벽 스트레칭, 내피 탈피 및 손상 후 내강 혈류와 같은 주요 측면이 부족합니다. 
우리는 마우스에서 대퇴 동맥의 와이어 손상에 대한 혈관 접근을 얻고 닫는 두 가지 방법을 제시합니다. 첫 번째 기술은 이전에 여러 그룹에서 설명한 기존 방법이며 대퇴 동맥의 곁가지를 통한 혈관 접근을 사용합니다. 12-14 이 방법은 더 작고 더 큰 마우스와 더 작은 동맥을 통한 내강 접근을 구현하기 위해 더 많은 수술 기술을 필요로 합니다. 또한 시술 후 대퇴 동맥의 근육 분지의 결찰이 필요합니다. 우리가 설명하는 두 번째 방법은 주요 가지와 곁가지 지점의 분지 지점에서 동맥 절개술을 사용하여 와이어 손상을 수행하기 위해 동맥에 더 많이 접근할 수 있도록 합니다. 이 방법에서는 절차에 따라 양쪽 가지에 혈류를 남기는 제어된 국소 소작을 사용하여 동맥 절개술을 닫습니다. 종래의 방법은 생후 20주 이상의 마우스에 적용할 수 있는 반면, 대안적인 방법은 생후 15주 이상의 마우스에 적용할 수 있다. 두 가지 방법 모두 와이어는 동맥 스트레칭과 찰과상을 일으켜 부상과 내피 박리를 유발합니다. 두 절차 중 하나에 따라 혈관 주위 약물 전달 패치를 이식하여 화합물을 전달하여 손상에 대한 반응을 변경할 수 있습니다. 약물 전달 패치를 사용하면 생쥐를 혈관 주위 요법을 통해 협착을 억제하는 새로운 화합물의 테스트 베드로 사용할 수 있습니다. 15,16년

<table><tbody><tr><td>직선 스프링 와이어, 0.15" 직경</td><td>Cook</td><td>G02426</td><td></td></tr><tr><td>고온 소작</td><td>Bovie Medical Corp.</td><td>HIT1</td><td></td></tr><tr><td>소작용 고온 파인 팁</td><td>Bovie Medical Corp.</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-13</td><td>동맥 절개술 성능 용</td></tr><tr><td>각도가 좋은 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>혈관 다발의 무딘 해부 용</td></tr><tr><td>각도 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-5069</td><td>조직 청소용</td></tr><tr><td>외과 용 가위</td><td>Roboz</td><td>RS-5840</td><td>피부</td></tr> <tr><td>절단 용견인기</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-10</td><td></td></tr><tr><td>견인기 와이어</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-05</td><td>견인기</td></tr><tr><td>베이스 플레이트</td>에 부착 <td>Fine Science Tools</td><td>18200-03</td><td>견인</td></tr>기 <tr><td>용 마그네틱 견인기 고정 장치</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-01</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Roboz</td><td>RS-7822</td><td></td></tr><tr><td>지혈 겸자</td><td>생물 의학 연구 기기, Inc.</td><td>34-1000</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>Meiji Techno</td><td>EMZ-5TR</td><td></td></tr><tr><td>현미경 광원</td><td>Meiji Techno</td><td>FT191</td><td></td></tr><tr><td>온수 순환기</td><td>Gaymar</td><td>TP-500</td><td>마우스 체온 유지용</td></tr><tr><td>재사용 가능한 발열 패드</td><td>Gaymar</td><td>TP-R 22G</td><td>마우스 체온 유지용</td></tr><tr><td>리도카인</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4.0 반원 바늘이 있는 Vicryl 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>J494G</td><td>수술 후 상처 봉합용</td></tr><tr><td>멸균 면 팁 애플리케이터</td><td>Puritan</td><td>25-806-2WC</td><td>탈모 크림 및 흡수액 도포용</td></tr><tr><td>탈모 크림</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>베타</td>딘 <td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6.0 꼰 실크 봉합</td>사 <td>Teleflex Medical</td><td>4-S</td><td>수술 중 대퇴 동맥 분리용</td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨</td><td>다양한</td><td></td><td>조직 관개용</td></tr><tr><td>젤 눈 윤활제</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 페트리 접시</td><td>Pyrex</td><td>3160-60</td><td>대퇴 동맥용 수확</td></tr><tr><td>10% 완충 포르말린</td><td>다양한</td><td></td><td>대퇴 동맥 고정용</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>다양한</td><td></td><td>대퇴 동맥 고정용</td></tr><tr><td>Bouin의 유체</td><td>전자 현미경 과학</td><td></td><td>Movat의 펜타크롬 염색용</td></tr><tr><td>알시안 블루, 1%</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-01</td><td>Movat의 펜타크롬 염색용</td></tr><tr><td>알칼리성 알코올</td><td>전자 현미경 과학</td><td>26385-02</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>Orcein, 0.2%</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-03</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>헤마톡실린 알코올성, 5%</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-04</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>염화철, 10%</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-05</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>Lugol의 요오</td>드 <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-06</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>Woodstain 스칼렛 산 푹신 작업 용액</td><td>전자 현미경 과학</td><td>26385-07</td><td>Movat의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>아세트산, 0.5%</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>Movat</td><td>의 다양한의 펜타크롬 염색</td></tr><tr><td>포스 포 텅스텐 산, 5 %</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-09</td><td>Movat의 펜타 크롬 염색</td></tr><tr><td>알코올 사프란, 6 %</td> <td>전자 현미경 과학</td><td>26385-10</td><td>Movat의 펜타 크롬 염색</td></tr></tbody></table>

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

풍선 혈관 성형술 및 스텐트 삽입술을 포함한 경피적 중재술은 폐색성 혈관 질환이 있는 혈관의 혈류를 회복하는 데 사용되었습니다. 이러한 치료법은 혈류의 빠른 회복으로 이어지지만, 이러한 기술은 베어 메탈 스텐트 및 혈관 성형술의 경우 재협착으로 인해 제한적으로 남아 있으며, 약물 용출 스텐트의 경우 치유가 감소하고 혈전증의 위험이 증가할 수 있습니다. 재협착의 주요 병태생리학적 기전은 혈관 평활근 세포의 활성화와 동맥 스트레칭 및 손상으로 인한 염증으로 인한 내막 증식입니다. 유전자 변형 마우스에서 동맥 손상을 유발하는 수술은 손상에 대한 혈관 반응에 대한 기계론적 연구에 유용하지만 크기가 작고 적절한 크기의 장치가 없기 때문에 마우스 모델에서 수행하기가 기술적으로 어려운 경우가 많습니다. 우리는 생쥐의 대퇴 동맥에서 내피 탈수와 동맥 스트레칭을 유도하여 강력한 신생강 증식을 생성하는 수술 기술에 대한 두 가지 접근 방식을 설명합니다. 첫 번째 접근법은 대퇴 동맥의 근육 가지에 동맥 절개술을 만들어 혈관 접근을 얻는 것입니다. 와이어 손상 후 이 동맥 분지가 동맥 절개술을 닫기 위해 결찰됩니다. 두 번째 접근법은 대퇴 대퇴동맥에 동맥 절개술을 만들고 나중에 국소 소작을 통해 폐쇄합니다. 이 방법은 더 큰 혈관을 통한 혈관 접근을 허용하며, 결과적으로 더 작은 마우스에 사용할 수 있는 기술적으로 덜 까다로운 절차를 제공합니다. 동맥 손상 방법 중 하나에 따라 손상된 동맥 위나 주위에 분해성 약물 전달 패치를 배치하여 치료제를 전달할 수 있습니다.

와이어 부상에 따라, 신생 내막의 증식은 시간이 지남에 개발하고 일반적으로 14-28일 후 검사한다. 그림의 조직 학적 결과를 그림과 같이 마우스의 내막 증식증의 강력한 세대에이 작품 리드에 설명 된 기술은 3. 손상되지 않은 대퇴 동맥은 그대로 탄성 얇은 판과 일반 두께와 둘레를 시연 할 예정이다. 부상 대퇴 동맥은 내막의 증식을 보여 탄성 얇은 판을 분해하고 나중에 지점에서 재 내피 세포를 시연 할 예정이다. 재 내피 세포 주위 이십일일 전형적 완료 그러나 이것은, 주사 전자 현미경을 사용하여 마우스의 배경 균주에 의존하며, 바람직하게, 에반 블루 염료를 사용하여 얼굴 제제 도중에 측정 내피 섹션 마커 또는 대한 면역 염색을 이용하여 평가할 수있다 또는 동맥의 얼굴 엔 준비에 공 초점 현미경으로 면역 염색. 17, 18 내막 증식증의 정량을 위해 그것은동맥의 손상 영역의 길이를 따라 잠재적 인 변동을 고려하기 위해 손상된 동맥을 따라 3 개 사...

우리는 생쥐의 대퇴 동맥에 와이어 손상을 일으켜 신내막 증식을 유도하는 수술 기법을 설명하며, 이는 재협착 억제를 위한 치료 화합물의 혈관 주위 전달을 위한 모델 테스트 시스템으로 사용됩니다.

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

이 절차의 전반적인 목표는 대퇴 동맥의 근육 가지를 결찰하거나 양쪽 혈관의 정상적인 흐름을 회복하는 동안 대퇴 동맥의 내피를 손상시키고 벗겨내는 것입니다. 이것은 먼저 둔기 절제와 실크 봉합사로 대퇴 동맥과 근육 가지를 분리함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 근육 가지에 동맥을 만든 다음 대퇴 동맥을 손상시키기 위해 코일 와이어를 삽입합니다.마지막 단계에서는 혈관을 닫고 혈류를 근육 가지로 되돌립니다. 궁극적으로, 조직학적 염색은 실험 시점의 손상에 대한 반응으로 동맥의 내막 증식을 시각화하는 데 사용됩니다. 관심 지점.기존 기술에 비해 이 기술의 주요 장점은 우리 방법을 사용하면 대퇴 동맥의 근육 가지가 절차가 끝날 때 결찰되지 않는다는 것입니다. 그래서 우리는 기존 기술로는 너무 작은 쥐를 대상으로 수술을 할 때 부분 소작을 사용하는 것에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다. 이것이 바로 우리가 부분 소작을 사용하여 혈관을 닫고 대퇴 동맥을 열어 두는 방법을 만들도록 영감을 준 것입니다.먼저 작은 수술용 가위를 사용하여 마취된 성인 마우스의 대퇴 동맥 위 피부를 구부리게 절개합니다. 절개 부위에 자기 고정기를 삽입한 다음 주변 조직을 퉁명스럽게 절개하여 대퇴 동맥을 찾습니다. 식염수에 적신 멸균 솜 끝이 있는 어플리케이터로 조직을 적신 다음 집게를 사용하여 동맥을 더 격리합니다.다음으로, 끝이 가는 집게를 사용하여 정맥이나 신경이 손상되지 않도록 주의하면서 혈관 다발에서 신경을 부드럽게 분리합니다. 신경을 자극하지 않도록 조심스럽게 다발에서 신경을 밀어냅니다. 그런 다음 대퇴 동맥에서 대퇴 정맥을 부드럽게 분리하고 대퇴 분기점을 찾습니다.분기점 바로 원위부에 있는 대퇴 동맥 아래에 6.0 실크 봉합사를 고리를 끼우고, 지혈로 고정하여 동맥으로의 혈류를 제한한 다음, 분기 고리 뒤쪽에 대퇴 동맥 아래에 두 번째 6.0 실크 봉합사를 삽입하고, 동맥 루프의 위치를 잡는 데 도움이 되는 것처럼 지혈로 봉합사에 고정합니다. 대퇴 동맥의 근육 가지 아래에 두 개의 봉합사가 더 있습니다. 그들을 예쁘게 하고 다른 지혈기로 고정하십시오.그런 다음 더 많은 식염수로 조직을 적십니다. 분기 후 대퇴 동맥 아래에 봉합사 하나를 고리로 만들고 지혈로 고정하여 대퇴 동맥 와이어 손상을 수행합니다. 먼저 근위 봉합사를 위로 당겨 동맥으로 들어가는 혈류를 제한합니다.그런 다음 원위부와 분지 지혈기를 약간 당겨 동맥 이절개 부위

murine-model-femoral-artery-wire-injury-with-implantation

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마이크로 컴퓨터 단층 촬영 영상에 대한 Microfil와 허혈성 뒷발과 혈관의 관류에 삼투의 약물 전달 (Drug Delivery)

우리는 병변 부위에 이식 팔주 배아 뇌간 신경 줄기 세포 후 T4 척수 가로로 쥐 심혈관 매개 변수를 기록하기 위해 무선 원격 측정 시스템을 사용하기위한 프로토콜을 제시한다. 텔레 메 트리 정확하게 의식이 자유롭게 이동 척수 손상 쥐의 심장 기능을 평가하는 첨단 기술이다.

무선 원격 측정 시스템은 척수 절개 및 배아 신경 세포 이식 줄기와 흰쥐의 심장 혈관 기능을 모니터링 할 수

재 협착 마우스 대퇴 동맥 와이어 손상 모델 기술적 도전이다. 이 프로토콜에서 우리는 성공적으로 재 협착의 연구에 대한 일관성있는 신생 내막을 유도하는 와이어 부상을 수행하기위한 주요 기술 세부 사항은 필수 보여줍니다.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

이 프로토콜은 하이드로겔 시스템과 피브린 기반 접착제를 사용하여 심근 경색의 줄기 세포 치료를 위한 불량한 세포 생착의 한계를 완화하는 것을 목표로 합니다. 이 접근법을 사용하면 경색 후 세포와 조직의 접촉을 유지할 수 있어 손상 부위에서 유익한 제제의 치료 잠재력을 높일 수 있습니다.

하이드로 겔은 구축 및 쥐 심근 경색 모델에서 치료를 제공하기 위해 접착제 접근을 섬유소 기반.

이 연구는 마우스에 있는 가속된 죽상 경화증의 유도를 위한 침략적인 절차를 기술합니다. 전기 또는 극저온 유도 된 상해를 사용하는 다른 방법에 비해, 기계적 으로 인한 상해는 재변 치료 후 restenosis의 인간의 상태를 모방하고 관련된 분자 메커니즘의 연구에 이상적입니다.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

우리는 직경이 작은 정맥이나 동맥에 사용할 수 있는 심낭 패치 혈관 성형술 모델을 확립했습니다. 이 모델은 정맥 및 동맥 신내강 증식 형성을 비교하는 데 사용할 수 있습니다.

쥐 대동맥 또는 하대 정맥에 혈관 성형술 패치

이 프로토콜은 심부전 모델링하는 경질 마우스의 에피카듐에 3D 생체 인쇄 패치를 이식하는 것을 목표로합니다. 그것은 마취에 관한 세부 사항을 포함, 수술 가슴 개폐, 왼쪽 전방 내림차순 (LAD) 관상 동맥의 영구 결찰 및 심장의 경각진 영역에 생체 인쇄 패치의 적용.

심근 경색의 뮤린 모델에서 3D 생체 인쇄 패치의 이식

백혈구와 혈소판의 모집은 동맥 형성 동안 측부 동맥의 효과적인 성장에 필요한 필수 구성 요소를 구성합니다. 다광자 현미경은 동맥 형성 중 백혈구 모집 및 유출을 연구하기 위해 생체 내에서 높은 시공간 분해능과 더 적은 광독성으로 세포 역학을 추적하는 효율적인 도구입니다.

쥐 뒷다리 모델에서 동맥 형성 중 백혈구 모집을 모니터링하기 위한 다광자 생체 내 이미징

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

여기에서는 대퇴 동맥 문합을 위한 쥐 모델을 제시하여 연구자들에게 혈관 문합 협착증을 연구하고 시뮬레이션할 수 있는 귀중한 동물 모델을 제공합니다. 이러한 발전은 이 질환의 기저에 있는 병태생리학에 대한 이해를 증진하고 혈관 질환에 대한 보다 정확하고 효과적인 연구를 촉진하는 데 매우 중요합니다.

대퇴동맥 해부성 협착증에 대한 쥐 모델 개발

이 글은 쥐의 하행 대동맥에 생 체 내 원격 측정 임플란트를 삽입하는 단계별 프로토콜을 제시하여, 심혈관 지표, 핵심 체온, 동물 활동을 심증 흉추 손상 전후로 지속적이고 장기적으로 모니터링할 수 있게 합니다.

생체 내 척수 손상 쥐 모델에서 장기 심혈관 매개변수, 온도, 활동을 기록하는 텔레메트리

배우세요 쥐 대퇴 동맥 와이어 부상 기법을 통해 혈관 재형성 및 신내막 과형성을 연구하는 방법을. 이 모델은 혈관 주위 약물 전달 및 재협착 억제 치료제 개발에 활용됩니다.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

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